Реагенты для трансфекции клеток стали обычными реагентами для изучения и контроля функции генов в эукариотических клетках. Реагенты для трансфекции широко используются в исследовании функции генов, регуляции экспрессии генов и анализе мутаций, а также в генной терапии, клеточной терапии, производстве белков и вакцин. Так что же такое трансфекция? И как выбрать тип реагента для трансфекции на основе ваших экспериментов?

Какие существуют типы трансфекции?

Особенности реагентов для трансфекции от Yeasen

Как выбрать вид трансфекционного реагента на основе ваших экспериментов?

Случай применения

Ссылка на условия трансфекции

Часто задаваемые вопросы

С уважением к чтению

Какие существуют типы трансфекции?

В зависимости от того, интегрируется ли нуклеиновая кислота в хромосому клетки-хозяина после трансфекции, она делится на «транзиентную» (транзиентная трансфекция) и «стабильную» (стабильная трансфекция). Эффективность трансфекции, цитотоксичность, воздействие на нормальную физиологию и уровни экспрессии генов различных методов трансфекции различны. Принципы, области применения и характеристики сравниваются в следующей таблице:

Таблица 1 Сравнение различных методов трансфекции

Особенности реагенты для трансфекции от Yeasen

Для реагентов для трансфекции ДНК и реагентов для трансфекции РНК Yeasen Biotechnology имеет сильную команду по исследованиям, разработкам и производству, постоянно оптимизирует формулы, совершенствует производственные процессы и выпустила множество продуктов на основе катионных липосом и катионных полимеров. Научно-исследовательские институты и предприятия предоставляют полный спектр продукции, а линейка продуктов охватывает все области, связанные с реагентами для трансфекции.

• Высокая эффективность: подходит для временной трансфекции или стабильной трансфекции клеточных линий.
• Низкая токсичность: трансфицированные клетки остаются жизнеспособными.
• Широкая адаптивность: полный охват обычных клеток и трудно трансфицируемых первичных клеток.
• Простота эксплуатации: подходит для среды с наличием сыворотки, без смены среды до и после трансфекции.
• Экономически эффективно: экономично и практично, высокая эффективность трансфекции, низкая цена.

Как выбрать вид трансфекционного реагента на основе ваших экспериментов?

Выбор реагентов для трансфекции необходимо осуществлять в соответствии с различными экспериментальными целями и содержанием эксперимента, такими как трансфицируемые вещества, специфические клетки, удобство эксплуатации и другие факторы.

Случай применения

Реагент для липосомальной трансфекции Hieff Trans™

Hieff Trans™ поставляется в стерильной жидкой форме. Обычно для трансфекции 24-луночного планшета, около 1,5 мкл каждый раз, 1 мл Hieff Trans™ можно выполнить около 660 трансфекций; для 6-луночного планшета, около 6 мкл каждый раз, 1 мл Hieff Trans™ может сделать около 660 трансфекций. 160 трансфекций;

Более подробную информацию см. Уверенность в трансфекции с реагентом Hieff Trans™ Lipofectamine

Полиэтиленимин линейный (ПЭИ) МW40000 (быстрый лизис)

PEI 40000 — это высокозаряженный катионный полимер с молекулярной массой 40 000, который очень легко связывает отрицательно заряженные молекулы нуклеиновых кислот, образуя комплекс и позволяя комплексу проникать в клетки. PEI 40000 — это транзиторный трансфекционный реагент с низкой цитотоксичностью, высокой эффективностью трансфекции и высокой эффективностью экспрессии генов в таких клетках, как HEK293 и CHO. Линейные трансфекционные реагенты PEI были проверены для широкого спектра клеточных линий, включая клетки HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 и Hela. Эффективность трансфекции достигает 80%~90%.

Более подробную информацию см. Новый фаворит для трансфекции — линейный ПЭИ MW 40000, более эффективный реагент для трансфекции

Hieff Trans™ в пробирке Реагент для трансфекции siRNA/miRNA

Этот продукт может достигать более 90% эффективности экспрессии 1 нМ siRNA в широком диапазоне клеточных линий, избегая нецелевых эффектов. Подходит для трансфекции различных клеток, включая Hela, MCF-7, HepG2, CHO и другие адгезивные клетки; и трудно трансфицируемые суспензионные клеточные линии, такие как клетки K562 или THP-1, могут достигать 80% эффективности сайленсинга; включая некоторые первичные клетки, первичные человеческие фибробласты и первичные человеческие гепатоциты и т. д., может быть достигнута эффективность сайленсинга 80%.

Ссылка на условия трансфекции

В дополнение к инструкциям для каждого продукта, клиенты действуют в соответствии с их конкретным экспериментальным содержанием, и будут разные различия в количестве использования. Согласно условиям трансфекции клеток in vitro, о которых сообщили клиенты после использования продукта, они были отсортированы для вашей справки.

Часто задаваемые вопросы

1 липосомальный трансфекционный реагент Hieff Trans™

1.1 В: Может ли присутствовать сыворотка при приготовлении комплексов реагентов для трансфекции нуклеиновых кислот?

A: Наличие сыворотки повлияет на формирование липосом. Рекомендуется использовать среду без сыворотки (обычно среду MEM) при приготовлении комплексов реагентов для трансфекции нуклеиновых кислот.

1.2 В: На что следует обратить внимание при использовании реагента для трансфекции липосомальных нуклеиновых кислот Hieff Trans™?

А:

1) При трансфекции клеток предпочтительная плотность клеток составляет 80% -95%, а удельная плотность посева определяется в зависимости от положения клеток;

2) Использование высокоочищенной ДНК помогает добиться более высокой эффективности трансфекции;

3) ДНК и реагенты для трансфекции необходимо разбавлять бессывороточной средой при приготовлении трансфекционных комплексов;

4) Антибиотики нельзя добавлять в среду во время трансфекции;

5) Реагенты следует хранить при температуре 2–8 °C, при этом следует избегать многократного открытия крышки в течение длительного времени;

6) Концентрация ДНК и количество катионных липосомальных реагентов должны быть оптимизированы для первого использования, чтобы получить максимальную эффективность трансфекции. Соотношение ДНК к трансфекционному реагенту обычно рекомендуется 1:2-1:3.

1.3 В: Нужно ли прекращать трансфекцию после трансфекции?

A: Нет необходимости. Липосомальные комплексы стабильны в течение 6 часов. Если клеточная среда не была изменена перед трансфекцией, для обеспечения питательных веществ, необходимых для нормального роста клеток, необходимо сменить среду на новую через 4-6 часов. Однако, если среда была изменена перед трансфекцией, нет необходимости менять среду после липосомальной трансфекции.

1.4 В: Можно ли проводить котрансфекцию ДНК и siRNA? Каков эффект?

A: Да, при совместной трансфекции ДНК и siRNA эффективность трансфекции siRNA будет немного ниже.

1.5 В: Можно ли использовать реагент для трансфекции для трансфекции лентивирусной упаковки?

О: Упаковка лентивирусов возможна.

1.6 В: Можно ли трансфицировать суспензионные клетки с помощью реагента для трансфекции липосомальных нуклеиновых кислот Hieff Trans™?

A: Реагент трансфекции нуклеиновых кислот липосом Hieff Trans™ может использоваться для трансфекции суспензионных клеток, подробности см. в Протоколе. Кроме того, мы также представили реагент трансфекции, специально предназначенный для суспензионных клеток (кат. №.40805, суспензионный бесклеточный липосомальный трансфекционный реагент Hieff Trans™)

2 Hieff Trans™ в пробирке Реагент для трансфекции siRNA/miRNA

2.1 В: Нужно ли менять реагент для трансфекции после трансфекции?

A: Эту проблему можно разделить на два случая: 1. Если перед трансфекцией среда не менялась, среду следует менять примерно через 6 часов после трансфекции, чтобы обеспечить необходимые для роста клеток питательные вещества; 2. Если перед трансфекцией среда менялась, можно ли работать в соответствии с обычной работой культивируемых клеток? ? После операции замены жидкости?

2.2 В: Можно ли замораживать реагенты для трансфекции?

A: Его нельзя замораживать, поскольку реагент для трансфекции является катионным реагентом для трансфекции PEI. Замораживание при низких температурах разрушит активность реагента для трансфекции PEI. Поэтому лучше всего хранить его при температуре 2-8 °C, чтобы сохранить наилучшую эффективность трансфекции.

Информация о продукте

Некоторые статьи, опубликованные с использованием наших продуктов

[1] Лю Р., Ян Дж. и др. Оптогенетический контроль функции и метаболизма РНК с использованием сконструированных светопереключаемых РНК-связывающих белков. Nat Biotechnol. 2022 3 января. (IF:55)

[2] Luo J, Yang Q и др. TFPI — это рецептор толстой кишки для TcdB из гипервирулентного клада 2 C. difficile. Cell. 2022 Mar 17.（IF:41.582）

[3] Чжоу Дж., Чен П. и др. Варианты Cas12a, разработанные для снижения нецелевого эффекта по всему геному посредством строгого распознавания PAM. Mol Ther. 2022 5 января (IF:11.454)

[4] Чен С., Цао Х. и др. circVAMP3 управляет разделением фаз CAPRIN1 и ингибирует гепатоцеллюлярную карциному, подавляя трансляцию c-Myc. Adv Sci (Weinh). 24 января 2022 г. (IF:16.808)

[5] Gu C, Wang Y и др. AHSA1 является перспективной терапевтической мишенью для клеточной пролиферации и устойчивости к ингибиторам протеасом при множественной миеломе. J Exp Clin Cancer Res. 2022 6 января (IF:11.161)

[6] Чжан И, Юй Х и др. Фактор сплайсинга аргинин/серин-богатый 8 способствует злокачественности множественной миеломы и поражению костей посредством альтернативного сплайсинга CACYBP и клеточной коммуникации на основе экзосом. Clin Transl Med. 2022 февраль (IF:11.492)

[7] Qin J, Cai Y и др. Молекулярный механизм агонизма и обратного агонизма в рецепторе грелина. Nat Commun. 2022 13 января. (IF:14.9)

[8] Тан X, Дэн Z и др.Новый белок, кодируемый circHNRNPU, способствует прогрессированию множественной миеломы, регулируя микросреду костного мозга и альтернативный сплайсинг. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Mar 8. (IF:11.161)

[9] Xie F, Su P и др. Инженерные внеклеточные везикулы, обогащенные пальмитоилированным ACE2, в качестве терапии COVID-19. Adv Mater. 2021 19 октября. (IF:30.849)

[10] Лян И, Лу Кью и др. Реактивация супрессора опухоли при раке груди путем переключения энхансера через сеть NamiRNA. Nucleic Acids Res. 2021 7 сентября (IF:16.9)

[11] Fan Y, Wang J и др. CircNR3C2 способствует подавлению опухолей, опосредованному HRD1, посредством губчатого воздействия на miR-513a-3p при тройном негативном раке молочной железы. Mol Cancer. 2021 Feb 2. (IF:27.403)

[12] Дай Л., Дай Й. и др. Структурное понимание рекрутирования комплекса BRCA1-BARD1 в поврежденный хроматин. Mol Cell. 2021 1 июля (IF:17.97)

[13] Чжан К., Ван А. и др. Ось UBQLN2-HSP70 уменьшает агрегаты поли-Gly-Ala и устраняет поведенческие дефекты в модели животных C9ORF72. Нейрон. 16 июня 2021 г. (IF:17.17)

[14] Ли Т., Чен Х. и др. Синтетическое оптогенетическое устройство на основе BRET для пульсирующей экспрессии трансгена, обеспечивающей гомеостаз глюкозы у мышей. Nat Commun. 2021 27 января. (IF:14.92)

[15] Ян Ф., Хуан С. и др. Треонин АДФ-рибозилирование убиквитина семейством бактериальных эффекторов блокирует убиквитинирование хозяина. Mol Cell. 2020 21 мая. (IF:17.97)

[16] Sun X, Peng X и др. ADNP способствует нейронной дифференциации путем модуляции сигналов Wnt/β-катенина. Nat Commun. 2020 12 июня. (IF:14.911)

[17] Yang X, Wang H и др. Перестройка сигналов ERBB3 и ERK обеспечивает устойчивость к ингибированию FGFR1 при раке желудочно-кишечного тракта, содержащем мутацию ERBB3-E928G. Protein Cell. 2020 Декабрь (IF:14.872)

[18] Zou Y, Wang A и др. Анализ окислительно-восстановительных ландшафтов и динамики в живых клетках и in vivo с использованием генетически кодируемых флуоресцентных сенсоров. Nat Protoc. 2018 октябрь (IF:13.490)

[19] Хао Х., Ху С. и др. Потеря эндотелиального CXCR7 нарушает сосудистый гомеостаз и ремоделирование сердца после инфаркта миокарда: последствия для открытия сердечно-сосудистых препаратов. Циркуляция. 2017 28 марта. (IF:29.69)

С уважением к чтению

Реагент для трансфекции – Hieff Trans™ и PEI

Линейный ПЭИ MW 40000, более эффективный реагент для трансфекции