최근 몇 년 동안 전 세계적으로 감염성 질환의 발병률이 증가하고 있으며, 병원균은 점점 더 다양하고 복잡해지고 있습니다. 이 시나리오에서 중요한 과제는 환자의 약 절반이 알려지지 않은 병원균을 가지고 있다는 곤경에 처해 있어 이러한 병원균을 신속하게 진단하는 것이 어려운 과제가 된다는 것입니다. 현재 임상 병원균 검출은 주로 전통적인 배양 방법, PCR 기술, 메타게놈 시퀀싱(mNGS), 병원균 표적 시퀀싱(tNGS)에 의존합니다.
실시간 형광 정량 PCR은 SARS-CoV-2의 핵산 검출에서 두각을 나타냈습니다. 마찬가지로 mNGS는 SARS-CoV-2와의 싸움에 기여한 공로로 주목을 받았으며 임상 환경에서 일상적인 사용으로 전환되었습니다. 시퀀싱 서비스에서 속도, 정확성, 비용 효율성과 같은 PCR과 NGS의 장점을 모두 제공하는 tNGS는 임상 테스트 분야에서 점점 더 주목을 받고 있습니다.
동시에 생물학적 제품의 적용은 생물의학, 생물학적 농업, 바이오에너지, 생물학적 제조, 환경 보호 및 기타 분야로 확대되었습니다. 생물학적 제품의 시장 점유율이 계속 증가함에 따라 정부 기관과 관련 당국은 이러한 제품에 대한 표준화된 품질 관리 시스템과 표준을 수립했습니다. 특히 생물학적 제품에서 숙주 세포의 핵산 잔류물이 존재하는지에 대한 관심이 집중되고 있습니다.
재조합 단백질 약물, 항체 약물, 백신, 세포 및 유전자 치료와 같은 생물학적 제품은 연속적인 균주 또는 세포주를 사용하여 생산되며, 이는 최종 제품에서 숙주 핵산을 보유하게 될 가능성이 있습니다. 잔류 숙주 핵산은 통제되지 않는 세포 증식으로 인해 종양이 형성되거나 바이러스 유전자를 도입하여 면역 반응이 악화되는 등 부정적인 결과를 초래할 수 있습니다. 따라서 효과적인 핵산 잔류물 제거 및 엄격한 잔류물 검출은 생물학적 제품 안전을 보장하고 연구 요구 사항을 충족하는 데 매우 중요합니다. 업계에서는 qPCR/RT-qPCR 방법이 생물학적 제품에서 숙주 핵산 잔류물 검출을 위한 검출 키트를 개발하는 데 널리 사용됩니다.
게다가, 상업적 분자 효소는 일반적으로 E. coli와 같은 재조합 엔지니어링 균주를 사용하여 발현되므로, 이러한 분자 효소에 숙주 게놈 DNA가 존재합니다. 또한, 환경 및 인간 요인은 오염된 DNA를 분자 효소 제품에 도입할 수 있습니다.
병원체 검출 과정에서 오염으로 인한 배경 박테리아 핵산은 풍부도가 낮은 표적 핵산을 가리거나 표적 핵산과 함께 검출될 수 있습니다. 이는 표적 검출의 민감도에 영향을 미치거나 거짓 양성 결과로 이어져 의료 전문가가 내리는 진단 및 치료 결정을 복잡하게 만들 수 있습니다.
숙주 핵산 잔류물 검사를 위한 품질 관리 제품의 개발 및 생산에서, 인간, 생쥐, 대장균, 효모 등을 포함한 잔류 숙주 핵산이 분자 효소에 존재하면 숙주 핵산 잔류물 품질 관리 제품의 정량화에 부정확성이 발생할 수 있습니다. 이는 생물학적 제품 제조 시 잠재적인 안전 위험을 초래합니다.
YEASEN UCF.ME TM 초저잔류 분자효소 용액
배경 박테리아와 숙주 핵산 잔류물 간섭 문제를 해결하기 위해 YEASEN은 UCF.ME TM 초저잔류 분자 효소에 대한 완전한 R&D 및 생산 플랫폼을 구축했습니다. 그리고 재료 선택, 환경 제어, 공정 최적화 및 품질 보증을 통해 다양한 UCF.ME TM 초저잔류 분자 효소의 대량 생산을 달성했습니다.
YEASEN UCF.ME TM 초저잔류 분자효소 제품
YEASEN은 qPCR/RT-qPCR, NGS 라이브러리 구축과 같은 분자 효소의 완전한 세트를 개량했습니다. 동시에 UCF.ME™ 초저잔류 공정을 사용하여 분자 효소 제품을 처리하고, qPCR/RT-qPCR 및 NGS를 위한 고성능 및 초저숙주잔류 분자 효소 원료의 전체 세트를 제공하여 검출 정확도를 개선할 수 있습니다.
표 1 YEASEN UCF.ME TM 초저잔류 분자효소 제품 목록
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제품 분류 |
제품 이름 |
카탈로그 번호 |
대장균 gDNA 품질관리 기준 |
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qPCR/RT-qPCR용 UCF.ME TM 초저잔류 효소 제품 |
Hieff UCF.ME TM Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
14314ES |
＜0.005부/U |
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Hifair UCF.ME TM V 역전사효소(200 U/μL) |
14608ES |
＜0.005부/U |
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UCF.ME TM 쥐 RNase 억제제(40 U/μL) |
14672ES |
＜0.001부/U |
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UCF.ME TM 고친화성 RNase 억제제(40 U/μL) |
14675ES |
＜0.001부/U |
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UCF.ME TM 우라실 DNA 글리코실라제(UDG/UNG), 열불안정, 1 U/μL |
14466ES |
＜0.1부/U |
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UCF.ME TM 우라실 DNA 글리코실라제(UDG/UNG), 1 U/μL |
14454ES |
＜0.1부/U |
일부 데이터 프레젠테이션( 예시로 UCF.ME TM Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase)
- 잔류 물 대장균 gDNA ＜0. 00 5부/U
- UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)의 다양한 배치의 대장균 gDNA 잔류물이 검출되었습니다. 결과는 Taq DNA 중합효소의 대장균 gDNA 잔류물이 0.005 사본/U보다 훨씬 낮았음을 보여주었습니다.
그림 1 : UCF.ME TM Taq 효소의 E.coli g DNA 잔류 물 검출 (Cat#14314ES)
- 잔류 플라스미드 DNA가 검출되지 않았습니다.
UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)와 브랜드 A의 Taq DNA 중합효소의 플라스미드 DNA 잔류물이 검출되었습니다. 결과는 브랜드 A의 Taq DNA 중합효소에 플라스미드 DNA 잔류물이 있음을 보여주었습니다. UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)에서는 플라스미드 DNA가 검출되지 않았습니다.
그림 2 : 플라스미드 DNA 잔류물 검출 결과
- 11종의 일반적인 배경세균은 검출되지 않았다.
Pseudomonas aeruginosa , Acinetobacter baumannii , Serratia marcescens , Klebsiella pneumoniae , Stenotrophomonas maltophil , Streptococcus pneumoniae, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus , E. coli , Enterococcus faecalis 의 프라이머와 프로브와 결합된 UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)를 사용하여 qPCR 프리믹스를 제조합니다. NTC(No Template Control)가 검출되었으며, 그 결과 UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)에서 상기 11가지 일반적인 배경 박테리아의 잔류물이 검출되지 않았습니다.
그림 3 : 11가지 일반적인 배경 박테리아의 테스트 결과(공간 제한, Pseudomonas aeruginosa , Acinetobacter baumannii , Serratia marcescens 및 Klebsiella pneumoniae가 예로 표시됨)
- 고객의 테스트 사례 프레젠테이션
상업용 Taq 효소와 YEASEN UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)를 사용하여 고객의 E. coli 특이적 프라이머와 함께 NTC를 검출하였고, 그 결과 상업용 Taq 효소는 22회 반복 실험에서 5회 피크를 나타냈습니다. UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)는 22회 반복 실험에서 피크를 나타내지 않았으며, 이는 UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)가 E. coli gDNA를 검출하지 못했음을 나타냅니다.
그림 4 : E.coli gDNA 잔류 물 검출 결과 (고객 테스트 케이스)
왼쪽: 시중에서 판매되는 기존 Taq 효소, 오른쪽: UCF.ME TM Taq 효소(Cat#14314ES)
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제품 이름 |
카탈로그 번호 |
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호스트 핵산 잔류물 검출 키트 |
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