Lineaire PEI 40000, een efficiënter transfectiereagens
Over het algemeen is transfectie het proces van het kunstmatig introduceren van nucleïnezuren (DNA of RNA) in eukaryotische cellen. Transfectiereagentia zijn, zoals de naam al aangeeft, een reeks reagentia die betrokken zijn bij transfectie. Tijdens het transfectieproces worden we vaak geplaagd door de lage transfectie-efficiëntie, het smalle toepassingsbereik, de sterke toxiciteit, de omslachtige bediening en de hoge prijs van transfectiereagentia. Dus, is er een transfectiereagent dat deze problemen kan oplossen? Ja, lineaire PEI is de beste keuze om deze problemen op te lossen.
Opmerking:
1. Welke soorten celtransfectie zijn er?
2. Wat is lineaire PEI MW 40000?
3. Hoe werkt lineaire PEI MW 40000?
4. Wat zijn de kenmerken van de PEI MW 40000?
5. Andere transfectiereagentia van
6. Betreft het lezen
1. Welke soorten celtransfectie zijn er?
Voordat we lineaire PEI MW 40000 introduceren, moeten we eerst kort de soorten celtransfectie begrijpen. Celtransfectie is van groot belang voor genetisch onderzoek, eiwitonderzoek en cytologisch onderzoek, wat verwijst naar het proces van het kunstmatig introduceren van nucleïnezuren (DNA of RNA) in cellen met behulp van niet-virale infectiemiddelen. Het hoofddoel van transfectie is om de functie van genen of genproducten te bestuderen, door specifieke genexpressie in cellen te verbeteren of te remmen, of om recombinante eiwitten te produceren. De introductie van exogeen nucleïnezuur zal de kenmerken van cellen veranderen, om zo het doel van transfectie te bereiken, wat nuttig is voor de studie van genregulatie en eiwitexpressie, evenals de synthese en productie van eiwitten.
Celtransfecties kunnen worden verdeeld door chemische, biologische en fysieke methoden, of de verblijftijd van een vreemd gen in de cel. Bij transiënte transfectie kan het geïntroduceerde nucleïnezuur een beperkte tijd in de cel bestaan zonder te repliceren, terwijl bij stabiele transfectie het geïntroduceerde nucleïnezuur wordt geïntegreerd in het gastheergenoom en kan worden uitgedrukt in de nakomelingen van de getransfecteerde cel.
Hoe kiest u de juiste methode, met zoveel verschillende methoden voor celtransfectie?
Er is geen enkele transfectiemethode die geschikt is voor alle celtypen en voldoet aan alle experimentele behoeften. De optimale transfectiemethode moet worden geselecteerd op basis van de vereisten van het celtype en de experimentele omstandigheden.
Momenteel zijn chemische transfectiereagentia nog steeds de meestgebruikte celtransfectiemethoden vanwege hun gebruiksgemak en compatibiliteit met uiteenlopende cellijnen.
2. Wat is lineaire PEI MW 40000?
Polyethyleenimine Lineair (PEI) MW40000 (rapid lysis) is een transiënt transfectiereagens op basis van polyethyleenimine met een moleculair gewicht van 40.000 (PEI 40000). PEI 40000 is een sterk geladen kationisch polymeer dat gemakkelijk negatief geladen nucleïnezuurmoleculen kan binden om complexen te vormen en zo complexen in cellen te introduceren.
Vergeleken met PEI 25000 transfectiereagens is PEI 40000 eenvoudig op te lossen en kan direct in water worden opgelost. Bovendien bevat PEI 25000 4-11% propionylresiduen, die voorkomen dat de polymeerruggengraat zich aan DNA bindt.Maar PEI 40000 is een complete schuurconstructie, dus de prestaties zijn consistent efficiënt.
3. Hoe werkt lineaire PEI MW 40000?
Polyethyleneimine (PEI) is een uitstekende multifunctionele niet-virale vector met goede celadhesie en kan worden gebruikt om cellen onafhankelijk van lysosomale remmers te transfecteren. PEI en DNA worden gebonden door elektrostatische krachten, waardoor het DNA uit de losse spoelachtige structuur in bolvormige deeltjescomplexen instort. De PEI-DNA-complexen zijn meestal positief geladen om elektrostatisch te interacteren met het externe celmembraan en worden opgenomen door endocytose. De geëndocyteerde PEI-DNA-complexen worden vervolgens gevangen door endosomen voor overdracht naar lysosomen voor afbraak. De steeds toenemende interne ionendruk zorgt ervoor dat het endosom opzwelt en scheurt, waardoor vreemd DNA in het cytoplasma vrijkomt. Dit transfectiemechanisme wordt het "protonspons"-effect genoemd.
Studies hebben aangetoond dat PEI-moleculen het oppervlak van de PEI-DNA-complexen kunnen bedekken om DNA voldoende te beschermen tegen afbraak door nucleasen in het cytoplasma, waardoor de doorvoer van vreemd DNA van het cytoplasma naar de celkern wordt verzekerd. Bovendien kunnen PEI-moleculen zich in de fosfolipidemembranen nestelen en stabiele kanalen creëren om DNA naar de celkern te transporteren. PEI-moleculen dringen de celkern niet binnen en spelen een belangrijke rol als DNA-vector.
De genexpressie kan worden gedetecteerd 1-4 dagen nadat het exogene gen is geïntroduceerd in zoogdiercellen. Deze expressie is te danken aan het feit dat een deel van het geïntroduceerde DNA wordt getranscribeerd in mRNA na binnenkomst in de kern, en vervolgens wordt vertaald in het cytoplasma. Omdat deze methode relatief eenvoudig en gemakkelijk te implementeren is, kan door het selecteren van een goede expressievector en transfectiemethode de hoeveelheid eiwitexpressie een hoger niveau bereiken. De PEI-transfectiereagentia zijn op grote schaal gebruikt in wetenschappelijk onderzoek en industriële toepassingen als een algemene transfectiemethode voor het bestuderen van eiwitstructuur en -functie.
4. Wat zijn de kenmerken van de PEI MW 40000?
Als een transiënt transfectiereagens met lage cytotoxiciteit heeft PEI 40000 een hoge transfectie-efficiëntie en een hoge genexpressie-efficiëntie in cellen zoals HEK293 en CHO. Lineair PEI-transfectiereagens is gevalideerd voor een breed scala aan cellijnen, waaronder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 en HeLa-cellen. De transfectie-efficiëntie is zo hoog als 80%~90%. Blijf de prestatiegegevens bekijken:
- Hoge transfectie-efficiëntie, geschikt voor aanhechtende en suspensiecellen
Het is geschikt voor een verscheidenheid aan cellijnen, waaronder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 en HeLa-cellen, enz. De transfectie-efficiëntie is maar liefst 80%~90%.
Tabel 1.Lijst met gevalideerde cellijnen
| Aanhangende cellen (1 μg DNA) | Efficiëntie | Suspensiecellen (2 μg DNA) | Efficiëntie |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85% |
| SF9 | 80%-90% | HEK-293T | 70%-80% |
| HepG2 | 80%-90% | THP-1 | 70%-80% |
| Hallo | 80%-90% |
| |
Figuur 2. PEI 40000 getransfecteerd GFP-plasmide in aanhechtende cellen HEK-293, de transfectie-efficiëntie bereikte 90% na 72 uur (links); PEI 40000 transfecteerde GFP-plasmide in suspensiecellen CHO-K1, en de transfectie-efficiëntie bereikte 80% na 72 uur (rechts)
- Lage toxiciteit
Het zorgt voor de levensvatbaarheid van cellen en verbetert de transfectie-efficiëntie.
Figuur 3. PEI 40000 geleverd door
- De transfectie-efficiëntie is hoger dan die van PEI 25000, die PEI 25000 volledig kan vervangen
PEI 25000 bevat 4-11% propionylresiduen, waardoor de polymeerruggengraat niet aan DNA kan binden. Vergeleken met PEI 25000 is PEI 40000 een complete shedconstructie, dus de prestaties zijn consistent efficiënt.
Figuur 4. HEK-293-cellen werden tijdelijk getransfecteerd met GFP-plasmide met behulp van PEI 25000- en PEI 40000-transfectiereagentia, en de fluorescentie werd na 72 uur waargenomen. Experimentele resultaten: De transfectie-efficiëntie van PEI 40000 is beter dan die van PEI25000.
- Eenvoudige configuratie en korte transfectietijd
Dit product is een instant type, dat direct in water kan worden opgelost zonder pH-aanpassing. En compatibel met serum en antibiotica, geen noodzaak om het medium te veranderen.
- Kosteneffectief, geschikt voor grootschalige transiënte transfectie
Vergeleken met geïmporteerde producten,
5. Andere transfectiereagentia van Yeasen
Tabel 2.Lijst van
| Kat# | Productnaam | Nucleïnezuur type | Celtype |
| 40823ES | DNA | Aanhanger En Suspensiecellen | |
| 40816ES | DNA | Aanhanger En Suspensiecellen | |
| 40820ES | DNA | Aanhanger En Suspensiecellen | |
| 40821ES | DNA | Aanhanger En Suspensiecellen | |
| 40802ES | DNA (<10kb), shRNA | Aaanhangende cellen | |
| 40805ES | Hieff Trans™ ophanging celvrij Liposomale transfectiereagens (Vraag) | DNA (<10kb) | Suspensiecellen (voor gesuspendeerde bloedcellen of immuun cellen, de transfectie-efficiëntie van de huidige chemische reagentia is niet hoog. Elektroporatie of virusmethode worden aanbevolen.) |
| 40806ES | siRNA、miRNA、pre-miRNA, mimic-miRNA, antimiRNA | Aanhechtende en suspensiecellen |
6. Betreft het lezen
Transfectiereagens – Hieff Trans™ en PEI
Productselectiegids voor in-vitroceltransfectiereagens
Referentie:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Vorming en aggregatiegedrag van polyethyleenimine-DNA-complexen. Department of Pharmaceutics, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Nieuwe inzichten in het mechanisme van polyethylenimine-transfectie en hun implicaties voor gentherapie en DNA-vaccins. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Transiënte transfectie van zoogdiercellen met polyethyleenimine (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ