——Mais Genotipagem, Menos Tempo e Menos Reagentes
A Genotipagem baseada em PCR e outros experimentos frequentemente requerem a purificação do DNA genômico de amostras. Quando há muitas amostras a serem testadas, o processo de purificação do DNA genômico é demorado, repetitivo e custoso. A YEASEN Biology desenvolveu uma série de produtos Direct PCR Kit modificando a Taq DNA polimerase e otimizando o sistema de reação de PCR, eliminando a necessidade de purificação genômica.
PCR inteligente: PCR direto
O kit de PCR direto da YEASEN começa diretamente da amostra, usando quantidades mínimas de amostras brutas (Figura 1-A) ou seus produtos de lisado (Figura 1-B) sem purificação genômica como modelos para Genotipagem baseada em PCR (Figura 1). Comparado à Genotipagem baseada em PCR convencional, o kit de PCR direto usa menos amostra, é fácil de operar, tem baixo custo experimental e permite detecção de amostra de alto rendimento.
Fig.1 Fluxo de trabalho de amplificação direta de PCR
A. Método direto: Pegue uma pequena quantidade da amostra e adicione-a diretamente ao PCR Master Mix para identificação por PCR.Vantagens técnicas
Direto: Não há necessidade de purificação de DNA demorada e cara.
Rápido: preparação do modelo concluída em 10 minutos e reação de PCR concluída em apenas 30 minutos.
Simples: as amostras podem ser lisadas sem a necessidade de corte ou moagem, e a mistura de PCR está em uma forma pré-misturada, reduzindo o número de etapas de pipetagem.
Economia: Pouca quantidade de materiais utilizados.
Alto rendimento: as reações de lise podem ser concluídas em uma placa de 96 poços.
Resistente à inibição: Tolerante a várias amostras de animais e plantas.
Processo Experimental do Kit de PCR Direto
Esta série de produtos usa um sistema de lise de protease exclusivo para lisar amostras. A solução de lise pode ser usada diretamente como um modelo e pareada com o PCR Master Mix fornecido no kit para amplificação genética.
Fig.2 Processo de experimento de PCR direto em tecidos de camundongo
Figo.3 Processo de experimento de PCR direto em tecido vegetal
Tabela de seleção de produtos de PCR direta
| Série de produtos | PCR direto de camundongo de segunda geração | |||
| Número do produto | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Especificações | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 toneladas/200 toneladas | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 toneladas/200 toneladas |
| Características | ||||
| Comprimento do Amplicon | ≤5 kb | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb |
| Tempo de extensão (s/kb) | 3-20 segundos | 30 segundos | ≤2 kb: 3-5 s ≤8 kb: 10 s | anos 60 |
| Organismos aplicáveis | Ratos, Camundongos | Ratos, Camundongos | Humanos, ratos, cabras, galinhas, porcos, etc. | Arroz, milho, tabaco, colza, trigo, soja, etc. |
| Tipos de tecidos/materiais aplicáveis | Cauda de rato, orelha de rato, dedos (com músculos) e outros órgãos | Cauda de rato, orelha de rato, dedos (com músculos) e outros órgãos | Sangue fresco contendo anticoagulantes comuns como EDTA, heparina, citrato, sangue refrigerado (congelado) e gotas de sangue seco comerciais como Whatman903® e FTA® | Folhas tenras, Folhas velhas, Mudas, Caules tenros |
| Exemplo de uso | Tecido: 5 mg Cauda de rato: 1-5 mm | Tecido: 5-10 mg Cauda de rato: 1-5 mm | Sangue total: 0.5%-20% Queimador® manchas de sangue seco: 1 mm2 | Folha: 1-10 mm Semente: 1-3 mm |
| Tempo de liberação genômica | 5-10 minutos | 15 minutos | 0-3 minutos | 0-10 minutos |
| Estrutura final do produto | Pontas rombas | Pontas rombas | Pontas rombas | Pontas rombas |
| Temperatura de recozimento | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| Faixa de recorte GC | 29-70% | 30-70% | 30-75% | 40-65% |
| Atividade da exonuclease 5'-3' | Sim | Sim | Sim | Sim |
| Aplicações | ||||
| Genotipagem | Sim | Sim | Sim | Sim |
| PCR multiplexado | Até 5x |
| Até 3-4x |
|
| Amplificação de amostra direta | Sim | Sim | Sim | Sim |
| Outras características | ||||
| Indicador de eletroforese | Incolor | Azul | Incolor | Azul |
| Início quente | Sim | Sim | Sim | Sim |
| Pré-misturado/Kit | Kit (com Mix) | Kit (com Mix) | Kit (com Mix+buffer) | Kit (com Mix) |
Vantagens do produto
A Taq DNA Polimerase modificada é a garantia da PCR direta: ela tem super tolerância a inibidores.
Quando amostras não purificadas são usadas como moldes, muitos componentes que inibem reações de PCR são introduzidos. É difícil atingir resultados ideais, ou mesmo impossível realizar amplificação de PCR, com sistemas de reação de PCR comuns e Taq DNA polymerase. O PCR Mix nesta série de kits é uma pré-mistura otimizada para fórmula, usando uma Taq DNA Polymerase modificada, que aumenta a capacidade de ligação ao DNA molde e tem maior tolerância a inibidores comuns de PCR, tendo assim uma adaptabilidade de molde mais ampla.
Fig.4 A mistura de PCR no kit de PCR direto tem maior tolerância a impurezas. A mesma quantidade de molde é usada para PCR com diferentes PCR Mixes, e várias concentrações de inibidores de reação de PCR são adicionadas ao sistema. A quantidade de produtos de PCR sob diferentes condições é comparada.
EFACILITAR desenvolveu uma série de produtos para diferentes amostras:
- I. Tipo específico para roedores: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)
Amostras aplicáveis: Tecidos de camundongo (como cauda de camundongo, orelha de camundongo, dedo de camundongo, etc.)
- Alta eficiência de amplificação (comprimento, velocidade, compatibilidade GC)
Fig.5 O Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus amplifica lisados de diferentes tecidos. 1: Plasmídeo; 2: Orelha de camundongo; 3: Cauda de camundongo; 4: Fígado. Condições de lise: lise a 70°C por 10 min, inativação a 95°C por 5 min. Os fragmentos alvo são 1 KB, 2 KB, 3 KB e 6 kb, com tempos de extensão definidos para 3, 5, 10 e 20 seg/kb, respectivamente. M: 10510ES60 (LEVE).
- Ampla compatibilidade de modelos (10189ES)
Figura 6 O Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus foi usado para lisar diretamente (70°C por 10 min) e amplificar células humanas 293 (1), saliva (2) e tecido do couro cabeludo (3). Todas as amostras apresentaram bandas alvo claras, M: 10510ES60 (YEASEN).
- II. Tipo universal de sangue multiespécies: Kit de PCR direto avançado para sangue (10188ES)
- Comprimento de amplificação de até 8 kb
Fig.7 Fragmentos de DNA de vários comprimentos foram amplificados diretamente do sangue total humano usando o Blood Advanced Direct PCR Kit. As amostras de sangue foram armazenadas a -20℃ com EDTA como anticoagulante. A concentração do molde de sangue foi de 10%, e o tempo de extensão foi definido para 10 seg/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Alta tolerância
Fig.8 A: O Blood Advanced Direct PCR Kit é usado para amplificar um fragmento de DNA de 2 kb com um conteúdo de GC de 71% diretamente do sangue total anticoagulado com EDTA humano. A concentração do molde de sangue é definida por gradiente de 0,5-50%, e o tempo de extensão é definido como 10 seg/kb. B: O Blood Advanced Direct PCR Kit é usado para amplificar um fragmento de DNA de 2,2 kb com um conteúdo de GC de 67% diretamente do sangue total anticoagulado com EDTA de camundongo. A concentração do molde de sangue é definida de 0,5-50%, e o tempo de extensão é de 10 seg/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- III. Tipo específico de planta: Kit de PCR direto de tecido vegetal (10187ES)
- Verificado com vários tipos de amostras de plantas
Fig.9 Resultados de amplificação direta de tecidos foliares de diferentes tipos de plantas. M: Escada de DNA de 100 pb. C: DNA genômico purificado das plantas correspondentes como molde. 1-2: Lisado de tecido foliar como molde. Número de ciclos: 30 ciclos.
Caso do cliente
- I. Identificação do genótipo do camundongo
Uma empresa biológica em Guangzhou:
Fig.10 Amplificação da cauda do camundongo usando o Mouse Direct PCR Kit (10189ES). Gene alvo: 500 pb; Tempo de lise: 10 min; Sistema de reação de PCR: 25 μL, tempo de extensão: 5 seg/kb.
- II.Amplificação direta do gene do arroz
XX Universidade
Fig.11 O kit Plant Direct PCR (10187ES) é usado para amplificar genes relacionados ao arroz.
Rexultante Pprodutos
| Posicionamento do produto | Nome do produto | Número do produto | Especificação do produto |
| Agarose de alta qualidade | 10208ES60/76 | 100 g/500 g | |
| Manchas de ácido nucléico (sob luz UV) | 10202ES76 | 500 μL | |
| Atualização rápida de PCR, pode ser PCR de colônia e adequado para amplificação de modelo complexo | 10167ES03/08 | 1 mL/5×1 mL |