UCF.ME™ UltraNuclease は、全能性ヌクレアーゼ、広域スペクトル ヌクレアーゼ、非限定的阻害エンドヌクレアーゼとも呼ばれ、Serratia Marcescen に由来しますが、その後
1. 全能性ヌクレアーゼとは何ですか?
2. 全能性ヌクレアーゼの使用シナリオは何ですか?
3. 全能性ヌクレアーゼに必要な利点は何ですか?
4. よくある質問
5. 関連製品
1. 全能性ヌクレアーゼとは何ですか?
全能性ヌクレアーゼは、一本鎖、二本鎖、線状、天然、および変性核酸を含む、広範囲の核酸形態を分解する能力を持つ遺伝子組み換えエンドヌクレアーゼです。これらは、3 ～ 5 塩基の長さの 5'-一リン酸オリゴヌクレオチドを生成し、特定の塩基認識は示しません。これらの多用途ヌクレアーゼは、さまざまな条件で強力な安定性と消化活性を示し、サンプルまたは製品内の核酸残留物を除去するのに非常に効率的です。これにより、サンプルの純度と製品の生物学的有効性が向上し、全能性ヌクレアーゼは、科学研究、ワクチン、およびタンパク質や多糖類医薬品などの産業で好まれる酵素製剤となっています。
さらに、全能性ヌクレアーゼは、ワクチン、抗体、細胞療法、その他の生物学的製品の製造中に核酸を除去する上で重要な役割を果たし、治療用最終製品中の残留核酸が 1 回あたり 10 pg を超えてはならないという FDA 規制への準拠を保証します。核酸を分解することで、全能性ヌクレアーゼは細胞溶解物の粘度を下げ、ウイルス、AAV ベクター、封入体などの細胞由来粒子の精製中に溶液濾過/限外濾過プロセスを容易にします。これにより、処理が合理化され、遠心分離が改善され、沈殿物と上清の分離効率が向上し、クロマトグラフィー精製の有効性が高まり、最終的に収量と製品の純度が向上します。
2. 全能性ヌクレアーゼの使用シナリオは何ですか?
UltraNuclease には幅広い用途があり、具体的な使用シナリオは次のとおりです。
2.1 ウイルス精製（レンチウイルス、AAV、組み換えアデノウイルスワクチン、不活化ウイルス、腫瘍溶解性ウイルスなど）
バイオメディカル分野におけるウイルスの利用は、ワクチン、細胞療法、遺伝子療法、その他さまざまな分野に渡って大幅に拡大しています。ウイルス産生を担う宿主細胞は、主に連続継代細胞 (CCL) です。CCL は、制御されない成長の遺伝的素因を示し、無制限に増殖する能力を有しています。しかし、CCL からの残留 DNA が存在すると、制御されないヒト細胞の増殖による腫瘍形成などの潜在的なリスクが生じる可能性があります。さらに、これらの残留 DNA 断片には感染性ウイルスゲノムが含まれている可能性があり、腫瘍形成とともに感染リスクも懸念されます。したがって、生物学的製品中の残留 DNA を管理し、その安全性を確保するには、厳格な管理措置が不可欠です。この点で、当社の UCF.ME™ UltraNuclease は、ウイルス精製のための安全なソリューションを提供します。
塩は、タンパク質やウイルスの凝集を緩和し、タンパク質やその他の細胞成分から DNA と RNA を分離する上で重要な役割を果たします。非特異的エンドヌクレアーゼである Salt Active UltraNuclease は、高塩濃度で最適な活性を示します。高塩濃度条件では、酵素は放出された DNA と RNA にアクセスしやすくなり、それらの分解が促進されます。高塩濃度環境で活性が高まるヌクレアーゼは、精製プロセスを強化するのに効果的です。Salt Active UltraNuclease は、細胞上清と溶解液の粘度を下げるために使用でき、高塩濃度条件下での精製効率を高めます。この酵素は、宿主核酸残基をピコグラムレベルまで減らすため、ウイルス精製、ワクチン製造、タンパク質および多糖類医薬品の製造など、さまざまな生物学的製品用途のパフォーマンスと安全性が向上します。
2.2 大腸菌で発現した組み換えタンパク質の精製
大腸菌で発現した特定のタンパク質は、凝集して封入体になる傾向があり、宿主 DNA と絡み合うことが多いため、精製プロセスが複雑になります。その結果、破裂した細菌細胞は高粘度になり、タンパク質の精製効率が大幅に低下します。ただし、超音波破砕中に細菌溶液に 10～50 U/mL の UCF.ME™UltraNuclease を導入し、破砕完了後にサンプルを 37°C で 30 分間または 4°C で一晩インキュベートすると、細菌溶液の粘度を効果的に下げることができます。これにより、精製プロセスの効率が大幅に向上します。まとめると、タンパク質の効率的な精製には、当社の UCF.ME™ UltraNuclease をご利用ください。
2.3 細胞凝集を防ぐ
近年、免疫アッセイにおける凍結保存された末梢血単核細胞（PBMC）の使用が劇的に増加しています。PBMC細胞の最大の特徴は、蘇生後に非常に凝集しやすいことです。これにより、細胞の品質が低下し、テスト結果が信頼できないものになりがちです。細胞を蘇生させる際、適切な濃度（25～50 U/mL）のUCF.ME™UltraNucleaseを培養培地に加え、細胞を共培養することで、細胞の凝集を効果的に防ぐことができます。したがって、当社のUCF.ME™ UltraNucleaseを最大限に活用して、成功の可能性を高めることができます。
3. 全能性ヌクレアーゼに必要な利点は何ですか?
3.1 幅広い用途
UCF.ME™ UltraNuclease は、さまざまな実験条件下でさまざまな形態の DNA および RNA を切断および分解することができ、さまざまな生物学的製品中の残留核酸の除去に適用できます。
3.2 高純度、高酵素活性
当社の UCF.ME™ UltraNuclease の場合、酵素純度は 99% 以上 (HPLC)、酵素活性は 1.5*106 U/mg 以上 (一般的な基質の絶対定量法を使用) です。
3.3 強い適応力
UCF.ME™ UltraNuclease は、保存および凍結融解において高い安定性を備えています。UCF.ME™ UltraNuclease を -20 °C、4 °C、37 °C で保存し、酵素活性の傾向を検出します。37 °C に 2 週間置いても、酵素活性に大きな変化はありませんでした。一方、酵素の安定性を確保するために、ドライアイスとアイスパックを組み合わせて UCF.ME™ UltraNuclease をお客様の元に輸送します。また、耐性が強く、さまざまな動作条件に適応できます。
3.4 薬局方への準拠
UCF.ME™ UltraNuclease は UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) で製造されており、超クリーン酵素の一種です。超クリーン酵素とは何でしょうか? これは、HCD、HCR、HCP、DNASE FREE、RNASE FREE、プロテアーゼ残留物なし、微生物残留物なし、病原体なし、動物由来、抗生物質汚染なし、エンドトキシン残留量極低、酵素活性高、高純度などの品質基準を達成した分子酵素です。したがって、当社の製品は安全かつ確実に信頼できます。
3.5 GMP生産
UltraNuclease 生産の全プロセスは GMP 生産工場で完了し、品質検査計画は薬局方方式に厳密に準拠しており、研究開発から生産までの大規模な需要を満たしています。
UCF.ME™ UltraNuclease のパートナー —— UltraNuclease ELISA キット
通常の精製手順では、UCF.ME™ UltraNuclease は不純物として簡単に除去されます。UCF.ME™ UltraNuclease の残留物を検出するために、YEASEN はサンプル中の UCF.ME™ UltraNuclease の残留物を正確に検出できるサポート UltraNuclease ELISA キットを開発しました。このキットは、直線性、再現性、回収率、特異性に優れています。
ウルトラヌクレアーゼ ELISA キット
直線範囲は0.047〜3 ng/mLで、R2は0.99を超えています。バッチ間の再現性が良好で、サンプルに固定濃度のUltraNucleaseを加え、3つの異なるバッチのELISAキットを使用して検出しました。ヌクレアーゼ濃度が3〜0.186 ng/mLの場合、検出回収率は70％〜110％で、CVは10％未満です。さらに、異なる濃度のUltraNucleaseの模擬サンプル回収率はすべて70％〜130％で、他のブランドよりも優れています。また、8つの共通サンプルに対するUltraNuclease抗体の非特異的結合を評価した強い特異性もあります。干渉グループとコントロールグループの結果は重複しており、干渉は見られませんでした。
UltraNuclease の DMF 申請に続き、YEASEN は米国 FDA から塩活性ウルトラヌクレアーゼの DMF を取得しました。
出願番号は次のとおりです。
| 番号 | 製品名 | 出願番号 |
| 1 | ウルトラヌクレアーゼ | MF037298 |
| 2 | ソルトアクティブウルトラヌクレアーゼ | MF037815 |
4. よくある質問
Q1: UltraNuclease はどのステップで追加しますか?
A: 扱っているサンプルによって異なります。ウイルスの精製では、一般的にウイルスの清澄化後に追加されます。大腸菌タンパク質の精製では、細胞を溶解するときに追加できます。細胞凝集を扱う場合は、細胞との共培養のために培地に直接追加できます。
Q2: 反応温度が37℃に達しない場合はどのように使用すればよいですか?
A: UltraNuclease の酵素活性は、温度、処理時間、酵素活性単位によって影響を受けます。温度が 37°C に達しない場合は、酵素の量を適切に追加するか、インキュベーション時間を延長することができます。
Q3: UltraNuclease はプロテアーゼ阻害剤と互換性がありますか?
A: 互換性はありますが、多くのプロテアーゼ阻害剤には EDTA が含まれていることに注意してください。EDTA が 1mM を超えると、EDTA は一部のヌクレアーゼの活性を阻害します。
Q4: UltraNuclease を除去するにはどうすればよいですか?
A: TFF、透析、クロマトグラフィーカラムなどの方法で除去できます。
Q5: UltraNuclease ELISA キットは、他のブランドの全能性ヌクレアーゼ残基の検出にも使用できますか?
A: お勧めしません。ELISA キットは UltraNuclease に基づいて完全に開発されており、UltraNuclease を正確に定量できます。他のブランドの多能性ヌクレアーゼは、配列や製造プロセスの点で UltraNuclease と異なる場合があり、テスト結果が不正確になる可能性があります。
5. 関連製品
表1 関連製品
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製品名 |
製品コード |
仕様 |
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20157ES25/60/80/90 |
25KU/100KU/1MU/5MU |
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20159ES25/60/80/90 |
25KU/100KU/1MU/5MU |
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36701ES59 |
96T |
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| ソルトアクティブ ウルトラヌクレアーゼ ELISA キット | 36703ES96 | 96T |