미토콘드리아
미토콘드리아는 세포의 에너지 공장이며, 세포 내 산화적 인산화와 아데노신 삼인산(ATP) 합성의 주요 장소로, 세포 활동에 에너지를 제공합니다. 세포 생명 활동에 필요한 에너지의 95%는 미토콘드리아에서 나옵니다. 미토콘드리아는 세포에 에너지를 공급하는 것 외에도 세포 분화, 세포 정보 전달 및 세포 사멸과 같은 과정에 관여하며 세포 성장과 세포 주기를 조절하는 능력을 가지고 있습니다. 따라서 미토콘드리아와 미토콘드리아 막과 같은 분석은 세포 연구에 필수적인 부분입니다.
미토콘드리아 막전위의 정의와 중요성
미토콘드리아 막 전위는 미토콘드리아 내막 양쪽의 전하 분포의 결과이며 정상적인 미토콘드리아 기능을 유지하는 데 중요한 요인입니다. 미토콘드리아에서 전자 전달 사슬은 ATP 합성을 주도하는 산화환원 반응을 통해 양성자 기울기를 생성합니다. 미토콘드리아 막 전위의 안정성은 세포의 에너지 공급과 생존 상태와 직접적으로 관련이 있습니다. 많은 연구에서 미토콘드리아가 세포 사멸과 밀접한 관련이 있음을 보여주었으며, 미토콘드리아 막 전위의 감소는 세포 사멸 연쇄 반응 과정에서 가장 초기의 사건 중 하나로 간주됩니다. 이는 핵에서 세포 사멸적 특징(크로마틴 응축, DNA 절단)이 나타나기 전에 발생하며, 미토콘드리아 막 전위가 붕괴되면 세포 사멸은 되돌릴 수 없습니다. 따라서 미토콘드리아 막 전위의 감소는 세포 사멸의 초기 단계에서 나타나는 특징적인 사건입니다.
JC-1 프로브의 작동 원리
JC-1 은 양이온성 지질 형광 염료로, 미토콘드리아 막 관통 전위의 지표로 사용할 수 있습니다. JC-1은 단량체와 다량체의 두 가지 상태로 존재합니다. 낮은 농도에서는 단량체로 존재하고 녹색 형광을 검출할 수 있으며, 유동 검사법으로 검출할 경우 일반적으로 FL-1 채널(FITC와 동일한 채널)에 있습니다. 높은 농도에서는 다량체로 존재하고 빨간색 빛을 검출할 수 있으며, 유동 검사법으로 검출할 경우 일반적으로 FL-2 채널(PE와 동일한 채널)에 있습니다. JC-1은 양이온성 지질 형광 염료로도 사용할 수 있으며, 미토콘드리아 막 관통 전위 지표로 사용할 수 있습니다. 및 PE 동일한 채널). JC-1 농도의 변화로 인해 단량체와 다량체 사이에 가역적 전이 과정이 형성됩니다.
정상 세포에서 막전위가 정상일 때 JC-1은 미토콘드리아 막 극성을 통해 미토콘드리아로 들어가 농도 증가로 인해 적색 형광 다중체를 형성하는 반면, 세포사멸 세포에서 미토콘드리아 막전위는 탈분극되고 JC-1은 농도가 감소한 미토콘드리아에서 방출되어 녹색 형광 단량체 형태로 역전됩니다. 따라서 녹색 및 적색 형광을 검출하여 미토콘드리아 막전위의 변화를 검출할 수 있습니다.
참고사항: 인터넷에서 인용한 이미지
JC-10 프로브
JC-1의 파생물인 JC-10은 유세포 분석, 형광 현미경 및 마이크로티터 플레이트 기반 형광 분석을 통해 미토콘드리아 막 관통 전위를 결정하는 데 사용되는 전위 의존적 프로브입니다. 건강한 세포에서 JC-10은 미토콘드리아에 선택적으로 축적되어 넓은 여기 스펙트럼을 나타내고 590nm에서 큰 값을 방출하는 붉은 응집체를 생성합니다. 그러나 미토콘드리아 막 관통 전위가 낮은 세포 사멸 및 괴사 세포에서 JC-10은 미토콘드리아 밖으로 확산되어 JC-10 단량체를 생성하여 녹색 방출(525nm)로 이동합니다. 근세포, 뉴런, 손상되지 않은 조직 및 분리된 미토콘드리아를 포함한 다양한 샘플 유형에서 미토콘드리아 막 관통 전위의 지표로 성공적으로 사용되었습니다.
JC-10--JC-1 대체품
- 안정성: JC-10은 수용성 매체에서 용해도가 더 높고 감도가 더 높기 때문에 검출 편향이 적습니다.
- 향상된 신호: JC-10은 JC-1보다 신호 대 배경 비율이 더 높습니다.
- 향상된 민감도: JC-10은 테스트된 모든 세포주에서 미토콘드리아 막 전위 손실의 미묘한 변화를 JC-1보다 더 잘 감지할 수 있습니다.
- 광범위한 적용: JC-10은 쥐의 일차 간세포에 사용될 수 있습니다.
- 편리함: JC-10은 형광 효소 마커, 세포 이미저 및 유세포 분석기와 호환됩니다.
참고사항:. 면포에 의해 유도된 미토콘드리아 막 전위 변화는 JC-10 및 JC-1을 함유한 Jurkat 세포에서 측정되었습니다. Jurkat 세포를 4시간 동안 캄프토테신(10 mM)으로 처리한 후, JC-1 및 JC-10 염색 업샘플링 용액을 웰에 첨가하고 30분 동안 배양했습니다. JC-1 및 JC-10의 응집 및 단량체 형태의 형광 강도는 NOVOstar 효소 라벨러(BMG Labtech)를 사용하여 Ex/Em = 490/525 nm 및 490/590 nm에서 측정되었습니다.
결과 분석
JC-1 단량체를 검출할 때 여기광은 490nm로, 방출광은 530nm로 설정할 수 있다. JC-1 중합체를 검출할 때 여기광은 525nm로, 방출광은 590nm로 설정할 수 있다. 흐름 세포 분석법으로 세포 사멸을 검출했고, 녹색 형광은 FL-1 채널을 통해 검출했고, 적색 형광은 FL-2 채널을 통해 검출했다. FL-1+, FL-2+는 정상 세포이고 FL-1+, FL-2-는 세포 사멸 세포이다.
참고: 이미지 출처는 China Streamline Association 웹사이트 포럼입니다.
의심없이 운영하다
질문: JC-1 미토콘드리아 막 전위 형광 프로브, 이 제품을 조직 절편 염색에 사용할 수 있나요?
대답: 염색하기 전에 세포의 활동을 보장하기 위해 살아있는 조직을 개별 세포로 분해합니다.
질문: JC-1로 염색하기 전에 세포를 고정할 수 있나요?
A: 아니요. JC-1 염료는 전위 의존적 방식으로 미토콘드리아에 축적되며 세포, 조직 또는 정제된 미토콘드리아 막 전위를 감지하는 데 사용할 수 있습니다. 고정화는 전기적 전위를 방해하여 프로브가 미토콘드리아에 축적되지 못하고 특이성이 상실됩니다.
질문: JC-1 작업 용액에 응집된 입자가 있는데 염색하기 전에 원심분리로 이를 제거할 계획입니다. 원심분리에 권장하는 매개변수가 있나요?
A: JC-1 워킹 솔루션은 13,000g에서 약 1~2분 동안 원심 분리할 수 있습니다.
주문 정보
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제품 이름 |
품목번호 |
사양 |
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40705ES03/08 |
1mg/5mg |
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40707ES03/08 |
1mg/5mg |