Transcrição reversa é o processo de conversão de RNA em DNA complementar (cDNA), que é mediado pela enzima transcriptase reversa. Na presença de primers de anelamento, a transcriptase reversa primeiro se liga ao molde de RNA. A atividade de DNA polimerase dependente de RNA da transcriptase reversa sintetiza cDNA incorporando dNTPs da mistura de reação. Esse processo resulta na formação de uma fita híbrida cDNA:RNA, que é conhecida como síntese de cDNA de primeira fita.
A transcriptase reversa do vírus da leucemia murina de Moloney (M-MLV) é uma das transcriptases reversas comumente usadas em procedimentos de laboratório de biologia molecular. Para atingir maior eficiência de transcrição reversa, melhor estabilidade térmica e uma taxa maior de síntese de cDNA, a transcriptase reversa original é frequentemente geneticamente modificada. Atualmente, os reagentes de transcrição reversa disponíveis no mercado normalmente requerem tempos de reação que variam de 15 a 30 minutos, o que é relativamente longo. Quando o número de amostras de reação é grande, o gasto geral de tempo pode aumentar drasticamente. Os produtos da série de transcrição reversa de 5 minutos existentes da YESSEN podem concluir o processo de transcrição reversa em apenas 5 minutos, economizando tempo e sendo altamente eficientes.
| Pproduto Pposicionamento | Nome do produto | Gato# |
| Pré-mistura de transcrição reversa rápida, eficiente e de alto rendimento | Hifair™ AdvanceFast 1ª fita de cDNA Síntese SuperMix para qPCR | 11156ES |
| Pré-mistura de transcrição reversa rápida, eficiente e de alto rendimento (com remoção de gDNA) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix para qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| Conclusão rápida em uma etapa da remoção de gDNA e pré-mistura de transcrição reversa | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestão SuperMix para qPCR | 11151ES |
| Kit de Transcrição Reversa Rápida de Seleção de Primer Flexível (com Remoção de gDNA) | Hifair™ Kit de síntese de cDNA AdvanceFast 1st Strand (sem corante) | 11150ES |
| Kit de Transcrição Reversa Rápida de Seleção de Primer Flexível (com Remoção de gDNA e Corante de Rastreamento) | Hifair™ Kit de síntese de cDNA AdvanceFast 1ª fita | 11149ES |
Recomendação de Boutique Um
Pré-mistura de transcrição reversa rápida, eficiente e de alto rendimento (com remoção de gDNA) (Cat. nº 11155ES)
Alto rendimento de transcrição reversa de diferentes modelos
| Amostra | 293T Célula | Arabidopsis thaliana | Rato | Fígado de peixe |
| 11155ES | 23.4↓ | 19,6↓ | 24,9↓ | 21.1↓ |
| Marca A | 24,9 | 21.3 | 27,5 | 21.3 |
| Marca B | 26.1 | 20,5 | 27.1 | 23.1 |
| Marca C | 25,7 | 19,8 | 27.3 | 21.9 |
| Marca D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24,5 |
Figura. A transcrição reversa foi realizada usando modelos de RNA de células 293T humanas, Arabidopsis thaliana, fígado de camundongo e fígado de peixe. As marcas A, B, C e D são todas reagentes de transcrição reversa de digestão de duas etapas com tempos de transcrição reversa variando de 15 a 20 minutos. Os resultados do teste mostram que o kit de transcrição reversa Hifair 11155ES de 5 minutos se destaca com rendimentos mais altos em comparação a outras marcas, e os valores de Ct são mais baixos.
Recomendação de Boutique Dois
Pré-mistura de digestão e transcrição reversa de uma etapa de 5 minutos (Cat. nº 11151ES)
Alto rendimento de transcrição reversa
Figura. Usando RNA de célula 293T humana como molde, três genes foram testados respectivamente. As marcas A, B e C são todas reagentes de remoção de gDNA e transcrição reversa de uma etapa. Os resultados do teste mostram que com uma entrada de 1 μg e 10 ng de RNA total, o rendimento da transcrição reversa com o kit 11151ES é superior a outras marcas, com valores de Ct menores.
Figura. Usando o RNA de Arabidopsis thaliana como molde, as Marcas A, B e C são todas reagentes de remoção de gDNA e transcrição reversa de uma etapa. Os resultados do teste mostram que com uma entrada de 1 μg e 10 ng de RNA Total, o rendimento da transcrição reversa com o kit 11151ES é superior a outras marcas, com valores de Ct menores.
Excelente sensibilidade
Figura. Usando RNA de célula 293T humana como molde, genes com 30% de GC, 50% de GC, 60% de GC e 70% de conteúdo de GC foram amplificados. Entradas totais de RNA de 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng e 1 μg foram usadas para transcrição reversa seguida por detecção quantitativa fluorescente. Os resultados mostram que 11151ES pode acomodar transcrição reversa para entradas de RNA variando de 100 pg a 1 μg.
Recomendação de Boutique Ttrês
Kit de transcrição reversa rápida de 5 minutos (Gato #11149/11150ES)
Alta sensibilidade, com limite mínimo de detecção de até 10 pg
Figura. Usando o RNA total de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada com 11149ES, e o cDNA resultante foi submetido à análise quantitativa de qPCR. Os resultados mostram que 11149ES pode reverter com sucesso a transcrição de entradas de RNA variando de 10 pg a 1 μg, garantindo resultados quantitativos precisos.
Bom desempenho de amplificação, com a maior amplificação de um fragmento de 14 kb
Figura.Usando o RNA total de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada com 11149ES, e o cDNA resultante foi submetido à detecção por PCR. Os resultados indicam que 11149ES é capaz de sintetizar fragmentos de cDNA variando de 1 kb a 14 kb de comprimento, com PCR subsequente tendo certos cenários aplicáveis. Se a transcrição reversa direta de fragmentos acima de 10 kb for necessária, é recomendado estender o tempo de transcrição reversa para 20-30 minutos para garantir a aquisição dos fragmentos finais.
Comparação da eficiência da transcrição reversa
| Quantidade de entrada de RNA | Valor Ct | |
| 11149ES | Marca A | |
| 1 μg | 15.2 | 15,5 |
| 100 ng | 18.0 | 18,5 |
| 10 ng | 21 | 21,7 |
| 1 ng | 24,5 | 25.1 |
| 100 pg | 29.1 | 29,7 |
| 10 pág. | 32,7 | 34,3 |
Figura. Usando o RNA total de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada com 11149ES e Marca A, com 11149ES não passando pela etapa de remoção de gDNA. O cDNA resultante foi submetido à análise quantitativa de qPCR. Os resultados mostram que o tempo de transcrição reversa para a Marca A foi de 13 minutos, enquanto para 11149ES foi de 5 minutos. A análise quantitativa de diferentes produtos revela que os valores de Ct para 11149ES são menores ou semelhantes aos da marca concorrente, indicando que a eficiência de transcrição reversa de 5 minutos de 11149ES é superior ou aproximadamente equivalente à da Marca A.
| Quantidade de entrada de RNA | Valor Ct | |
| 11149ES | Marca B | |
| 1 μg | 16.2 | 17.4 |
| 100 ng | 19.0 | 20,5 |
| 10 ng | 22 | 23,8 |
| 1 ng | 26 | 27,9 |
| 100 pg | 31.4 | 33.2 |
| 10 pág. | 32,9 | 35,6 |
Figura.Usando o RNA total de células 293T como molde, a transcrição reversa foi realizada com 11149ES e Brand B, com 11149ES não passando pela etapa de remoção de gDNA. O cDNA resultante foi submetido à análise quantitativa de qPCR. Os resultados mostram que o tempo de transcrição reversa para Brand B foi de 20 minutos, enquanto para 11149ES foi de 5 minutos. A análise quantitativa de diferentes quantidades de substrato revela que os valores de Ct para 11149ES são menores ou semelhantes aos de Brand B, indicando que a eficiência de transcrição reversa de 5 minutos de 11149ES é superior ou aproximadamente equivalente à de Brand B.
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