- RT-qPCR alimentado por reverso altamente eficiente transcriptase
Transcriptase Reversa (enzima RT) é uma enzima capaz de converter moldes de RNA em DNA complementar (cDNA). Na pesquisa de biologia molecular, a transcriptase reversa é amplamente usada, especialmente desempenhando um papel indispensável no campo de diagnósticos moleculares. Por meio do processo de transcrição reversa, o genoma de RNA dos vírus pode ser convertido em cDNA, que pode então ser amplificado e detectado usando técnicas como qPCR. Essa característica permite o diagnóstico preciso de vírus de RNA, como HIV, influenza A e influenza B.
Figura 1. Diagrama esquemático do processo de transcrição reversa
A busca por reagentes de diagnóstico molecular RT-qPCR que sejam mais rápidos, mais sensíveis e mais fáceis de operar se tornou a principal tendência atual de desenvolvimento. Como uma das principais matérias-primas no processo de RT-qPCR, a transcriptase reversa precisa possuir velocidade de transcrição reversa mais rápida, maior rendimento de síntese e melhor resistência ao calor. Para obter uma transcriptase reversa mais adequada para RT-qPCR,
Figura 2. Esquema da ação da transcrição reversa
Hifair™Transcriptases reversas
| Nome do produto (Número do produto ) | Características do produto | Aplicação recomendada |
| Termicamente estável (até 65°C), adequado para modelos complexos | RT-LÂMPADA | |
| Forte compatibilidade, alta velocidade e alto rendimento de síntese | Um passo RT-PCR/qPCR |
Observação: todas as enzimas mencionadas acima estão disponíveis em formulações de alta concentração ou sem glicerol.
Destacamos agora uma transcriptase reversa usada em reagentes de diagnóstico molecular RT-qPCR: HifairTM V Reverse Transcriptase. Esta enzima se distingue por sua forte compatibilidade, velocidade rápida e alto rendimento de síntese, capaz de suportar temperaturas de reação de até 58°C. É particularmente adequada para o desenvolvimento de reagentes de diagnóstico molecular RT-qPCR.
Demonstração de desempenho do Hifair™ V transcriptase reversa
1. Capaz de suportar uma temperatura de reação de 58 °C, é adequado para a transcrição reversa de modelos complexos de RNA.
Figura 3. A transcriptase reversa de HifairTM V Transcriptase Reversa e a marca T* foram incubadas a 55℃ e 58℃ respectivamente por 30min para detectar a atividade enzimática residual. Os resultados mostraram que HifairTM A transcriptase reversa V ainda conseguiu manter 70% de atividade após incubação a 58℃ por 30 minutos, o que foi muito maior do que a da marca T*.
2. A taxa de detecção de RT-qPCR foi melhor do que a de outras marcas,e tA faixa de detecção foi de 1 pg-1 μg.
Figura 4. Usando 1 pg-1 μg (7 gradientes) de RNA total de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada usando HifairTM V digestão RT-gDNA em uma etapa SuperMix para qPCR (Cat#11142), V*, T*. O cDNA obtido foi analisado quantitativamente por qPCR. Os resultados mostraram que a sensibilidade do 11142ES poderia atingir 1 pg, o que foi melhor do que a de outras marcas.
A biblioteca mutante da transcriptase reversa de Yeasen
Tabela 2. O Guia de seleção de mutantes da transcriptase reversa de
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