--Yeasen TUNEL 분석 키트는 더욱 아름다운 형광을 보여줍니다

TdT 전이효소에 의한 플루오레세인-dUTP의 틈이 난 DNA에 대한 결합은 세포 사멸을 검출하는 가장 일반적인 방법 중 하나이며, 예를 들어 Roche의 In Situ Cell Death Kit은 이 원리에 기반을 두고 있습니다. 제품 내의 TdT 전이효소 활동은 표지 효율에 직접적인 영향을 미칩니다. 효소 생산을 기반으로 하는 Yeasen Biologicals는 효소를 기반으로 하는 고품질 제품을 개발하기 위해 노력하고 있으며, 고객의 고품질 요구 사항을 충족하기 위해 플루오레세인(Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 및 FITC) 표지 Tunel 분석법 3종을 출시했습니다.

현재 120개가 넘는 연구 그룹이 이 제품을 사용하고 있으며 Theranostics, EMBO Molecular Medicine 등 권위 있는 저널에 많은 영문 논문을 게재했습니다.

감지 메커니즘

세포 사멸의 후기 단계에서 염색체 DNA 이중가닥 절단 또는 단일가닥 절단은 많은 수의 끈적끈적한 3-OH 말단을 생성하고, 디옥시리보뉴클레오타이드 말단 전이(TdT) 작용으로 형광물질/효소 표지된 dUTP가 DNA의 3말단에 결합하므로 형광을 검출하여 세포 사멸을 검출할 수 있는데, 이를 디옥시리보뉴클레오타이드 말단 전이효소 매개 닉 엔드 라벨링이라고 합니다. 이 방법을 Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling(TUNEL)이라고 하며 원리는 그림 1에 나와 있습니다.

그림 1: Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase 매개 Nick End Labeling (TUNEL)의 개략도

제품 특징

  • 광범위한 적용 범위

파라핀 포매 조직 절편, 냉동 조직 절편, 배양 세포, 조직에서 분리된 세포에 사용할 수 있습니다.

  • 높은 검출 감도

매우 적은 양의 세포사멸 세포가 검출될 수 있습니다.

  • 낮은 배경 간섭

높은 신호 대 잡음 비율.

  • 관찰의 다양성

형광현미경 관찰, 유동 감지.

데이터 표현

1. 마우스 전지방세포(3T3-L) Tunel 분석

그림 2: 마우스 전지방세포 3T3-L 세포사멸 검출. 첫 번째 행은 음성 대조군을 나타내고 두 번째 행은 양성 대조군을 나타냅니다. 검출 시약: Cat No. 40306 TUNEL 세포사멸 검출 키트(FITC)

2、파라핀 절편 샘플의 터널 검출

그림 3: LY3009120 단독 또는 Vemurafenib 및 Obatoclax와 병용 투여는 피하 이식 종양 모델에서 갑상선 암을 효과적으로 지연시켰습니다. IF=8.8. 샘플 유형: 파라핀 포매 종양 조직(누드 마우스에서 채취). 검출 시약: 카탈로그 번호 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit(Alexa Fluor 488).

3、세포 크롤링의 터널 감지

그림 4: 다양한 하위 그룹의 내피세포 사멸에 대한 황산아연의 효과. 샘플 유형: HUVEC(인간 제대정맥 내피세포). 검출 시약: 카탈로그 번호 40308 TUNEL 사멸 검출 키트(Alexa Fluor 640)

4、유세포분석을 통한 세포사멸 검출

그림 5: PA 치료는 재프로그래밍 동안 세포사멸 발생을 효과적으로 줄일 수 있습니다. IF=3.7. 샘플 유형: iPS 세포. 검출 시약: Cat No. 40307 TUNEL 세포사멸 검출 키트(Alexa Fluor 488).

문헌 인용

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자주 묻는 질문

질문: 비특이적인 형광 표지가 나타났나요?

1) 조직/세포 자체에 높은 수준의 뉴클레아제 또는 중합효소 활동이 있어 평활근 세포와 같은 비특이적 형광 표지가 쉽게 나타날 수 있습니다. 해결책은 세포나 조직을 채취한 직후에 고정하고 이러한 효소가 거짓 양성 반응을 일으키지 않도록 충분히 고정하는 것입니다.

2) 산성 고정제와 같은 부적절한 고정제를 사용하면 거짓 양성 반응이 발생합니다. 신선하게 준비한 4% 중성 파라포름알데히드 고정제를 권장합니다.

3) TUNEL 분석의 반응 시간이 너무 길어 세포 또는 조직 표면을 젖게 유지할 수 없는 경우에도 비특이적 형광이 발생할 수 있습니다. 반응 시간을 제어하고 TUNEL 분석 반응 용액이 샘플을 잘 덮도록 주의하십시오.

Q: 형광 배경이 매우 높은가요?

1) 높은 수준의 전사를 통해 빠른 속도로 분열하고 증식하는 세포는 때때로 핵에서 DNA 절단이 나타나기도 합니다.

2) 여기광에 장시간 노출되면 거짓 양성 반응이 나타납니다.

질문: 라벨링 효율성이 낮나요?

1) 에탄올이나 메탄올로 고정하면 표지 효율이 낮아집니다.

2) 고정 시간이 너무 길어 가교 정도가 너무 높습니다. 고정 시간을 줄이는 것이 좋습니다.

3) 조직 절편이 너무 두꺼워 고정효과가 만족스럽지 못하므로 10μm 이내로 조절하는 것이 좋다.

(4) 형광소광 : 일반 조명 10분에 형광이 심하게 소광되므로 조명작업을 피하는 것이 해결책입니다.

제품 세부 정보

제품 이름

품목번호

사양

Annexin V-FITC/7-AAD 세포사멸 검출 키트

40311ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

Annexin V-FITC/PI 세포사멸 검출 키트

40302ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

Annexin V-PE/7-AAD 세포사멸 검출 키트

40310ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

Annexin V-EGFP/PI 세포사멸 검출 키트

40303ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD 세포사멸 검출 키트

40313ES60

100톤

Annexin V-YSFluor™ 488/PI 세포사멸 검출 키트

40305ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

Annexin V-YSFluor™ 647/PI 세포사멸 검출 키트

40304ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD 세포사멸 검출 키트

40312ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

TUNEL 세포사멸 검출 키트(FITC)

40306ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

TUNEL 세포사멸 검출 키트(YSFluor™ 488)

40307ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

TUNEL 세포사멸 검출 키트(YSFluor™ 640)

40308ES20/50/60

20톤/50톤/100톤

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