설명
Hifair ™ 멀티플렉스 원스텝 RT-qPCR 프로브 키트( UDG) Plus )는 RNA를 템플릿으로 하는 멀티플렉스 정량 PCR 키트입니다. 실험 과정에서 역전사와 정량 PCR을 같은 튜브에서 수행하여 실험 작업을 간소화하고 오염 위험을 줄였습니다.
이 키트에서, 첫 번째 가닥 cDNA는 내열성 Hifair TM V 역전사효소에 의해 효율적으로 합성되었고, UNICON ™ HotStart Taq DNA Polymerase에 의해 정량적으로 증폭되었습니다. 이 키트는 주로 최적화된 MP 완충액, 효소 혼합물 등을 포함합니다. 완충액에는 이미 Mg 2+ 와 dNTP가 포함되어 있습니다. 또한, 비특이적 PCR 증폭을 효과적으로 억제하고 다중 qPCR 반응의 증폭 효율을 개선할 수 있는 요소가 추가되어 증폭 효율을 보장하고 최대 다중 증폭 반응을 수행할 수 있습니다. dUTP/UDG 시스템이 추가되어 에어로졸 오염의 위험을 효과적으로 방지합니다.
특징
1. 뛰어난 다 용성 : 병원성 미생물, 인간 유전체, 식물 및 기타 종의 핵산의 qPCR 증폭 및 검출에 적합합니다 .
2. 높은 감도 : 신중하게 최적화된 버퍼 시스템은 최대 250복사본/mL까지 저농도 템플릿의 검출 감도를 향상시킵니다 .
3. dUP/UDG 시스템 : dUTP/열에 불안정한 UDG 오염 방지 시스템을 도입하여 제품의 에어로졸 오염을 효율적으로 분해하고, 거짓 양성 결과를 줄이며, 신뢰성 있는 결과를 보장합니다 .
4. 빠른 프로그램 지원 : 빠른 40분 프로그램과 호환 됩니다 .
5. 뛰어난 안정성: 37℃에서 14일간 안정적이며, 10회 반복 동결 및 해동이 가능합니다 .
구성 요소
구성 요소 |
이름 |
16630ES60 (100톤) |
16630ES80 (1000톤) |
16630ES92 (10000톤) |
16630-A |
5×하이페어 MP 버퍼 |
500 μL |
5 분당 |
50ml (50ml) |
16630-B |
하이페어 효소 혼합 |
100 μL |
1 분당 |
10 분당 |
16630-씨 |
GC-인핸서 |
500 μL |
5 분당 |
50ml (50ml) |
참고 : 1 ) 5 ×Hifair TM MP 버퍼 의 약어입니다 dNTP, dUTP, Mg 2+ , 안정제, 증강제 등이 포함된 Hifair TM V Multiplex One Step RT-qPCR 프로브 버퍼입니다 .
2) Hifair 효소 혼합물은 주로 내열성 Hifair TM V 역전사효소, UNICON TM HotStart Taq DNA 중합효소 및 UDGase를 함유하고 있습니다.
3) GC 인핸서는 선택 사항입니다. GC 인핸서 무료 버전을 찾아보세요: Cat: 16901ES.
4) 16630-A와 16630-B는 각각 16901-A와 16901-B와 동등합니다.
명세서
PCR 방법 |
한 단계 RT-qPCR |
샘플의 종류 |
RNA |
저장
그 제품 ~해야 한다 BE 저장됨 ~에 -25도~-15도 ~을 위한 1 년도.
그림
그림 1. 높은 검출율
지침
1. 반응 조성
구성 요소 |
용량 ( μL) |
최종 집중 |
5×하이페어™ MP 버퍼 |
5 |
1 × |
하이페어 효소 믹스 |
1 |
- |
GC-인핸서 |
0-5 |
- |
프라이머 믹스(10 μM) |
각각 0.4 |
0.16μM(마이크로미터) |
프로브 믹스(10 μM) |
각각 0.2 |
0.08μM(마이크로미터) |
RNA |
1-5 |
- |
RNase 무료 H2O |
25까지 |
- |
주의사항 : 사용 전 반드시 잘 섞어주시고, 격렬한 진동으로 인해 과도한 거품이 생기지 않도록 주의하세요.
a) 프라이머 농도 : 프라이머 멀티플렉스 프라이머를 포함한 믹스의 경우, 상황에 따라 최적 프라이머 농도는 0.1~1.0 μM 사이가 될 수 있습니다.
b) 프로브 농도: 다중 프로브 라벨링 차이 형광 그룹을 포함한 프로브 혼합물, 상황에 따라 최적 프로브 농도는 0.05~0.5 μM 사이가 될 수 있습니다 .
c) 템플릿 희석: qPCR은 매우 민감하므로 템플릿을 희석하는 것이 좋습니다. 제어 Ct 값은 20~35 사이가 적합합니다.
d) 시스템 준비: 필터 요소로 헤드를 분리합니다. 교차 오염 및 에어로졸 오염을 방지합니다.
2. 최적화된 사이클링 프로토콜
반응 단계 |
온도 |
시간 |
주기 |
|
1 |
역전사 |
50° C |
15 분 |
1 |
2 |
초기 변성 |
95도 |
5분 |
1 |
3 |
증폭반응 |
95도 |
15초 |
45 사이클 |
60°C (섭씨 60도) |
30초 c |
참고사항 : a) 역전사 : 온도는 10~15분 동안 42 ℃ 또는 50 ℃를 선택할 수 있습니다 .
b) 증폭반응 : 온도는 설계된 프라이머의 Tm 값에 따라 조절됩니다.
c) 형광 신호 수집 : 장비 설명서의 요구 사항에 따라 실험 절차를 설정하세요.
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