A tecnologia de diagnóstico molecular se distingue de vários métodos de detecção devido à sua sensibilidade e especificidade excepcionais. No entanto, os reagentes de diagnóstico líquidos convencionais sofrem de desvantagens como altas despesas de transporte e uma vida útil limitada, o que restringe sua utilidade. Em resposta às necessidades de mercado em evolução e aos avanços tecnológicos, surgiram reagentes de teste de diagnóstico molecular liofilizados. Os produtos liofilizados oferecem várias vantagens sobre os reagentes de teste líquidos tradicionais, incluindo:
- Estável à temperatura ambiente - a estrutura tridimensional é fixa, o que pode garantir a estabilidade da enzima e do sistema de reação em temperatura ambiente. Não há necessidade de transporte em cadeia fria e armazenamento em refrigeradores ou armazenamento a frio, o que pode estender a vida útil dos produtos.
- Fácil de usar- Não há necessidade de congelamento e descongelamento repetidos, distribuição de líquidos, etc.
- Custo reduzido- Não há necessidade de transporte em cadeia fria e armazenamento congelado, reduzindo efetivamente os custos de transporte e armazenamento.
- Alta precisão- Um micronúcleo liofilizado é usado em uma reação para reduzir o erro de composição durante a preparação do reagente, encurtar o tempo de operação, evitar a perda de atividade biológica durante a preparação do líquido e melhorar fundamentalmente a precisão.
- Uso flexível- Não limitado pelo número de amostras, uma amostra também pode ser carregada.
Enzimas moleculares convencionais ou pré-misturas frequentemente incorporam altas concentrações de glicerina como um agente crioprotetor e estabilizador. No entanto, a presença de glicerina no reagente pode romper a integridade estrutural da água, tornando desafiador eliminá-la efetivamente. Isso, por sua vez, tem um impacto prejudicial na estrutura e estabilidade do produto liofilizado. Portanto, ao optar pela liofilização, é aconselhável selecionar reagentes sem glicerol.
Além disso, em aplicações que são particularmente sensíveis à composição do reagente, como PCR digital, a utilização de enzimas livres de glicerina de alta concentração pode mitigar ainda mais a influência do glicerol na reação de PCR digital. Essa abordagem não apenas minimiza a interferência, mas também amplia o potencial para otimizar o sistema de reagente de detecção de PCR digital.
YEASEN sem glicerol solução de enzima molecular
A YEASEN estabeleceu uma plataforma abrangente de P&D e produção de enzimas moleculares sem glicerina e alcançou produção em larga escala de diversas enzimas moleculares sem glicerol por meio da seleção de materiais, controle ambiental, otimização de processos e garantia de qualidade.
- Teste do processo de diálise
Otimizando o processo de diálise para um volume fixo de enzima glicerina:
- Triagem do tampão de diálise ideal para diferentes enzimas moleculares;
- Triagem de soluções de armazenamento estáveis para diferentes enzimas moleculares para permitir armazenamento de longo prazo a 4℃ ou -20℃.
- Amplificação do processo de filtragem de fluxo tangencial
Com base na triagem do processo de diálise, os componentes ideais do tampão de diálise e suas soluções ideais de armazenamento podem ser determinados. Posteriormente, o processo de filtragem de fluxo tangencial (também conhecido como UFDF) pode ser usado para substituição do tampão de solução.
Os fatores cruciais no desenvolvimento do processo de filtragem de fluxo tangencial giram em torno da escolha da fórmula da solução de armazenamento, fórmula da solução de lavagem e filtragem, bem como da pressão transmembrana e taxa de fluxo aplicadas durante a filtragem. A YEASEN estabeleceu uma abordagem padronizada para filtragem de fluxo tangencial, permitindo a rápida determinação dos volumes de lavagem e filtragem e parâmetros de tempo com base no conteúdo de glicerina desejado na enzima molecular alvo. Essa abordagem ajuda a economizar materiais e tempo.
- Controle de qualidade
Os vários processos de preparação descritos acima são projetados para acomodar os diversos requisitos para diferentes volumes e tipos de produtos. Para avaliar a estabilidade do produto em vários lotes e dentro do mesmo processo, a YEASEN desenvolveu um sistema abrangente de caracterização de parâmetros de desempenho. Este sistema permite uma avaliação completa do impacto das medidas sem glicerol de múltiplas perspectivas. Os métodos de caracterização abrangem quantificação de proteínas, avaliação da atividade enzimática (taxa de recuperação), análise do conteúdo de glicerina, avaliação do conteúdo do agente protetor e avaliação do desempenho enzimático, entre outros.
Produtos de enzimas moleculares sem glicerol YEASEN
A YEASEN adotou um método de preparação de enzima molecular sem glicerol para produzir enzimas sem conteúdo de glicerina a partir daquelas que inicialmente continham glicerina. Atualmente, podemos fornecer quantidades substanciais de matérias-primas de enzimas sem glicerol adequadas para aplicações qPCR/RT-qPCR e LAMP/RT-LAMP. Essas matérias-primas são projetadas para liofilização em testes de diagnóstico, mantendo ao mesmo tempo o mesmo nível de qualidade e desempenho de suas contrapartes líquidas.
Produtos de enzimas moleculares sem glicerol
As pré-misturas de qPCR foram preparadas usando YEASEN 14316ES E-Taq DNA polimerase e enzimas livres de glicerol correspondentes, respectivamente, e o modelo de 105, 104 e 103 cópias/mL foram amplificadas ao mesmo tempo. Os resultados mostraram que o efeito de amplificação do 14316ES sem glicerol foi consistente com o do glicerol contendo contrapartida. O teste de estabilidade acelerada de 14316ES foi realizado a 37℃. Os resultados mostraram que o desempenho de expansão de 14316ES foi consistente com o do controle não acelerado após 54 dias de tratamento acelerado a 37℃. Os resultados acima mostraram que não houve diferença no desempenho da enzima livre de glicerol e da enzima contendo glicerina. contrapartida, e a estabilidade foi boa.
- Produtos liofilizados RT-qPCR: acelerados a 50℃ por 25 dias, os produtos liofilizados têm morfologia e desempenho estáveis
Figura 4: Dados de teste de estabilidade acelerada de produtos liofilizados por RT-qPCR- Produtos liofilizados RT-LAMP: acelerados a 45℃ por 30 dias, os produtos liofilizados têm morfologia e desempenho estáveis
A pré-mistura RT-LAMP foi preparada com YEASEN 14405ES e 11297ES, e o teste de desempenho foi realizado após a liofilização. O furo de reação positivo era laranja e o furo de reação negativo era magenta, o que mostrou grande contraste, e o resultado foi claramente interpretado. Além disso, a morfologia dos produtos liofilizados não mudou significativamente após 30 dias de aceleração a 45℃. Os resultados mostraram que o produto liofilizado era estável em forma e desempenho.
Informações do produto
| Classificação | Nãoeu sou | Nº de catálogo. |
| Produtos enzimáticos sem glicerol para qPCR/RT-qPCR | Kit Hifair™ Lyo Multiplex RT-qPCR em uma etapa -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Produtos enzimáticos sem glicerol para RT-LAMP | Hifair® III Transcriptase Reversa, 600U/μl, sem Glicerol | 11297ES |
| 14405ES |