최근 몇 년 동안 mRNA 기술의 개발 및 응용은 계속해서 주목을 받고 있습니다. mRNA 약물은 항원 단백질을 인코딩하는 mRNA를 인체에 접종하는 것을 포함합니다. 인체 세포 내부의 유전 물질을 활용하여 항원 단백질을 발현하고 합성합니다. 이 과정은 항원 단백질을 통해 신체의 면역 체계를 유도하고 활성화하여 질병을 예방하고 치료하는 것을 목표로 합니다. mRNA 약물은 안전성, 효율성 및 짧은 주기와 같은 장점이 있습니다. 체액성 및 세포성 면역을 동시에 유도할 수 있으며 종양, 감염성 질환, 희귀 질환, 심혈관 질환 등 다양한 적응증에 적용되었습니다.
mRNA 약물 개발의 전체 과정은 대략 여러 단계로 나눌 수 있습니다.
시퀀스 결정 및 설계 - mRNA 시험관 내 전사 - 캡슐화 준비
mRNA 시험관 내 전사(IVT)의 기존 단계는 다음과 같습니다.
플라스미드 DNA 추출 및 선형화 - 플라스미드 DNA 정제 - 시험관 내 전사(공동 전사 캡핑) - 정제 - mRNA 스톡 솔루션
원포트 mRNA 시험관 내 전사(IVT) 프로세스에는 다음이 포함됩니다.
플라스미드 DNA 추출 및 선형화 - 시험관 내 전사(공전사 캡핑) - 정제 - mRNA 스톡 솔루션
현재 대부분의 기존 공정은 IVT 단계 전 효소 절단 후 플라스미드 DNA에 대한 단일 정제 단계를 포함합니다. 성숙한 mRNA 응용 프로그램 개발 센터를 기반으로 하는
공정상의 장점:
- 프로세스 최적화, IVT 단계 감소로 운영이 간소화됩니다.
- 재료 비용이 낮아지고, 절단 후 정화 및 품질 검사가 필요 없게 됩니다.
- mRNA 품질과 수율 유지.
데이터:
1. 수확량 및 무결성 :
1μg의 선형화된 2K, 4K, 9K 플라스미드를 사용하면 원포트 공정으로 150-200μg의 mRNA를 생성할 수 있습니다.
| 길이 | 수확량 | 진실성 |
| 2천 | 200μg | 94.00 % |
| 4K | 185μg | 92.20% |
| 9천 | 150μg | 87.50% |
무결성 테스트는 모세관 전기영동(CE)을 사용하여 2K, 4K 및 9K 길이의 단편의 무결성을 평가하기 위해 수행되었습니다. 2K 및 4K 단편의 무결성은 >92%였고 9K 단편의 무결성은 >87%였습니다.
2. mRNA 캡핑 효율 검출
LC-MS를 사용하여 2K 시퀀스의 캡핑 효율을 평가한 결과, 캡핑 효율이 99.5%인 것으로 나타났습니다.
상단 이미지: HPLC UV 크로마토그램
아래 이미지: 분리된 분자량 스펙트럼
3. mRNA 폴리아데닐화 효율 검출
LC-MS를 사용하여 샘플의 폴리아데닐화 효율성을 검출한 결과, 결과가 정규적으로 분포되어 있음을 보여주었습니다.
상단 이미지: 액체 크로마토그래피 TIC 크로마토그램
아래 이미지: 분리된 분자량 스펙트럼
4. mRNA 발현 검정
기존 공정 (왼쪽, 정제된 선형화된 플라스미드 ) 과 원포트 공정(오른쪽, 정제 되지 않은 선형화된 플라스미드)을 사용하여 합성된 mRNA 산물로 293T 세포를 형질 전환한 결과, 배양 24시간 후 형광 단백질 발현에 차이가 없었습니다.
주문 정보