概要
宿主細胞の残留 DNA は、生物製剤の製造にかかわるプロセス関連の不純物であり、生物製剤の有効性を低下させるだけでなく、感染性や腫瘍形成性などの安全性上の懸念を引き起こす可能性があります。そのため、各国の規制当局は、生物製剤中の残留 DNA の量に制限を設けています。
現在の WHO および FDA のガイドラインでは、完成品の残留 DNA を 1 回投与あたり 10 ng 以下とすることを推奨しており、FDA では生物製剤の宿主細胞 DNA の残留 DNA は 1 回投与あたり 100 pg 以下とすべきであるとも述べています。欧州薬局方の一般原則では、生物製剤の残留 DNA 制限のほとんどが 1 回投与あたり 10 ng 以下と規定されていますが、個々のワクチンの残留 DNA 制限はより厳しく、たとえば、A 型肝炎の不活化ワクチンの残留 DNA は 1 回投与あたり 100 pg 以下、B 型肝炎のワクチンの残留 DNA は 1 回投与あたり 10 pg 以下とされています。 2020年版中国薬局方第3部では、細胞マトリックスで製造された生物学的製剤のDNA残留量は1回あたり100 pgを超えてはならず、細菌または真菌マトリックスで製造されたワクチンのDNA残留量は1回あたり10 ngを超えてはならないと規定されています。
また、外来DNA残留物の測定方法については、各国の薬局方でも指導勧告が出されています。米国薬局方2017年版USP40-NF35一般規定1130では、外来DNA残留物の測定方法として、DNAプローブハイブリダイゼーション、閾値法、リアルタイム定量PCR法の3つの方法が規定されています。欧州薬局方は、リアルタイム定量PCR法と免疫酵素法を提案しており、これらは宿主細胞内の残留DNAを定量するための2つの感度の高い分析法です。中国薬局方2020年版の3つの一般規則3407でも、宿主細胞DNA残留物の検出方法として、DNAプローブハイブリダイゼーション、蛍光染色、定量PCR法が規定されています。
その中で、qPCR法は感度、配列特異性、精度が非常に高く、バイオ医薬品業界のプロセス研究や完成品の品質管理において信頼性の高い検出手段を提供できるため、現在では各生物学的製品メーカーが好む検出方法となっています。
イェーセンバイオテクノロジー残留DNA検出キット
特徴
高感度: LLOD が 0.05fg/µL と低い蛍光プローブ qPCR 法に基づいて開発されました。
高精度:サンプルスパイク回収率は 70% ～ 130% の範囲です。
高い特異性:無関係な DNA との交差反応がないため、検出時の偽陽性が減少します。
規制への準拠: Chp、USP、ICHQ2(R1) およびその他の要件に従って完全に検証され、中国および海外の規制基準に準拠したパフォーマンス。
監査に協力: 製品生産は ISO13485 品質システム標準に準拠しており、完璧な監査文書を備えています。
品質保証:キットの原材料はすべて独自に開発されており、qPCR ミックスおよびその他の酵素製品は超クリーンな酵素工場で製造されています。
応用
抗体医薬品宿主細胞残留不純物検出ワクチン宿主細胞残留不純物検出
組み換えタンパク質医薬品宿主細胞残留不純物検出
仕様
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テストおよび検証プログラム |
参照基準または要件 |
注記 |
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1. キット標準（参照標準） |
国家基準または準備された基準へのベンチマーク |
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2. 線形範囲 |
標準曲線の範囲 |
マニュアルまたは実際の状況を参照してください（例：30fg/μL〜300pg/μL） |
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2 位 |
≥0.98 (Ps |
中国薬局方 2020 年版 3407 総則における HCD の要件 |
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スロープ |
-3.1~-3.8 (Ps |
中国薬局方 2020 年版 3407 総則における HCD の要件 |
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増幅効率 |
90%~110%（（Ps対応傾き-3.1~-3.6、業界内要件） |
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3. 正確さ |
国家標準DNAからの逸脱 |
＜15% |
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サンプルスパイク回収率 |
50%~150%（業界内要件70~130%） |
中国薬局方 2020 年版 3407 総則における HCD の要件 |
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4. 精度 |
繰り返し可能 |
CV＜15% |
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中精度 |
CV＜15% |
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5. 特産品 |
外来DNAへの干渉なし |
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6. 定量化の限界 |
fg/μLレベル |
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7. 安定性 |
凍結と解凍の繰り返し |
10回 |
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加速安定性 |
2〜8℃ 30日、37℃ 14日 |
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有効期間 |
-20°Cで2年間保管 |
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数字
高感度: LLOQ は 0.3 fg/µL まで、LLOD は 0.05 fg/µL まで。
1.CHO宿主細胞残留DNA検出キット（3G）の直線範囲は3fg/μL～300pg/μL、R 2 =1、増幅効率は99.29%、各濃度の検出値のCVは<15%でした。
図1. CHO DNA（3G）の較正グラフ（左）と増幅曲線の線形マッピング（右）
2. 標準化されたサンプルの最低濃度ポイントで、3fg/uL 以下の濃度で CHO DNA (3G) を検出します (濃度ごとに 10 回反復)。結果は、0.3 fg/uL 以上の濃度では CV が 20% 未満であること、つまり CHO 宿主細胞 DNA 残留物アッセイ キット (3G) の定量限界が 0.3 fg/uL であることを示しました。
図3. 0.05fg/μL CHO DNA（3G）qPCRアッセイ結果
高い特異性: 他の宿主細胞 DNA との交差反応性はありません。
CHO DNA（3G）と親和性の高いマウス種のゲノムDNA、および生物製剤の製造に一般的に使用される細胞のゲノムDNAのCHO DNA検出試薬への干渉を評価したところ、干渉群と対照群の増幅曲線は重なり、干渉は見られませんでした（以下のグラフは、マウス、HEK293、および大腸菌ゲノムDNAのCHO DNA検出試薬への干渉データを順に示したものです）。
図4. CHO DNA（3G）キットによる干渉実験の結果
製品情報
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分類 |
商品番号 |
製品名 |
仕様 |
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サンプル前処理 |
18461ES |
25T/100T |
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18467ES |
MolPure® Mag48 サンプル調製キット FN |
3×16T/6×16T |
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核酸抽出装置 |
80511ES |
48チャンネル自動核酸抽出装置 |
48 フラックス |
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残留DNA検出 |
41307ES |
50T/100T |
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41308ES |
50T/100T |
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41310ES |
SV40LTA&E1A 残留DNA検出キット |
50T/100T |
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41317ES |
ハンセヌラ ポリモルファ宿主細胞 DNA 残留物検出キット |
50T/100T |
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41319ES |
MDCK 宿主細胞 DNA 残留物検出キット |
50T/100T |
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41323ES |
プラスミドDNA残留物検出キット |
50T/100T |
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41324ES |
S. cerevisiae 宿主細胞 DNA 残留物検出キット |
50T/100T |
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41325ES |
ヒト宿主細胞DNA残留物検出キット |
50T/100T |
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41328ES |
ピキア パストリス宿主細胞 DNA 残留物検出キット |
50T/100T |
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41330ES |
Sf9 およびバキュロウイルス DNA 残留検出キット |
50T/100T |
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41331ES |
50T/100T |
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41332ES |
50T/100T |