1 블라스티시딘 S의 작용기전
블라스티시딘 S 는 스트렙토마이세스 그리세오크로모게네스에서 추출한 뉴클레오시드 항생제로, 리보솜에서 펩타이드 결합 형성을 방해하여 원핵 및 진핵 세포에서 단백질 합성을 특이적으로 억제합니다. 작용 기전에는 방출 인자에 의해 유도된 펩티딜-tRNA의 가수분해를 차단하고 tRNA가 큰 리보솜 서브유닛에 결합하는 것을 증가시켜 펩타이드 결합 형성을 어느 정도 억제하는 것이 포함됩니다.
블라스티시딘 S는 빠르고 강력한 작용 모드를 가지고 있으며, 매우 낮은 항생제 농도는 빠른 세포 사멸로 이어질 수 있습니다. 박테리아와 진핵생물에서 단백질 합성을 상당히 억제할 뿐만 아니라 균류, 선충류 및 종양 세포에 대한 활성도 가지고 있습니다. Pltocidin S는 종종 bsr 또는 BSD 유전자를 운반하는 형질 전환된 세포를 스크리닝하는 데 사용됩니다.
2 블라스티시딘 S의 응용
2.1 세포 배양 및 스크리닝
- 포유류 세포: 블라스트 S는 종종 bsr 또는 BSD 유전자를 지닌 형질감염된 세포를 스크리닝하는 데 사용됩니다. B. cereus와 Aspergillus에서 유래한 이러한 내성 유전자는 무란시딘을 무독성 유도체로 전환하여 내성 유전자를 지니지 않고도 세포를 선택적으로 죽일 수 있었으며, 포유류 세포에서 블라스티시딘 S의 작동 농도는 1~50μg/mL 범위였습니다.
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셀 |
속 |
조직 |
문화 매체 |
블라스티시딘 S 농도(μg/mL) |
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헬라 |
인간 |
자궁 |
디엠에이엠 |
3-10 |
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HEK293 |
인간 |
신장 |
디엠에이엠 |
3-10 |
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비16 |
생쥐 |
흑색종 |
RPMI |
3-10 |
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PC1.0 |
햄스터 |
선암 |
RPMI |
10-30 |
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조 |
햄스터 |
난소 |
디엠에이엠 |
5-15 |
- 박테리아 선택: 박테리아 배양에서 권장되는 농도인 25-100 µg/mL에서는 저항 유전자가 없는 세포의 죽음이 빠르게 일어날 수 있습니다.
대장균은 블라스티시딘 S에 대해 약간 덜 민감하지만 형질전환체는 블라스티시딘 S에 내성이 있으며 농도 범위가 50-100μg/mL인 저염 LB 배지(pH 8)로 스크리닝할 수 있으며, 높은 pH는 블라스티시딘 S 활성을 개선합니다.
- 식물 세포: 식물 세포의 유전자 전이 실험에도 적용 가능하며, BSR과 BSD는 일반적으로 스크리닝 마커로 사용됩니다.
2.2 단백질 합성 연구
- 블라스티시딘 SWA는 특히 TLR-2 구성체의 HEK293-T 세포와 HEK-D5 세포에서 펩타이드 결합 형성 수준에서 단백질 합성 과정을 연구하는 데 사용되었습니다.
2.3 항진균 특성
- 또한 일정한 항진균 활성이 있어 벼 도열병 예방 및 치료에 사용할 수 있습니다. 살균 효과는 주로 단백질 합성에 영향을 미치며 포자 발아, 균사 발달 및 포자 형성을 억제할 수 있습니다.
2.4 기타 응용 프로그램
- 블라스티시딘 SHA는 또한 종양 세포의 억제 효과를 연구하는 데 사용되었습니다.
- 또한 저항 유전자인 bls, bsr 또는 BSD를 함유하는 형질전환 세포에 대한 선택제 역할도 합니다.
3 Blasticidin S와 관련된 실험 절차(포유류 안정 형질전환체의 스크리닝)
1) 블라스티시딘 S는 일반적으로 10μg/mL의 농도로 사용됩니다. 세포는 bsr 또는 BSD 유전자를 운반하는 플라스미드로 형질 전환되고 블라스티시딘 S가 포함된 정상 성장 배지에서 배양되어 안정적인 형질 전환체를 선택합니다.
2) 형질감염 후 48시간에 적절한 농도의 Blasticidin S가 포함된 신선한 배지에서 세포를 통과시킵니다(참고: 항생제는 세포가 활발한 분열 단계에 있을 때 가장 효과적입니다. 세포 밀도가 너무 높으면 항생제의 효율성이 감소합니다. 세포를 분할할 때 합류는 25%를 초과해서는 안 됩니다.
3) 3~4일마다 사용된 배지를 제거하고 항생제가 포함된 새로운 배지를 추가합니다.
4) 7일 후, 세포 콜로니 형성을 확인합니다. 숙주 세포 유형과 형질감염/선택 효율성에 따라 콜로니 형성에 1주일 이상 더 걸릴 수 있습니다.
5) 5-10개의 내성 클론을 35mm 세포 배양 접시에 옮기고 선택 배지에서 7일 동안 유지합니다. 그런 다음 세포독성 검정을 수행하여 테스트합니다.
4. 제품 추천
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제품 이름 |
고양이# |
사양 |
모습 |
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블라스티시딘 S CAS：3513-03-9 |
60218ES10 |
10mg |
용액(10 mg/mL，HEPES 완충액，pH 7.5) |
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60218ES50 |
5×10mg |
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60218ES60 |
10×10밀리그램 |
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60218ES80 |
1g(그램) |
분말(사용시 멸균수 또는 완충액으로 5-10mg/mL의 원액을 조제하여 사용) |
5 우리 시약으로 출판된 논문
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. FACT 복합체 억제를 통해 Ewing 육종에서 종양 유전자 EWSR1::FLI1을 표적으로 삼는 치료. Oncogene. 2023년 1월;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022년 11월 10일. PMID: 36357572. (IF: 8.0 )
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN 양성 피드백 루프는 MYCN 증폭 신경아세포종에 대한 고유한 종속성을 나타냅니다. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dec 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568. (IF: 11.3 )
6 관련 제품
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제품 이름 |
고양이# |
사양 |
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시프로플록사신염산염 |
60201ES05/25/60 |
5/25/100g |
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암피실린, 나트륨염 |
60203ES10/60 |
10/100g |
|
독시사이클린 하이클레이트 |
60204ES03/08/25 |
1/5/25g |
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클로람페니콜, USP 등급 |
60205ES08/25/60 |
5/25/100g |
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카나마이신 황산염 |
60206ES10/60 |
10/100g |
|
테트라사이클린 HCl 테트라사이클린 염산염(USP) |
60212ES25/60 |
25/100g |
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반코마이신염산염 |
60213ES60/80/90 |
100mg/1g/5g |
|
젠타마이신 황산염 |
60214ES03/08/25 |
1/5/25g |
|
스펙티노마이신 염산염 |
60215ES08 |
5g |
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플레오마이신(용액 중 20mg/mL) |
60217ES20/60 |
20/5×20mg |
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블라스티시딘 S (블라스티시딘) |
60218ES10/60 |
10/10×10mg |
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니스타틴 |
60219ES08 |
5g |
|
G418 황산염(제네티신) |
60220ES03/08 |
1/5g |
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푸로마이신(용액 10mg/mL) |
60209ES10/50/60/76 |
1×1 /5×1 / 1 0×1 /50×1 mL |
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푸로마이신 디하이드로클로라이드 |
60210ES25/60/72/76/80 |
25/100/250/500mg/1g |
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히그로마이신 B(50mg/mL) |
60224ES03 |
1g(20mL)/10×1g(20mL) |
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히그로마이신 B |
60225ES03/10 |
1/10g |
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에리스로마이신 |
60228ES08/25 |
5/25g |
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티멘틴 |
60230ES07/32 |
3.2/10×3.2g |
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아우레오바시딘 A(AbA) |
60231ES03/08/10 |
1/5×1/10×1mg |
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폴리믹신 B 황산염 |
60242ES03/10 |
1/10뮤 |