마이코플라스마 검출, 예방 및 제거 - 모두 한 단계로!
마이코플라스마
마이코플라스마는 마이코플라스마라고도 불리며, 지금까지 발견된 가장 작고 간단한 원핵생물로 직경이 0.1~0.3μm입니다. 필터를 통과할 수 있으며 구형, 막대형, 사상형, 분지형 등 다양한 모양으로 나타나는 높은 다형성을 보입니다. 실험실과 생물제약 생산에서 세포 배양은 마이코플라스마 오염에 취약합니다. 문헌에 따르면, 보관된 세포주에서 마이코플라스마 오염 발생률은 약 15%-35%이고, 생물제약 산업에서는 0.44%-6.70% 범위입니다 [1] .
그림 1: 마이코플라스마의 형태
마이코플라스마 오염의 영향
박테리아와 곰팡이 오염은 비교적 쉽게 감지, 예방, 제거할 수 있지만, 마이코플라스마 오염은 알아차리기 어렵습니다. 10^7-10^9 CFU/ml만큼 높은 성장 밀도에서도 오염의 명확한 징후(탁도나 pH 변화 등)가 없을 수 있습니다. 마이코플라스마 오염은 세포에 다양한 변화를 일으킬 수 있습니다(그림 2 참조).
그림 2: 마이코플라스마 오염 후 세포 상태 변화
마이코플라스마 검출을 위한 응용 시나리오
마이코플라스마 오염의 일반적인 출처
- 세포 간 교차 오염
- 작업 환경이나 실험 장비의 오염
- 실험자의 무균 기술이 부족함
- 배양배지나 기타 시약의 오염
- 세포 준비에 사용된 원래 조직이나 장기가 오염됨.
세포 배양이 마이코플라스마 오염에 직면했을 때 해야 할 일
그림 3: 마이코플라스마 오염에 대한 총체적 솔루션
세포 내 마이코플라스마 오염에 대한 3가지 솔루션
1. 마이코플라스마 검출
1단계 등온 마이코플라스마 검출:
Yeasen의 1단계 등온 마이코플라스마 검출 시약은 고유한 등온 증폭 기술을 사용하여 청자색(음성)에서 하늘색(양성)까지 더 강력한 색상 구별을 제공하여 시각적 식별을 더 쉽게 합니다. 거짓 양성을 제거하기 위한 오염 방지 구성 요소가 포함되어 있습니다.
그림 4: 1단계 마이코플라스마 검출의 작동 과정
PCR 기반 마이코플라스마 검출:
Yeasen의 PCR 마이코플라스마 검출 방법은 기존의 1단계 PCR과 달리 프라이머 쌍을 하나 대신 3개 사용하여 중첩 PCR 증폭을 위해 마이코플라스마의 16S 및 23S 보존 영역을 타겟팅합니다. 이는 비특이성을 줄이는 동시에 민감도를 크게 향상시켜 마이코플라스마의 단 하나의 사본만 검출합니다.
그림 5: 마이코플라스마 농도가 다른 샘플의 PCR 증폭에 대한 겔 전기영동 이미지
그림 6: 다양한 마이코플라스마 농도를 갖는 샘플의 PCR 증폭에 대한 겔 전기영동 이미지
표 1: Yeasen의 1단계 등온 마이코플라스마 검출 시약으로 검출 가능한 마이코플라스마 유형
참고: 파란색 부분은 1단계 등온 검출법과 PCR 방법 모두로 검출 가능한 마이코플라스마 유형을 나타냅니다.
2. MycAway 마이코플라스마 제거 시약(1000×)
MycAway 마이코플라스마 제거 시약(1000×)은 마이코플라스마 성장에 필요한 DNA와 필수 단백질 합성을 억제하여 세포에 해를 끼치지 않고 마이코플라스마를 효과적으로 제거하는 혼합 제형입니다. 세포를 최대한 살리고 마이코플라스마 오염으로 인한 손실을 줄입니다.
그림 7: 세포 제거 효과의 증명
마이코플라스마 제거 시약의 특징:
- 낮은 독성: 세포 독성이 최소이며 세포 생존력 테스트 및 형질 전환과 같은 후속 세포 실험에 영향을 미치지 않습니다 .
- 높은 안정성 : 효능을 유지하면서 장기간 -20°C에서 보관 가능
- 사용이 간편합니다 . 제품을 마이코플라스마에 오염된 배양 배지에 넣고 배양하기만 하면 됩니다.
- 빠른 효과 : 단 3일 만에 눈에 띄는 결과가 나타납니다.
- 광범위 항균 범위 : 대부분의 실험실 마이코플라스마 유형에 효과적입니다.
그림 8: 마이코플라스마 제거 시약의 세포독성 시험 다이어그램
3. 마이코플라스마 예방
제품 정보
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범주 |
제품 이름 |
카탈로그 번호 |
명세서 |
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발각 |
40612ES25/60 |
25/100톤 |
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MycAway™ 마이코플라스마 실시간 qPCR 검출 키트 Hot |
40618ES25/60 |
25/100톤 |
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40601ES10/20 |
10/20 분석 |
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제거 |
MycAway™ 스프레이(사용 준비 완료) |
40605ES02/03 |
1/2×500ml |
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40607ES03/08 |
1/5×1ml(1/5×1ml) |
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방지 |
40608ES03/08 |
1/5×1ml(1/5×1ml) |
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40609ES60 |
100ml |
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40610ES60 |
100ml |