Celtransfectiereagentia zijn routinematige reagentia geworden voor het bestuderen en controleren van genfunctie in eukaryotische cellen. Transfectiereagentia worden veel gebruikt in genfunctieonderzoek, genexpressieregulatie en mutatieanalyse, evenals gentherapie, celtherapie, eiwitproductie en vaccinproductie. Dus wat is transfectie? En hoe kiest u een soort transfectiereagent op basis van uw experimenten?

Welke soorten transfectie zijn er?

De kenmerken van transfectiereagentia van Yeasen

Hoe kiest u een soort transfectiereagens op basis van uw experimenten?

Toepassingsgeval

Referentie voor transfectieomstandigheden

Veelgestelde vragen

Betreft Lezen

Welke soorten transfectie zijn er?

Afhankelijk van of het nucleïnezuur na transfectie in het chromosoom van de gastheercel wordt geïntegreerd, wordt het verdeeld in "transient" (tijdelijke transfectie) en "stable" (stabiele transfectie). De transfectie-efficiëntie, cytotoxiciteit, effecten op normale fysiologie en genexpressieniveaus van verschillende transfectiemethoden zijn verschillend. De principes, toepassingen en kenmerken worden in de volgende tabel vergeleken:

Tabel 1 Vergelijking van verschillende transfectiemethoden

De kenmerken van transfectiereagentia van Yeasen

Voor DNA-transfectiereagentia en RNA-transfectiereagentia, Yeasen Biotechnologie heeft een sterk R&D- en productieteam, optimaliseert voortdurend formules, verbetert productieprocessen en heeft een verscheidenheid aan producten gelanceerd op basis van kationische liposomen en kationische polymeren. Wetenschappelijke onderzoeksinstellingen en ondernemingen bieden een volledig assortiment producten en de productlijn bestrijkt alle gebieden die betrokken zijn bij transfectiereagentia.

• Hoge efficiëntie: geschikt voor tijdelijke transfectie of stabiele transfectie van cellijnen.
• Lage toxiciteit: Getransfecteerde cellen blijven goed levensvatbaar.
• Brede aanpasbaarheid: uitgebreide dekking van veelvoorkomende cellen en moeilijk te transfecteren primaire cellen.
• Eenvoudig te bedienen: geschikt voor medium in aanwezigheid van serum, zonder het medium voor en na transfectie te veranderen.
• Kosteneffectief: economisch en praktisch, hoge transfectie-efficiëntie, lage prijs.

Hoe kiest u een soort transfectiereagens op basis van uw experimenten?

De selectie van transfectiereagentia moet worden gemaakt op basis van de verschillende experimentele doeleinden en experimentele inhoud, zoals de getransfecteerde stoffen, specifieke cellen, gebruiksgemak en andere factoren.

Toepassingsgeval

Hieff Trans™ Liposomale Transfectie Reagens

Hieff Trans™ wordt geleverd in steriele vloeibare vorm. Over het algemeen geldt voor 24-wells plaattransfectie ongeveer 1,5 μL per keer, 1 ml Hieff Trans™ kan ongeveer 660 transfecties uitvoeren; voor een 6-wells plaat, ongeveer 6 μL per keer, 1 ml Hieff Trans™ kan ongeveer 660 transfecties uitvoeren. 160 transfecties;

Voor meer details, zie Vertrouwen in transfectie met Hieff Trans™ Lipofectamine Reagent

Polyethyleenimine Lineair (PEI) MW40000 (snelle lysis)

PEI 40000 is een sterk geladen kationisch polymeer met een moleculair gewicht van 40.000 dat negatief geladen nucleïnezuurmoleculen zeer gemakkelijk bindt, een complex vormt en het complex cellen laat binnendringen. PEI 40000 is een transiënt transfectiereagens met lage cytotoxiciteit, hoge transfectie-efficiëntie en hoge genexpressie-efficiëntie in cellen zoals HEK293 en CHO. Lineaire PEI-transfectiereagentia zijn gevalideerd voor een breed scala aan cellijnen, waaronder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 en HeLa-cellen. De transfectie-efficiëntie is maar liefst 80%~90%.

Voor meer details, zie Nieuwe favoriet voor transfectie —— Lineaire PEI MW 40000, een efficiënter transfectiereagens

Hieff Trans™ in vitro siRNA/miRNA-transfectiereagens

Dit product kan een expressie-efficiëntie van meer dan 90% van 1 nM siRNA bereiken in een breed scala aan cellijnen, waardoor off-target effecten worden vermeden. Geschikt voor transfectie van een verscheidenheid aan cellen, waaronder Hela, MCF-7, HepG2, CHO en andere aanhechtende cellen; en moeilijk te transfecteren suspensiecellijnen, zoals K562 of THP-1 cellen, kunnen een silencing-efficiëntie van 80% bereiken; inclusief enkele primaire cellen, primaire humane fibroblasten en primaire humane hepatocyten, enz., kan een silencing-efficiëntie van 80% worden bereikt.

Referentie voor transfectieomstandigheden

Naast de instructies voor elk product, werken klanten volgens hun specifieke experimentele inhoud, en er zullen verschillende verschillen zijn in de hoeveelheid gebruik. Volgens de in vitro celtransfectieomstandigheden die door klanten zijn gerapporteerd na gebruik van het product, zijn ze voor uw referentie gesorteerd.

Veelgestelde vragen

1 Hieff Trans™ Liposomale Transfectie Reagens

1.1 V: Kan serum aanwezig zijn bij het bereiden van nucleïnezuurtransfectiereagentiacomplexen?

A: De aanwezigheid van serum heeft invloed op de vorming van liposomen. Het wordt aanbevolen om een ​​serumvrij medium (meestal MEM-medium) te gebruiken bij het bereiden van nucleïnezuurtransfectiereagenscomplexen.

1.2 V: Waar moet ik op letten bij het gebruik van Hieff Trans™ Liposomal Nucleic Acid Transfection Reagent?

A:

1) Wanneer de cellen worden getransfecteerd, bedraagt ​​de celdichtheid bij voorkeur 80%-95% en wordt de specifieke plaatdichtheid bepaald op basis van de situatie van de cellen;

2) Door gebruik te maken van DNA met een hoge zuiverheidsgraad kan een hogere transfectie-efficiëntie worden bereikt;

3) Bij de bereiding van transfectiecomplexen moeten DNA en transfectiereagentia worden verdund met het serumvrije medium;

4) Tijdens de transfectie kunnen geen antibiotica aan het medium worden toegevoegd;

5) Reagentia moeten worden bewaard bij 2-8°C en er moet op worden gelet dat het deksel niet herhaaldelijk en gedurende langere tijd wordt geopend;

6) De DNA-concentratie en het aantal kationische liposomenreagentia moeten worden geoptimaliseerd voor het eerste gebruik om de maximale transfectie-efficiëntie te verkrijgen. De verhouding van DNA tot transfectiereagens wordt over het algemeen aanbevolen als 1:2-1:3.

1.3 V: Moet het na transfectie beëindigd worden?

A: Niet nodig. Liposomencomplexen zijn 6 uur stabiel. Als het celmedium niet wordt gewijzigd voor transfectie, is het noodzakelijk om na 4-6 uur over te stappen op een nieuw medium om de voedingsstoffen te garanderen die nodig zijn voor normale celgroei. Als het medium echter is gewijzigd voor transfectie, is het niet nodig om het medium te wijzigen na liposomentransfectie.

1.4 V: Kan co-transfectie van DNA en siRNA worden uitgevoerd? Wat is het effect?

A: Ja, wanneer DNA en siRNA gelijktijdig worden getransfecteerd, zal de siRNA-transfectie-efficiëntie iets slechter zijn.

1.5 V: Kan het transfectiereagens worden gebruikt voor de transfectie van lentivirale verpakkingen?

A: Lentivirale verpakking is mogelijk.

1.6 V: Kunnen suspensiecellen worden getransfecteerd met Hieff Trans™ Liposomaal Nucleïnezuur Transfectiereagens?

A: Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent kan worden gebruikt voor suspensieceltransfectie, zie Protocol voor details. Daarnaast hebben we ook een transfectiereagens geïntroduceerd die specifiek is voor suspensiecellen (Cat.nr.40805, Hieff Trans™ Suspensie Celvrije Liposomale Transfectiereagens)

2 Hieff Trans™ in vitro siRNA/miRNA-transfectiereagens

2.1 V: Moet het transfectiereagens na transfectie worden vervangen?

A: Dit probleem kan worden onderverdeeld in twee gevallen: 1. Als er geen mediumverandering is voor de transfectie, moet het medium ongeveer 6 uur na de transfectie worden vervangen om de voedingsstoffen te garanderen die nodig zijn voor celgroei; 2. Als er een mediumverandering is voor de transfectie, kan er dan worden gewerkt volgens de normale werking van gekweekte cellen? ? Na de vloeistofverandering?

2.2 V: Kunnen transfectiereagentia worden ingevroren?

A: Het kan niet worden ingevroren, omdat het transfectiereagens een PEI-kationisch transfectiereagens is. Invriezen bij lage temperaturen zal de activiteit van het PEI-transfectiereagens vernietigen. Daarom is het het beste om het te bewaren bij 2-8 °C om de beste transfectie-efficiëntie te behouden.

Productinformatie

Enkele van de artikelen die met behulp van onze producten zijn gepubliceerd

[1] Liu R, Yang J, et al. Optogenetische controle van RNA-functie en metabolisme met behulp van geconstrueerde licht-schakelbare RNA-bindende eiwitten. Nat Biotechnol. 2022 3 jan. (IF:55)

[2] Luo J, Yang Q, et al. TFPI is een coloncryptreceptor voor TcdB van hypervirulente clade 2 C. difficile. Cell. 2022 17 maart. (IF:41.582)

[3] Zhou J, Chen P, et al. Cas12a-varianten ontworpen voor een lager off-target-effect op het genoom door middel van strikte PAM-herkenning. Mol Ther. 2022 5 jan. (IF:11.454)

[4] Chen S, Cao X, et al. circVAMP3 drijft CAPRIN1-fasescheiding aan en remt hepatocellulair carcinoom door c-Myc-translatie te onderdrukken. Adv Sci (Weinh). 24 jan. 2022. (IF:16.808)

[5] Gu C, Wang Y, et al. AHSA1 is een veelbelovend therapeutisch doelwit voor cellulaire proliferatie en resistentie tegen proteasoomremmers bij multipel myeloom. J Exp Clin Cancer Res. 2022 6 jan. (IF:11.161)

[6] Zhang Y, Yu X, et al. Splicingfactor arginine/serine-rijk 8 bevordert maligniteit van multipel myeloom en botlaesie door alternatieve splicing van CACYBP en exosoom-gebaseerde cellulaire communicatie. Clin Transl Med. 2022 feb. (IF:11.492)

[7] Qin J, Cai Y, et al. Moleculair mechanisme van agonisme en inverse agonisme in ghreline-receptor. Nat Commun. 2022 13 jan. (IF:14.9)

[8] Tang X, Deng Z, et al.Een nieuw eiwit gecodeerd door circHNRNPU bevordert de progressie van multipel myeloom door de micro-omgeving van het beenmerg en alternatieve splicing te reguleren. J Exp Clin Cancer Res. 2022 8 maart. (IF:11.161)

[9] Xie F, Su P, et al. Engineering Extracellular Vesicles Enriched with Palmitoylated ACE2 as COVID-19 Therapy. Adv Mater. 2021 19 okt. (IF:30.849)

[10] Liang Y, Lu Q, et al. Reactivatie van tumorsuppressor bij borstkanker door enhancer-switching via NamiRNA-netwerk. Nucleic Acids Res. 2021 7 sep. (IF:16.9)

[11] Fan Y, Wang J, et al. CircNR3C2 bevordert HRD1-gemedieerd tumoronderdrukkend effect via het sponsen van miR-513a-3p bij triple-negatieve borstkanker. Mol Cancer. 2021 2 feb. (IF:27.403)

[12] Dai L, Dai Y, et al. Structureel inzicht in de rekrutering van het BRCA1-BARD1-complex naar beschadigd chromatine. Mol Cell. 2021 1 juli. (IF:17.97)

[13] Zhang K, Wang A, et al. UBQLN2-HSP70-as vermindert poly-Gly-Ala-aggregaten en verlicht gedragsdefecten in het C9ORF72-diermodel. Neuron. 2021 16 juni.(IF:17.17)

[14] Li T, Chen X, et al. Een synthetisch BRET-gebaseerd optogenetisch apparaat voor pulserende transgeenexpressie die glucosehomeostase bij muizen mogelijk maakt. Nat Commun. 2021 27 jan. (IF:14.92)

[15] Yan F, Huang C, et al. Threonine ADP-ribosylering van ubiquitine door een bacteriële effectorfamilie blokkeert ubiquitinatie van de gastheer. Mol Cell. 2020 21 mei.(IF:17.97)

[16] Sun X, Peng X, et al. ADNP bevordert neurale differentiatie door Wnt/β-catenine-signalering te moduleren. Nat Commun. 2020 12 juni.(IF:14.911)

[17] Yang X, Wang H, et al. Herprogrammering van ERBB3 en ERK-signalering verleent resistentie tegen FGFR1-remming bij gastro-intestinale kanker met een ERBB3-E928G-mutatie. Protein Cell. 2020 dec. (IF:14.872)

[18] Zou Y, Wang A, et al. Analyse van redoxlandschappen en dynamiek in levende cellen en in vivo met behulp van genetisch gecodeerde fluorescerende sensoren. Nat Protoc. 2018 okt. (IF:13.490)

[19] Hao H, Hu S, et al. Verlies van endotheliale CXCR7 verstoort vasculaire homeostase en cardiale remodellering na een myocardinfarct: implicaties voor de ontdekking van cardiovasculaire geneesmiddelen. Circulation. 28 maart 2017. (IF: 29,69)

Betreft Lezen

Transfectiereagens – Hieff Trans™ en PEI

Lineaire PEI MW 40000, een efficiënter transfectiereagens