2차 항체란 무엇입니까?
2차 항체는 1차 항체에 결합할 수 있는 항체입니다. 주로 1차 항체의 존재를 감지하는 데 사용됩니다. 1차 항체는 항원에 특이적으로 결합하고 2차 항체는 1차 항체에 특이적으로 결합합니다. 즉, 1차 항체의 Fc 영역 또는 Fab 단편은 항원으로 작용하여 신체가 항체를 생성하도록 자극할 수 있습니다. 즉, 1차 항체는 주로 IgG 계열 면역글로불린이므로 2차 항체는 항-IgG 항체입니다.
2차 항체의 역할
1차 항체는 표적 단백질에 특이적으로 결합하고, 1차 항체는 발광 물질이나 발색 그룹으로 표지되어야 합니다. 1차 항체가 단백질에 결합하는지 육안으로는 볼 수 없습니다. 그러나 1차 항체는 비교적 특이적이며, 각각은 높은 비용으로 표지됩니다. 1차 항체에 결합할 수 있고 검출 가능한 표지(예: 형광, 방사성, 화학 발광 또는 발색 그룹)가 있는 표지된 2차 항체를 사용하는 것이 일반적입니다. 따라서 현재 설계는 일반적으로 1차 항체를 검출하기 위한 검출 가능한 표지가 있는 2차 항체를 갖는 반면, 1차 항체는 기질을 인식합니다. 이런 식으로, 1차 항체가 기질에 결합하면 2차 항체를 통해 검출할 수 있습니다.
예를 들어, ECL 발광 원리는 다음 과 같습니다. ECL 기질에는 H2O2 와 루미놀(및 그 유도체)이 존재하고, 이것들이 HRP(양고추냉이 과산화효소)의 작용으로 형광을 방출합니다.
2차 항체 사용 시 주요 사항
2차 항체는 포유류(보통 염소, 말, 당나귀, 노새, 기니피그 등)를 1차 항체 종의 특정 하위 유형의 면역글로불린 IgG(예: 토끼, 쥐)로 면역시켜 생성되는 항체이므로 2차 항체는 1차 항체의 특정 종과 하위 유형에만 결합합니다. 예를 들어, 양 항마우스(2차 항체)는 마우스 단일 클론(1차 항체)에 특이적으로 결합하고 토끼 다클론 또는 쥐 단일 클론에는 결합하지 않습니다.
2차 항체의 결합 마크
실험 방법에 따라 2차 항체에 대한 결합 그룹이 달라지는데, 주로 효소(양고추냉이 퍼옥시다아제/HRP 및 알칼리성 인산가수분해효소/AP), 형광 그룹(FITC, 로다민, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3 등), 비오틴, 금 입자 등이 있습니다. 일반적으로 HRP 표지 2차 항체는 WB, ELISA, IHC와 같은 실험에 권장되고 비오틴 표지 2차 항체는 IHC에 권장되는 반면 Alexa Fluor 488, FITC, PE와 같은 형광 표지는 IF, FC 등에 사용됩니다.
올바른 2차 항체를 선택하는 방법
a. 면역 블로팅(WB)
전통적인 웨스턴 블로팅의 경우 양파 과산화효소나 알칼리성 인산가수분해효소로 표지된 2차 항체를 선택하고, 형광 웨스턴 블로팅의 경우 해당 형광단으로 표지된 2차 항체를 선택합니다.
b.면역조직화학(IHC/ICC)
B. ICC(면역세포화학)의 경우, 비오틴으로 표시된 2차 항체를 선택하세요.
C. 면역형광법(IHF/ICF)
면역침전법은 종종 Fc 또는 Fab 특이적인 2차 항체를 사용할 수 있는 선택을 허용합니다. 이러한 2차 항체는 중쇄(분자량 55kDa) 또는 경쇄(분자량 25kDa)의 간섭을 피할 수 있습니다.
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참고문헌
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