A transcriptase reversa, também conhecida como DNA polimerase dependente de RNA, é uma enzima DNA polimerase que transcreve RNA fita simples em DNA. O desempenho da transcriptase reversa afetará diretamente o desempenho final dos reagentes de diagnóstico molecular. Em resposta aos pontos problemáticos dos fabricantes de reagentes de diagnóstico molecular, a Yeasen realizou a transformação direcional na transcriptase reversa. A transcriptase reversa tem excelente desempenho e é bem recebida pelos clientes!

1. Qual é a função da transcriptase reversa?
2. Como escolher a transcriptase reversa?
3. Por que escolher a transcriptase reversa de Yeasen?
4. Produtos relacionados e desempenho
5. Produtos relacionados

1. Qual é a função da transcriptase reversa?

A transcriptase reversa é uma DNA polimerase dependente de RNA. Ela pode transcrever o RNA molde e formar DNA complementar (cDNA). O cDNA fita simples é convertido em DNA fita dupla usando DNA polimerase. Então, as transcriptases reversas são comumente usadas para quantificar o nível de síntese de mRNA quando combinadas com a técnica de reação em cadeia da polimerase, chamada RT-PCR. Ensaios quantitativos de RT-PCR são comumente usados ​​no diagnóstico de doenças. Portanto, a transcriptase reversa desempenha um papel importante na pesquisa científica e na aplicação prática.

2. Como escolher a transcriptase reversa?

As transcriptases reversas comuns são M-MLV e AMV, entre as quais M-MLV é melhor que AMV. Mas as enzimas RT convencionais têm dois sítios ativos, um executando as atividades da polimerase e outro executando a atividade da ribonuclease H. A RNase H é uma endonuclease capaz de degradar a fração de RNA da família dos híbridos DNA-RNA. Portanto, a transcriptase reversa sem atividade de RNase H é benéfica para a síntese de cDNA. Além disso, usar uma versão termoestável de RT é benéfico para diminuir a amplificação de ácido nucleico não específico e minimizar o impacto de estruturas secundárias complexas.

3. Por que escolher a transcriptase reversa de Yeasen?

Yeasen realizou modificação direcional na transcriptase reversa, que remove a atividade da RNase H, melhorando assim a capacidade de síntese de cDNA. Usando tecnologia de evolução de proteína para melhorar a termoestabilidade da transcrição reversa.

A transcriptase reversa de Yeasen não só tem forte capacidade de síntese, mas também uma forte capacidade de tolerância. Além disso, Yeasen tem requisitos rigorosos de qualidade. É a melhor escolha para transcriptase reversa.

4. Produtos relacionados e desempenho

4.1 Resistente a altas temperaturas de 65°C

Usando 500ng de RNA total de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada a 42°C-65°C usando Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Pegue 1 μL de cDNA como molde para amplificar o gene TFRC (4,4kb).

Figura 1. Realizar transcrição reversa a 42°C-65℃

4.2 Compatível com modelos complexos

A temperatura de reação de 55°C pode satisfazer a transcrição reversa de modelos convencionais e modelos de estrutura secundária, e a temperatura de reação de modelos de GC alto pode ser adequadamente aumentada para 65°C.

Figura 2.Adequado para modelos ricos em GC e modelos de estrutura secundária

4.3 Excelente desempenho de extensão

Usando 500ng de RNA total de células 293T como molde e Oligo(dT) como primer, o cDNA foi sintetizado usando Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Pegue 1 μL de cDNA como molde para amplificar 500pb de 5' do gene DY1C1N1 (19,9kb). Os resultados mostraram que a Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase pode sintetizar cDNA de até 19,8kb.

Figura 3. Até 19,8 kb de cDNA podem ser sintetizados

4.4 Síntese rápida

Usando o RNA de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada de acordo com o procedimento padrão no manual, e o tempo de transcrição reversa foi definido de acordo com 5, 10, 15, 30, 45 e 60 minutos, respectivamente. A Transcriptase Reversa Hifair™ III pode sintetizar um cDNA de 6kb em 5 minutos, e sua especificidade e rendimento são superiores aos da marca V.

Figura 4. O cDNA de 6 kb pode ser sintetizado em 5 minutos

4.5 Ampla faixa linear

Usando 5pg-5μg de RNA total de células 293T como molde, o cDNA foi sintetizado usando Hifair™ III Reverse Transcriptase. 1 μL de cDNA foi usado como molde, e qPCR foi realizado nos quatro genes, e os resultados mostraram que as eficiências de amplificação estavam todas entre 98% e 100,10%. Isso mostra que o cDNA pode ser sintetizado eficientemente em uma ampla faixa linear de moldes.

Figura 5. O cDNA pode ser sintetizado eficientemente em uma ampla gama de moldes

4.6 Rigoroso controle de qualidade

Para garantir o desempenho estável da enzima reversa da Yeasen, a Yeasen implementa rigorosamente os requisitos no processo de produção para estabilizar o processo de produção e garantir a estabilidade do lote. Ao mesmo tempo, a inspeção de qualidade é fortalecida para detectar resíduos, incluindo exonuclease, nickase, RNase, etc., para garantir que não haja resíduos, para não afetar os experimentos posteriores.

Figura 6. Detecção de resíduos

5. Produtos relacionados

Os produtos fornecidos pela Yeasen são os seguintes.

Tabela 1. Produtos relacionados

Sobre a leitura

A Diretriz de Seleção da Transcriptase Reversa

YEASEN UDG: O "especialista anti-incrustante" em reações de PCR