De Maloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) reverse transcriptase is een van de meest gebruikte reverse transcriptases in moleculair biologische laboratoriumprocedures. Om een ​​hogere reverse transcriptie-efficiëntie, betere thermische stabiliteit en een verhoogde snelheid van cDNA-synthese te bereiken, wordt de originele reverse transcriptase vaak genetisch gemanipuleerd. Momenteel vereisen de op de markt verkrijgbare reverse transcriptiereagentia doorgaans reactietijden van 15 tot 30 minuten, wat relatief lang is. Wanneer het aantal reactiemonsters groot is, kan de totale tijdsbesteding dramatisch toenemen. De bestaande 5-minuten reverse transcriptieserieproducten van YESSEN kunnen het reverse transcriptieproces binnen slechts 5 minuten voltooien, wat tijd bespaart en zeer efficiënt is.

Pproduct Ppositioneren	Productnaam	Kat#
Snelle, efficiënte en hoogproductieve reverse transcriptiepremix	Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix voor qPCR	11156ES
Snelle, efficiënte en hoogproductieve reverse transcriptiepremix (met gDNA-verwijdering)	Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix voor qPCR (DNA-digestor plus)	11155ES
Snelle voltooiing van gDNA-verwijdering en reverse transcriptiepremix in één stap	Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix voor qPCR	11151ES
Flexibele Primer Selectie Rapid Reverse Transcription Kit (met gDNA-verwijdering)	Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (zonder kleurstof)	11150ES
Flexibele Primer Selectie Rapid Reverse Transcription Kit (met gDNA-verwijdering en tracking-kleurstof)	Hifair™ AdvanceFast 1e streng cDNA-synthesekit	11149ES

Boutique Aanbeveling Eén

Snelle, efficiënte en hoogproductieve reverse transcriptiepremix (met gDNA-verwijdering) (Cat.nr. 11155ES)

Hoge opbrengst van reverse transcriptie van verschillende sjablonen

Steekproef	293T Cel	Arabidopsis thaliana	Muis	Vislever
11155ES	23.4↓	19.6↓	24.9↓	21.1↓
Merk A	24.9	21.3	27.5	21.3
Merk B	26.1	20.5	27.1	23.1
Merk C	25.7	19.8	27.3	21.9
Merk D	24.3	21.3	28.1	24.5

Figuur. Reverse transcriptie werd uitgevoerd met behulp van RNA-sjablonen van menselijke 293T-cellen, Arabidopsis thaliana, muizenlever en vislever. Merken A, B, C en D zijn allemaal tweestapsdigestie reverse transcriptiereagentia met variërende reverse transcriptietijden van 15 tot 20 minuten. De testresultaten tonen aan dat de Hifair 11155ES 5-minuten reverse transcriptiekit uitblinkt met hogere opbrengsten vergeleken met andere merken, en de Ct-waarden zijn lager.

Boutique-aanbeveling twee

5-minuten eenstaps vertering en reverse transcriptie premix (cat.nr. 11151ES)

Hoge opbrengst van reverse transcriptie

Figuur. Met behulp van humane 293T-cel-RNA als template werden respectievelijk drie genen getest. Merken A, B en C zijn allemaal one-step gDNA removal & reverse transcription reagentia. De testresultaten tonen aan dat met een input van 1 μg en 10 ng Total RNA, de opbrengst van reverse transcriptie met de 11151ES kit superieur is aan andere merken, met kleinere Ct-waarden.

Figuur. Met Arabidopsis thaliana RNA als template zijn merken A, B en C allemaal one-step gDNA removal & reverse transcription reagentia. De testresultaten tonen aan dat met een input van 1 μg en 10 ng totaal RNA, de opbrengst van reverse transcriptie met de 11151ES kit superieur is aan andere merken, met kleinere Ct-waarden.

Uitstekende gevoeligheid

Figuur. Met behulp van menselijk 293T-cel-RNA als template werden genen met 30% GC, 50% GC, 60% GC en 70% GC-inhoud versterkt. Totale RNA-inputs van 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng en 1 μg werden gebruikt voor reverse transcriptie gevolgd door fluorescente kwantitatieve detectie. De resultaten tonen aan dat 11151ES reverse transcriptie kan accommoderen voor RNA-inputs variërend van 100 pg tot 1 μg.

Boutique Aanbeveling Thier

5-minuten Rapid Reverse Transcription Kit(Kat #11149/11150ES)

Hoge gevoeligheid, met een minimale detectielimiet tot 10 pg

Figuur. Met behulp van totaal RNA van 293T-cellen als template werd reverse transcriptie uitgevoerd met 11149ES en werd het resulterende cDNA onderworpen aan qPCR kwantitatieve analyse. De resultaten tonen aan dat 11149ES succesvol RNA-inputs kan reverse transcriberen variërend van 10 pg tot 1 μg, wat nauwkeurige kwantitatieve resultaten garandeert.

Goede amplificatieprestaties, met de langste amplificatie van een fragment van 14 kb

Figuur.Met behulp van totaal RNA van 293T-cellen als template werd reverse transcriptie uitgevoerd met 11149ES en werd het resulterende cDNA onderworpen aan PCR-detectie. De resultaten geven aan dat 11149ES in staat is om cDNA-fragmenten te synthetiseren die variëren van 1 kb tot 14 kb lang, waarbij daaropvolgende PCR bepaalde toepasbare scenario's heeft. Als directe reverse transcriptie van fragmenten van meer dan 10 kb vereist is, wordt aanbevolen om de reverse transcriptietijd te verlengen tot 20-30 minuten om de verwerving van de uiteindelijke fragmenten te garanderen.

Vergelijking van de efficiëntie van reverse transcriptie

Hoeveelheid RNA-invoer	Ct-waarde
	11149ES	Merk A
1 μg	15.2	15.5
100 gram	18.0	18.5
10 gram	21	21.7
1 ng	24.5	25.1
100 pagina's	29.1	29.7
10 pagina's	32.7	34.3

Figuur. Met behulp van totaal RNA van 293T-cellen als template werd reverse transcriptie uitgevoerd met 11149ES en Brand A, waarbij 11149ES de gDNA-verwijderingsstap niet onderging. Het resulterende cDNA werd onderworpen aan kwantitatieve qPCR-analyse. De resultaten tonen aan dat de reverse transcriptietijd voor Brand A 13 minuten was, terwijl deze voor 11149ES 5 minuten was. De kwantitatieve analyse van verschillende producten onthult dat de Ct-waarden voor 11149ES kleiner of vergelijkbaar zijn met die van het concurrerende merk, wat aangeeft dat de reverse transcriptie-efficiëntie van 5 minuten van 11149ES superieur is aan of ongeveer gelijk is aan die van Brand A.

Hoeveelheid RNA-invoer	Ct-waarde
	11149ES	Merk B
1 μg	16.2	17.4
100 gram	19.0	20.5
10 gram	22	23.8
1 ng	26	27.9
100 pagina's	31.4	33.2
10 pagina's	32.9	35.6

Figuur.Met behulp van totaal RNA van 293T-cellen als template werd reverse transcriptie uitgevoerd met 11149ES en Brand B, waarbij 11149ES de gDNA-verwijderingsstap niet onderging. Het resulterende cDNA werd onderworpen aan kwantitatieve qPCR-analyse. De resultaten tonen aan dat de reverse transcriptietijd voor Brand B 20 minuten was, terwijl deze voor 11149ES 5 minuten was. De kwantitatieve analyse van verschillende substraathoeveelheden onthult dat de Ct-waarden voor 11149ES kleiner of vergelijkbaar zijn met die van Brand B, wat aangeeft dat de reverse transcriptie-efficiëntie van 11149ES na 5 minuten superieur is aan of ongeveer gelijk is aan die van Brand B.

Aanbevolen gerelateerde producten

Methode	Pproduct Ppositioneren	Productnaam	Kat#
Kleurstof-gebaseerde qPCR	Hoge specificiteit universele kwantitatieve premix (op basis van kleurstof)	Hoog UNICON™ geavanceerde qPCR SYBR Master Mix	11185ES
	Hooggevoelige universele kwantitatieve premix (op basis van kleurstoffen)	Hoog UNICON™ Universele blauwe qPCR SYBR Master Mix	11184ES
Omgekeerde transcriptie	5 minuten durende one-step digestie en reverse transcriptie premix (voor qPCR)	Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix voor qPCR	11151ES
	Snelle reverse transcriptie van 5 minuten, geschikt voor cDNA-synthese tot 14 kb, met verwijdering van gDNA (voor PCR/qPCR) - Tracerversie	Hifair™ AdvanceFast 1e streng cDNA-synthesekit	11149ES
	Snelle reverse transcriptie van 5 minuten, geschikt voor cDNA-synthese tot 14 kb, met verwijdering van gDNA (voor PCR/qPCR)	Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (geen kleurstof)	11150ES
	Hoogwaardige premix voor de synthese van eerste streng cDNA, met verwijdering van gDNA (voor qPCR)	Hifair™ III 1e streng cDNA-synthese SuperMix voor qPCR (gDNA-digestor plus)	11141ES