La tecnologia diagnostica molecolare si distingue da vari metodi di rilevamento per la sua eccezionale sensibilità e specificità. Tuttavia, i reagenti diagnostici liquidi convenzionali soffrono di svantaggi come spese di trasporto elevate e una durata di conservazione limitata, che ne limitano l'utilità. In risposta alle mutevoli esigenze del mercato e ai progressi tecnologici, sono emersi reagenti per test diagnostici molecolari liofilizzati. I prodotti liofilizzati offrono diversi vantaggi rispetto ai reagenti per test liquidi tradizionali, tra cui:
- Stabile a temperatura ambiente - la struttura tridimensionale è fissa, il che può garantire la stabilità dell'enzima e del sistema di reazione a temperatura ambiente. Non c'è bisogno di trasporto a catena del freddo e conservazione in frigoriferi o celle frigorifere, il che può prolungare la durata di conservazione dei prodotti.
- Facile da usare- Non c'è bisogno di ripetuti congelamenti e scongelamenti, di erogare liquidi, ecc.
- Costi ridotti- Non c'è bisogno di trasporto a catena del freddo e di stoccaggio in congelatore, riducendo di fatto i costi di trasporto e stoccaggio.
- Alta precisione- Un micronucleo liofilizzato viene utilizzato in una reazione per ridurre l'errore di composizione durante la preparazione del reagente, accorciare i tempi di funzionamento, prevenire la perdita di attività biologica durante la preparazione del liquido e migliorare sostanzialmente la precisione.
- Uso flessibile- Non vi sono limiti al numero di campioni: è possibile caricare anche un solo campione.
Gli enzimi molecolari convenzionali o le premiscele incorporano spesso alte concentrazioni di glicerina come agente crioprotettivo e stabilizzante. Tuttavia, la presenza di glicerina nel reagente può interrompere l'integrità strutturale dell'acqua, rendendo difficile l'eliminazione efficace dell'acqua. Ciò, a sua volta, ha un impatto negativo sulla struttura e sulla stabilità del prodotto liofilizzato. Pertanto, quando si opta per la liofilizzazione, è consigliabile selezionare reagenti privi di glicerolo.
Inoltre, in applicazioni particolarmente sensibili alla composizione dei reagenti, come la PCR digitale, l'utilizzo di enzimi privi di glicerina ad alta concentrazione può ulteriormente mitigare l'influenza del glicerolo sulla reazione PCR digitale. Questo approccio non solo riduce al minimo l'interferenza, ma amplia anche il potenziale per ottimizzare il sistema di reagenti di rilevamento della PCR digitale.
YEASEN Senza glicerolo soluzione enzimatica molecolare
YEASEN ha creato una piattaforma completa di produzione e ricerca e sviluppo di enzimi molecolari senza glicerina e ha ottenuto una produzione su larga scala di numerosi enzimi molecolari senza glicerolo attraverso la selezione dei materiali, il controllo ambientale, l'ottimizzazione dei processi e la garanzia della qualità.
- Prova del processo di dialisi
Ottimizzazione del processo di dialisi per un volume fisso di enzima glicerina:
- Screening per il tampone di dialisi ottimale per diversi enzimi molecolari;
- Screening di soluzioni di conservazione stabili per diversi enzimi molecolari per consentire la conservazione a lungo termine a 4℃ o -20℃.
- Amplificazione del processo di filtrazione a flusso tangenziale
Sulla base dello screening del processo di dialisi, è possibile determinare i componenti ottimali del tampone di dialisi e le loro soluzioni di conservazione ottimali. Successivamente, il processo di filtrazione a flusso tangenziale (noto anche come UFDF) può essere utilizzato per la sostituzione del tampone di soluzione.
I fattori cruciali nello sviluppo del processo di filtrazione a flusso tangenziale ruotano attorno alla scelta della formula della soluzione di stoccaggio, della formula della soluzione di lavaggio e filtrazione, nonché della pressione transmembrana e della portata applicate durante la filtrazione. YEASEN ha stabilito un approccio standardizzato per la filtrazione a flusso tangenziale, consentendo la rapida determinazione dei volumi di lavaggio e filtrazione e dei parametri di tempo in base al contenuto di glicerina desiderato nell'enzima molecolare target. Questo approccio aiuta a risparmiare sia sui materiali che sui tempi.
- Controllo di qualità
I vari processi di preparazione sopra descritti sono progettati per soddisfare i diversi requisiti per volumi e tipi di prodotto diversi. Per valutare la stabilità del prodotto in vari lotti e all'interno dello stesso processo, YEASEN ha sviluppato un sistema completo di caratterizzazione dei parametri di prestazione. Questo sistema consente una valutazione approfondita dell'impatto delle misure senza glicerolo da più prospettive. I metodi di caratterizzazione comprendono la quantificazione delle proteine, la valutazione dell'attività enzimatica (tasso di recupero), l'analisi del contenuto di glicerina, la valutazione del contenuto di agente protettivo e la valutazione delle prestazioni enzimatiche, tra gli altri.
Prodotti enzimatici molecolari senza glicerolo YEASEN
YEASEN ha adottato un metodo di preparazione di enzimi molecolari senza glicerolo per produrre enzimi senza contenuto di glicerina da quelli inizialmente contenenti glicerina. Attualmente, possiamo fornire quantità sostanziali di materie prime enzimatiche senza glicerolo adatte per applicazioni qPCR/RT-qPCR e LAMP/RT-LAMP. Queste materie prime sono progettate per la liofilizzazione nei test diagnostici, mantenendo nel contempo lo stesso livello di qualità e prestazioni delle loro controparti liquide.
Prodotti enzimatici molecolari senza glicerolo
Le premiscele qPCR sono state preparate utilizzando SÌ ... 14316ES E-Taq DNA polimerasi e corrispondenti enzimi privi di glicerolo, rispettivamente, e il modello di 105, 104 e 103 copie/mL sono state amplificate contemporaneamente. I risultati hanno mostrato che l'effetto di amplificazione del 14316ES privo di glicerolo era coerente con quello del 14316ES contenente glicerina. controparte. Il test di stabilità accelerato di 14316ES è stato eseguito a 37℃. I risultati hanno mostrato che le prestazioni di espansione di 14316ES erano coerenti con quelle del controllo non accelerato dopo 54 giorni di trattamento accelerato a 37℃. I risultati di cui sopra hanno mostrato che non vi era alcuna differenza nelle prestazioni dell'enzima privo di glicerolo e di quello contenente glicerina. controparte e la stabilità era buona.
- Prodotti liofilizzati RT-qPCR: accelerati a 50℃ per 25 giorni, i prodotti liofilizzati hanno morfologia e prestazioni stabili
Yeasen 14316ES è stato preparato in una soluzione premiscelata RT-qPCR, che è stata liofilizzata e testata per la stabilità accelerata a 50℃ per 25 giorni. Allo stesso tempo, 105, 104 e 103 sono state amplificate copie/mL del modello pseudovirus del nuovo coronavirus.I risultati hanno mostrato che la morfologia del prodotto, il valore Ct e il valore di fluorescenza non hanno subito variazioni significative prima e dopo la liofilizzazione e che il prodotto liofilizzato presentava una buona stabilità.
Figura 4: Dati del test di stabilità accelerata dei prodotti liofilizzati RT-qPCR- Prodotti liofilizzati RT-LAMP: accelerati a 45℃ per 30 giorni, i prodotti liofilizzati hanno morfologia e prestazioni stabili
Il premiscelato RT-LAMP è stato preparato con YEASEN 14405ES e 11297ES, e il test delle prestazioni è stato eseguito dopo la liofilizzazione. Il foro di reazione positivo era arancione e il foro di reazione negativo era magenta, il che mostrava un grande contrasto, e il risultato è stato chiaramente interpretato. Inoltre, la morfologia dei prodotti liofilizzati non è cambiata in modo significativo dopo 30 giorni di accelerazione a 45℃. I risultati hanno mostrato che il prodotto liofilizzato era stabile nella forma e nelle prestazioni.
Informazioni sul prodotto
| Classificazione | Nio sono | Numero di catalogo |
| Prodotti enzimatici senza glicerolo per qPCR/RT-qPCR | Kit Hifair™ Lyo Multiplex RT-qPCR in un unico passaggio -11831ES | 11831ES |
| Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA polimerasi, senza glicerolo | 14316ES | |
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Prodotti enzimatici senza glicerolo per RT-LAMP | Trascrittasi inversa Hifair® III, 600U/μl, senza glicerolo | 11297ES |
| Bst Plus DNA polimerasi liofilizzata (60 U/μL, senza glicerolo) | 14405ES |