Visão geral
O DNA residual da célula hospedeira é uma impureza relacionada ao processo envolvida na produção de produtos biológicos, que não apenas reduz a eficácia dos produtos biológicos, mas também pode representar preocupações de segurança, como infecciosidade ou tumorigenicidade. Portanto, agências reguladoras em vários países impuseram limites à quantidade de DNA residual em produtos biológicos.
As diretrizes atuais da OMS e da FDA recomendam DNA residual em produtos acabados de no máximo 10 ng/dose, e a FDA também declara que o DNA residual no DNA da célula hospedeira de produtos biológicos não deve ser maior que 100 pg/dose. Os Princípios Gerais da Farmacopeia Europeia estipulam que a maioria dos limites de DNA residual de produtos biológicos não deve ser maior que 10 ng/dose, mas os limites de DNA residual de vacinas individuais são mais rigorosos, por exemplo, o DNA residual na vacina inativada contra hepatite A não deve ser maior que 100 pg/dose, e que o DNA residual na vacina contra hepatite B não deve ser maior que 10 pg/dose. A edição de 2020 da Farmacopeia Chinesa, Parte III, estipula que o resíduo de DNA em preparações biológicas produzidas em uma matriz celular não deve exceder 100 pg/dose, e o resíduo de DNA em vacinas produzidas em uma matriz bacteriana ou fúngica não deve exceder 10 ng/dose.
Além disso, para os métodos de determinação de resíduos de DNA exógeno, as farmacopeias nacionais também fornecem recomendações de orientação. A edição de 2017 da USP40-NF35 General Provision 1130 da Farmacopeia dos EUA descreve 3 métodos para a determinação de resíduos de DNA exógenos, que são hibridização de sonda de DNA, método de limiar e método de PCR quantitativo em tempo real. A Farmacopeia Europeia propõe PCR quantitativo em tempo real e métodos imunoenzimáticos, que são 2 métodos analíticos sensíveis para quantificar DNA residual em células hospedeiras. A versão da Farmacopeia Chinesa de 2020 das três regras gerais 3407 também estipula que os métodos de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras são hibridização de sonda de DNA, coloração de fluorescência e PCR quantitativo.
Entre eles, o método qPCR tem sensibilidade, especificidade de sequência e precisão muito altas, o que pode fornecer um meio de detecção confiável para a indústria biofarmacêutica em pesquisas de processos e controle de qualidade de produtos acabados, e agora se tornou o método de detecção preferido para cada fabricante de produtos biológicos.
Biotecnologia Yeasen Kits de detecção de DNA residual
Com base no princípio da qPCR de sonda fluorescente, a
Recurso
Alta sensibilidade: desenvolvido com base no método qPCR de sonda fluorescente com LLOD tão baixo quanto 0.05fg/µL;
Alta precisão: recuperações de picos de amostra na faixa de 70%~130%;
Alta especificidade: sem reatividade cruzada com DNA irrelevante, reduzindo falsos positivos na detecção;
Conformidade com os regulamentos: totalmente validado de acordo com Chp, USP, ICHQ2(R1) e outros requisitos, desempenho de acordo com os padrões regulatórios chineses e estrangeiros;
Cooperar com a auditoria: a produção do produto está em conformidade com os padrões do sistema de qualidade ISO13485, com documentos de auditoria perfeitos.
Garantia de qualidade: as matérias-primas dos kits são todas desenvolvidas de forma independente, e o qPCR Mix e outros produtos enzimáticos são produzidos em uma fábrica de enzimas ultralimpa.
Aplicativo
Medicamentos para anticorposDetecção de impurezas residuais em células hospedeirasVacinasDetecção de impurezas residuais em células hospedeiras
Medicamentos de proteína recombinanteDetecção de impurezas residuais em células hospedeiras
Especificação
| Programa de teste e validação | Normas ou requisitos de referência | Nãonota | |
| 1. Padrões de kit (padrões de referência) | Comparação com padrões nacionais ou Padrões preparados |
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| 2. euInevitável Ranjo | Âmbito da curva padrão | Consulte o manual ou a situação real (por exemplo, 30fg/μL ~ 300pg/μL) |
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| R2 | ≥0,98 (Kits Ps | Requisitos para HCD na Farmacopeia Chinesa 2020 Edição 3407 Disposições Gerais | |
| Declive | -3,1~-3,8 (Kits Ps | Requisitos para HCD na Farmacopeia Chinesa 2020 Edição 3407 Disposições Gerais | |
| Eficiência de amplificação | 90%~110%（（PsInclinação correspondente -3.1~-3.6, Requisitos dentro da indústria） |
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| 3. UMprecisão | Desvio do padrão nacional de DNA | ＜15% |
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| Taxa de recuperação de pico de amostra | 50%~150%（Requisitos dentro da indústria 70~130%） | Requisitos para HCD na Farmacopeia Chinesa 2020 Edição 3407 Disposições Gerais | |
| 4. Precisão | Repetível | CV＜15% |
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| Precisão intermediária | CV＜15% |
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| 5. Sespecialidade | Sem interferência com DNA exógeno |
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| 6. euimitação de quantificação | Nível fg/μL |
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| 7. Sestabilidade | Congelamento e descongelamento repetidos | 10 vezes |
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| Estabilidade de aceleração | 2~8℃ 30 dias, 37℃ 14 dias |
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| Período de validade | -20°C de armazenamento por 2 anos |
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Figuras
Alta sensibilidade: LLOQ tão baixo quanto 0,3 fg/µL, LLOD tão baixo quanto 0,05 fg/µL.
1. A faixa linear do kit de detecção de DNA residual de células hospedeiras CHO (3G) foi de 3fg/μL ~ 300pg/μL, R2=1, a eficiência de amplificação foi de 99,29% e o CV do valor de detecção de cada concentração foi <15%.
Figura 1. Gráfico de calibração de DNA CHO (3G) (esquerda) e mapeamento linear da curva de amplificação (direita)
2. Detectar DNA CHO (3G) no ponto de concentração mais baixo da canção padronizada em concentrações de 3fg/uL e abaixo, 10 réplicas por concentração. Os resultados mostraram que em concentrações de 0,3 fg/uL e acima, o CV foi <20%, ou seja, o limite de quantificação do Kit de Ensaio de Resíduos de DNA de Células Hospedeiras CHO (3G) foi de 0,3 fg/uL.
Figura 3. Resultados do ensaio qPCR de DNA CHO (3G) 0,05fg/μL
Alta especificidade: sem reatividade cruzada com DNA de outras células hospedeiras.
Ao avaliar a interferência do DNA genômico de espécies de camundongos com alta afinidade ao DNA CHO (3G), bem como do DNA genômico de células comumente usadas na produção de produtos biológicos ao reagente de detecção de DNA CHO, as curvas de amplificação do grupo de interferência e do grupo de controle se sobrepuseram e nenhuma interferência foi observada (os gráficos a seguir mostram, em ordem, os dados de interferência do DNA genômico de camundongo, HEK293 e E. coli ao reagente de detecção de DNA CHO).
Figura. 4.Resultados de experimentos de interferência com kit CHO DNA (3G)
Informações do produto
| Categorização | Item nº | Nome do produto | Especificação |
| Pré-tratamento de amostra | 18461ES | Kit de preparação de amostra de DNA residual magnético MolPure® | 25T/100T |
| 18467ES | Kit de preparação de amostra MolPure® Mag48 FN | 3×16T/6×16T | |
| Instrumento de extração de ácido nucleico | 80511ES | Extrator de ácido nucleico automatizado de 48 canais | 48 Fluxos |
| Detecção de DNA residual | 41307ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras Vero (2G) | 50T/100T |
| 41308ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras de E. coli (2G) | 50T/100T | |
| 41310ES | Kit de detecção de resíduos de DNA SV40LTA&E1A | 50T/100T | |
| 41317ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras de Hansenula polymorpha | 50T/100T | |
| 41319ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras MDCK | 50T/100T | |
| 41323ES | Kit de detecção de resíduos de DNA plasmídico | 50T/100T | |
| 41324ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras S. cerevisiae | 50T/100T | |
| 41325ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras humanas | 50T/100T | |
| 41328ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras Pichia pastoris | 50T/100T | |
| 41330ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de Sf9 e Baculovirus | 50T/100T | |
| 41331ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras HEK293 (3G) | 50T/100T | |
| 41332ES | Kit de detecção de resíduos de DNA de células hospedeiras CHO (3G) | 50T/100T |