O RNA circular (circRNA) é uma classe única de moléculas de RNA não codificantes. Elas são formadas por meio de um mecanismo chamado de splicing reverso. Os dois éxons do mRNA precursor são conectados em uma estrutura de circuito fechado durante o splicing. Isso evita as estruturas comuns de capa 5' e cauda 3' encontradas em moléculas de RNA linear. Essa estrutura circular confere alta estabilidade ao circRNA, tornando-o menos suscetível à degradação por nucleases dentro da célula. Portanto, eles têm uma meia-vida mais longa nas células, o que lhes permite atingir efeitos de baixa dosagem e longa duração em aplicações práticas. Além disso, o circRNA tem a vantagem de um processo de produção relativamente simples porque não requer o nucleotídeos modificados o encapsulamento ou poliadenilação, tornando o RNA circular um ponto importante no desenvolvimento de medicamentos.
Apresenta vantagens significativas no desenvolvimento de medicamentos, cujos detalhes são principalmente listado no seguinte:
01 Maior estabilidade
A estrutura do circRNA o torna resistente à degradação por nucleases, portanto tem meia-vida mais longa e maior estabilidade nas células, o que é crucial para o efeito prolongado dos medicamentos.
02 Baixa imunogenicidade
Comparado ao RNA linear, o circRNA tem menor imunogenicidade, o que reduz a possibilidade de reações imunológicas, tornando o circRNA mais adequado como transportador de medicamentos.
03 Expressão eficiente de proteínas
Pesquisas mostram que circRNAs projetados podem expressar proteínas de forma estável e eficiente em células eucarióticas, o que é particularmente importante para a terapia de reposição de proteínas.
04 Aplicações potenciais no tratamento de doenças
O circRNA demonstrou potencial no tratamento de várias doenças, incluindo doenças raras, terapia do câncer e como parte do desenvolvimento de vacinas.
05 Sistema de entrega inovador
Os sistemas de entrega recentemente desenvolvidos, como nanopartículas lipídicas (LNPs), podem efetivamente entregar circRNA às células-alvo, o que é crucial para o direcionamento e eficácia dos medicamentos.
06 Desenvolvimento de vacinas
As vacinas circRNA demonstraram potencial no desenvolvimento de vacinas contra a COVID-19, capazes de induzir a produção de anticorpos mais neutralizantes e respostas eficazes das células T, além de serem mais estáveis em temperaturas ambientes em comparação ao mRNA linear, o que ajuda a simplificar as condições de armazenamento e transporte.
07 Edição genética
O circRNA também mostra potencial no campo da edição genética, sendo capaz de servir como modelo para sistemas de edição genética, proporcionando expressão proteica mais persistente e estável.
O processo de produção do circRNA inclui: preparação do molde, transcrição in vitro, remoção do molde de DNA, circularização e purificação. Após a circularização do RNA, o RNA não circularizado precisa ser digerido com Ribonuclease R (RNase R) para enriquecer o circRNA.
YEASEN possui um design racional de enzima molecular bidirecional e uma plataforma de evolução direcionada, bem como uma base de produção de enzima molecular projetada especificamente para produtos de nível GMP. Desenvolver e produzir produtos RNase R de grau GMP com alta pureza e forte atividade digestiva, fornecendo suporte para o lançamento de novas vacinas/medicamentos de RNA.
Figura 1: Diagrama do processo de produção de RNA circular
(Fonte: Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.)
A RNase R (Ribonuclease R, RNase R) é uma exoribonuclease 3'→5' dependente de Mg2+ originária de Escherichia coli. Ele pode digerir todo o RNA linear e tem dificuldade em digerir circRNA, Lasso RNA, ou moléculas de RNA fita dupla com menos de 7 nucleotídeos projetando-se na extremidade 3'. A RNase R é comumente usada para remover moléculas de RNA linear, alcançando o propósito de enriquecer RNAs não lineares, como circRNA e RNA lariat.
A aplicação principal regiões são:
- Pesquisa de expressão genética;
- Pesquisa sobre splicing alternativo;
- Enriquecer circRNA de amostras biológicas;
- Identificar a estrutura do laço intrônico do RNA;
- Identificar o exon circRNA.
Características do produto
- Pureza da proteína (SDS-PAGE) ≥95%;
- Nenhum resíduo de exonuclease;
- Comparado aos concorrentes, o produto tem capacidade equivalente na digestão de RNA linear;
- Comparado aos concorrentes, o produto tem efeito semelhante no enriquecimento de circRNA.
Demonstração de desempenho
Pureza da proteína (SDS-PAGE) ≥95%
Figura 2: Teste de Pureza de Proteína: Da esquerda para a direita, os resultados são para diferentes volumes (1 μL, 2 μL, 3 μL) da mesma concentração de produto. Os resultados mostram que a pureza da proteína de YEASEN O produto da RNase R é ≥95%.
Nenhum resíduo de exonuclease
Figura 3: Detecção residual de exonuclease: adicione 20 U de YEASEN RNase R para 0,5 μg de λDNA-Hind III digerir, incubar a 37°C por 4 horas e então realizar eletroforese em gel de agarose. Os resultados mostram que as bandas de DNA não mudaram, indicando que não há exonuclease residual no YEASEN Produto RNase R.
Comparável ao produto importado RNase R da marca A na digestão de RNA linear
Figura 4: Comparação da capacidade dos produtos RNase R da YEASEN e dos produtos RNase R de um fabricante importado de digerir RNA linear:Quando a YEASEN O produto RNase R e o produto RNase R de um fabricante importado A foram adicionados a um sistema de reação contendo substratos de RNA linear, os resultados mostraram que quando a quantidade de produto RNase R adicionada atingiu 2-4 U, as bandas de RNA tornaram-se fracas ou até mesmo desapareceram, indicando que a RNase R tem um efeito digestivo em moléculas de RNA linear. Além disso, a capacidade digestiva de YEASEN O produto RNase R e o produto RNase R do fabricante importado A em moléculas de RNA linear são comparáveis.
Equivalente ao efeito de enriquecimento de circRNA do produto RNase R importado da marca A
Figura 5: Comparação do efeito de enriquecimento do circRNA por YEASEN Produto RNase R e produto RNase R de um fabricante importado A: O sistema de reação contendo substratos circRNA foi submetido a reações com YEASEN produtos e produtos RNase R de um fabricante importado A, respectivamente.Os resultados mostraram que não houve diferença significativa no brilho das bandas de RNA após o tratamento com o produto RNase R da YEASEN e o produto RNase R do fabricante importado A, indicando que o circRNA pode suportar a digestão pela RNase R. Os resultados acima confirmam que tanto YEASEN produtos e produtos RNase R de um fabricante importado podem ser usados efetivamente para enriquecimento de circRNA.
Feedback do cliente
EFACILITAR A RNase R tem melhores efeitos de clivagem no RNA linear em comparação com outras marcas.
Figura 6: Comparação dos efeitos da digestão da RNase R em moléculas de mRNA linear entre YEASEN produtos e fabricantes A e B: A reação foi realizada pela adição do YEASEN Produto RNase R e os produtos RNase R dos fabricantes A e B para um sistema de reação contendo 1 μg de substrato de mRNA linear. Os resultados mostraram que o YEASEN O produto RNase R apresentou melhor eficiência de digestão em RNA linear em comparação aos produtos RNase R dos fabricantes A e B.
Informações do produto
| Nome do produto | Código do produto | Especificações do produto |
| 14615ES | 500U/5000U/20KU/200KU | |
| 14616ES | 500µl/1 mL/5 mL/10 mL/100 mL |
Referências
1.Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Vacinas circulares de RNA contra SARS-CoV-2 e variantes emergentes. Célula. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2.Chen L, Wang C, Sun H, et al. A caixa de ferramentas de bioinformática para descoberta e análise de circRNA. Breve Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001