세포사멸 소개
세포사멸은 세포의 발달 중 또는 특정 요인의 영향을 받을 때 발생하는 프로그램된 세포사멸 현상이며 세포 내 유전자와 그 생성물의 조절에 의해 유발됩니다. 세포사멸 경로에서 사건은 연대순으로 하나씩 발생하여 세포사멸 소포가 나타난 다음 세포사멸이 발생합니다. 세포사멸은 배아 발달 및 형태발생, 조직 내 정상 세포의 안정적인 집단 유지, 신체의 방어 및 면역 반응, 질병이나 중독으로 인한 세포 손상, 노화 및 종양의 발달에 중요한 역할을 하며 잠재적인 치료적 가치가 있습니다.
탐지 원리
정상 세포막의 인지질 분포는 비대칭적입니다. 포스파티딜세린(PS)은 살아있는 세포의 세포막 안쪽 표면에 위치하고, 세포사멸 동안 세포막은 변화를 겪고 PS는 세포막 안쪽 표면에서 세포막 바깥쪽 표면으로 뒤집힙니다. Annexin V는 세포사멸 세포의 표면에 있는 PS를 특이적으로 인식하는 반면, 살아있는 세포의 PS는 세포막 안쪽 표면에 위치하고 Annexin V에 특이적으로 결합할 수 없습니다.
괴사 세포의 PS도 세포막의 안쪽 표면에서 세포막의 바깥쪽 표면으로 뒤집히고, Annexin V도 괴사 세포 표면의 PS를 인식하므로 Annexin V는 괴사 세포와 세포 사멸 세포를 구별할 수 없습니다. 반면 PI 염료는 세포 내 DNA에 결합하여 괴사 세포와 살아있는 세포를 구별할 수 있었습니다. 초기 세포 사멸 세포와 살아있는 세포의 세포막은 여전히 손상되지 않았으며 PI 염료는 세포막을 자유롭게 통과하여 세포로 들어가 DNA에 결합할 수 없으므로 PI 염료는 세포 사멸 세포와 살아있는 세포를 표지할 수 없지만 PI 염료는 괴사 세포의 세포막을 통과하여 세포 내부의 DNA에 결합할 수 있으며 괴사 세포의 PI 염료는 488 nm 레이저에 의해 여기된 후 적색 형광을 방출하여 해당 채널에서 수신됩니다. 따라서 Annexin V와 PI를 동시에 사용하여 살아있는 세포, 초기 세포 사멸 세포 및 후기 세포 사멸 또는 괴사 세포를 구별할 수 있습니다.
그림 2 Annexin V / PI 검출 원리
유세포 분석 검출
FITC의 최대 여기 파장은 488nm, 최대 방출 파장은 525nm이고, FITC의 녹색 형광은 FL1 채널에서 검출됩니다. PI-DNA 복합체의 최대 여기 파장은 535nm, 최대 방출 파장은 615nm이고, PI의 빨간색 형광은 FL2 또는 FL3 채널에서 검출됩니다. 분석은 CellQuest와 같은 소프트웨어로 수행되었으며, FITC를 수평 좌표로, PI를 수직 좌표로 하는 2색 산점도를 그렸습니다. 전형적인 실험에서 세포는 세 가지 하위 집단으로 나눌 수 있으며, 살아있는 세포는 매우 낮은 강도의 배경 형광만 있고, 초기 세포 사멸 세포는 강한 녹색 형광만 있고, 후기 세포 사멸 세포는 녹색과 빨간색 형광으로 이중 염색됩니다.
그림 3 유세포 분석 검출
자주 묻는 질문
질문: Annexin V 세포사멸 검사법은 식물이나 박테리아(원핵생물)에도 적용될 수 있나요?
A: 네, 하지만 식물 세포나 박테리아(원핵생물)에는 세포벽이 있기 때문에 원형질체를 준비해야 합니다. 염색 용액의 특정 투여량은 세포를 담그기만 하면 되고, 염색 시간은 세포마다 약간씩 다릅니다.
질문: 실험 결과는 어떻게 판단하나요?
A: 살아있는 세포(Annexin V-/PI-), 초기 세포사멸 세포(Annexin V+/PI-), 후기 세포사멸 세포 및 괴사 세포는 이중양성(Annexin V+/PI+), 맨핵(Annexin V-/PI+)을 보입니다.
질문: Annexin V와 TUNEL의 차이점은 무엇인가요?
A: 말단 데옥시뉴클레오티딜 전이효소 dUTP 틈 표지(TUNEL)는 세포 내 DNA 단편화 부위를 식별하는 데 사용되는 염색 방법으로, 후기 세포 사멸의 특징적인 특성입니다.
Annexin V 염색은 세포막 비대칭성 상실로 인해 세포 외부에 노출된 PS 잔류물에 결합하여 세포사멸의 초기 단계를 인식합니다.
질문: PI를 검출하지 않고 Annexin V-FITC만을 사용하여 검사를 수행하는 것이 가능합니까?
A: 네, 가능합니다. 핵이 없는 적혈구와 같은 특수 검사 샘플이나 PI 검출을 방해하는 약물인 독소루비신(아드리아마이신)을 사용하는 경우 두 경우 모두 Annexin V-FITC만을 사용하여 검정을 수행할 수 있습니다.
제품 세부 정보
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제품 이름 |
품목번호 |
사양 |
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Annexin V-FITC/7-AAD 세포사멸 검출 키트 |
40311ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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40302ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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Annexin V-PE/7-AAD 세포사멸 검출 키트 |
40310ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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40303ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD 세포사멸 검출 키트 |
40313ES60 |
100톤 |
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40305ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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40304ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD 세포사멸 검출 키트 |
40312ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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40306ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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40307ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |
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40308ES20/50/60 |
20톤/50톤/100톤 |