Линейный ПЭИ 40000, более эффективный реагент для трансфекции
Как правило, трансфекция — это процесс искусственного введения нуклеиновых кислот (ДНК или РНК) в эукариотические клетки. Реагенты для трансфекции, как следует из названия, представляют собой ряд реагентов, участвующих в трансфекции. В процессе трансфекции нас часто беспокоят низкая эффективность трансфекции, узкий диапазон применения, сильная токсичность, громоздкость эксплуатации и высокая цена реагентов для трансфекции. Так есть ли реагент для трансфекции, который может решить эти проблемы? Да, линейный ПЭИ — лучший выбор для решения этих проблем.
Примечание: Йесен запустил новый PEI Реагент для трансфекции Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV для крупномасштабного производства различных вирусных векторов и транзиентной экспрессии белков, подходящих для адгезивных и суспензионных систем.
1. Какие существуют типы трансфекции клеток?
2. Что такое линейный PEI MW 40000?
3. Как работает линейный PEI MW 40000?
4. Каковы особенности PEI MW 40000?
5. Другие реагенты для трансфекции от Yeasen
6. Отношение к чтению
1. Какие существуют типы трансфекции клеток?
Прежде чем представить линейный PEI MW 40000, давайте сначала кратко разберемся с типами трансфекции клеток. Трансфекция клеток имеет большое значение для генетических исследований, исследований белков и цитологических исследований, которые относятся к процессу искусственного введения нуклеиновых кислот (ДНК или РНК) в клетки с использованием невирусных средств заражения. Основной целью трансфекции является изучение функции генов или генных продуктов путем усиления или подавления экспрессии определенных генов в клетках или для получения рекомбинантных белков. Введение экзогенной нуклеиновой кислоты изменит характеристики клеток, чтобы достичь цели трансфекции, что полезно для изучения регуляции генов и экспрессии белков, а также синтеза и производства белков.
Трансфекции клеток можно разделить химическими, биологическими и физическими методами или временем пребывания чужеродного гена в клетке. При транзиторной трансфекции введенная нуклеиновая кислота может существовать в клетке ограниченное время без репликации, тогда как при стабильной трансфекции введенная нуклеиновая кислота интегрируется в геном хозяина и может экспрессироваться в потомстве трансфицированной клетки.
Как выбрать правильный метод трансфекции клеток при таком количестве различных методов?
Ни один метод трансфекции не подходит для всех типов клеток и не отвечает всем экспериментальным потребностям. Оптимальный метод трансфекции следует выбирать в соответствии с требованиями типа клеток и экспериментальных условий.
В настоящее время химические трансфекционные реагенты по-прежнему остаются основными методами трансфекции клеток благодаря простоте их применения и совместимости с различными клеточными линиями.
2. Что такое линейный PEI MW 40000?
Полиэтиленимин линейный (ПЭИ) МW40000 (быстрый лизис) — это транзиентный трансфекционный реагент на основе полиэтиленимина с молекулярной массой 40 000 (ПЭИ 40000). ПЭИ 40000 — это высокозаряженный катионный полимер, который может легко связывать отрицательно заряженные молекулы нуклеиновых кислот с образованием комплексов, тем самым вводя комплексы в клетки.
По сравнению с трансфекционным реагентом PEI 25000, PEI 40000 легко растворяется и может быть непосредственно растворен в воде. Кроме того, PEI 25000 содержит 4-11% пропионильных остатков, которые предотвращают связывание полимерного остова с ДНК.Однако PEI 40000 представляет собой полноценную конструкцию сарая, поэтому ее эксплуатационные характеристики неизменно эффективны.
3. Как работает линейный PEI MW 40000?
Полиэтиленимин (ПЭИ) является превосходным многофункциональным невирусным вектором с хорошей клеточной адгезией и может использоваться для трансфекции клеток независимо от лизосомальных ингибиторов. ПЭИ и ДНК связаны электростатическими силами, заставляя ДНК разрушаться из рыхлой спиральной структуры в сферические комплексы частиц. Комплексы ПЭИ-ДНК обычно имеют положительный заряд для электростатического взаимодействия с внешней клеточной мембраной и поглощаются эндоцитозом. Эндоцитированные комплексы ПЭИ-ДНК затем захватываются эндосомами для переноса в лизосомы для деградации. Постоянно растущее внутреннее ионное давление заставляет эндосому набухать и разрываться, высвобождая чужеродную ДНК в цитоплазму. Этот механизм трансфекции называется эффектом «протонной губки».
Исследования показали, что молекулы PEI могут покрывать поверхность комплексов PEI-ДНК, чтобы в достаточной степени защитить ДНК от деградации нуклеазами в цитоплазме, обеспечивая транзит чужеродной ДНК из цитоплазмы в ядро. Более того, молекулы PEI могут встраиваться в фосфолипидные мембраны и создавать стабильные каналы для переноса ДНК в ядро клетки. Молекулы PEI не проникают в ядро клетки и играют важную роль в качестве вектора ДНК.
Экспрессию гена можно обнаружить через 1-4 дня после введения экзогенного гена в клетки млекопитающих. Эта экспрессия обусловлена тем, что часть введенной ДНК транскрибируется в мРНК после попадания в ядро, а затем транслируется в цитоплазму. Поскольку этот метод относительно прост и легок в реализации, путем выбора хорошего вектора экспрессии и метода трансфекции количество экспрессии белка может достичь более высокого уровня. Реагенты для трансфекции PEI широко используются в научных исследованиях и промышленных приложениях в качестве общего метода трансфекции для изучения структуры и функции белка.
4. Каковы особенности PEI MW 40000?
Как транзиторный трансфекционный реагент с низкой цитотоксичностью, PEI 40000 имеет высокую эффективность трансфекции и высокую эффективность экспрессии генов в таких клетках, как HEK293 и CHO. Линейный трансфекционный реагент PEI был проверен для широкого спектра клеточных линий, включая клетки HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 и Hela. Эффективность трансфекции достигает 80%~90%. Продолжить просмотр данных о производительности:
- Высокая эффективность трансфекции, подходит для адгезивных и суспензионных клеток
Подходит для различных линий клеток, включая клетки HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2, Hela и т. д. Эффективность трансфекции достигает 80–90%.
Таблица 1.Список проверенных клеточных линий
| Адгезивные клетки (1 мкг ДНК) | Эффективность | Суспензионные клетки (2 мкг ДНК) | Эффективность |
| ХЕК-293 | 80%-90% | СНО-К1 | 85% |
| Сф9 | 80%-90% | ХЕК-293Т | 70%-80% |
| ГепG2 | 80%-90% | ТХП-1 | 70%-80% |
| Хела | 80%-90% |
| |
Рисунок 2. Трансфицированная плазмидой GFP PEI 40000 в адгезивные клетки HEK-293, эффективность трансфекции достигла 90% через 72 ч (слева); PEI 40000 трансфицировал плазмиду GFP в суспензионные клетки CHO-K1, и эффективность трансфекции достигла 80% через 72 часа (справа)
- Низкая токсичность
Он обеспечивает жизнеспособность клеток и повышает эффективность трансфекции.
Рисунок 3. PEI 40000, предоставленный YEASEN, имеет гораздо более низкую цитотоксичность, чем конкурирующий поли**
- Эффективность трансфекции выше, чем у PEI 25000, что позволяет полностью заменить PEI 25000.
PEI 25000 содержит 4-11% пропионильных остатков, что предотвращает связывание полимерного остова с ДНК. По сравнению с PEI 25000, PEI 40000 представляет собой полностью шедовую конструкцию, поэтому его производительность неизменно эффективна.
Рисунок 4. Клетки HEK-293 были временно трансфицированы плазмидой GFP с использованием трансфекционных реагентов PEI 25000 и PEI 40000, и флуоресценция наблюдалась через 72 часа. Экспериментальные результаты: эффективность трансфекции PEI 40000 выше, чем PEI25000.
- Простая конфигурация и короткое время трансфекции
Этот продукт является растворимым типом, который можно растворять непосредственно в воде без регулировки pH. Совместим с сывороткой и антибиотиками, нет необходимости менять среду.
- Экономически выгоден, подходит для крупномасштабной транзиентной трансфекции
По сравнению с импортной продукцией реагент для трансфекции Yeasen PEI 40000 имеет низкую цену и стабильные партии.
5. Другие реагенты для трансфекции от Yeasen
Yeasen имеет полную линейку реагентов для трансфекции, включая современные основные методы химической трансфекции, катионные липосомальные реагенты и катионные полимерные реагенты, которые можно применять в различных сценариях использования. В этом разделе мы перечислим все реагенты для трансфекции от Yeasen и их применение в следующей таблице, вы можете выбрать лучший из них, который подходит для вашего эксперимента.
Таблица 2.Список реагентов для трансфекции Yeasen
| Кот# | Название продукта | Тип нуклеиновой кислоты | Тип ячейки |
| 40823ES | ДНК | Приверженец и Суспензионные клетки | |
| 40816ES | ДНК | Приверженец и Суспензионные клетки | |
| 40820ES | ДНК | Приверженец и Суспензионные клетки | |
| 40821ES | ДНК | Приверженец и Суспензионные клетки | |
| 40802ES | ДНК (<10kb), shRNA | Адерентные клетки | |
| 40805ES | Суспензия Hieff Trans™ без клеток Реагент для липосомальной трансфекции (Запросить) | ДНК (<10 кб) | Суспензионные клетки (для взвешенные клетки крови или иммунные клетки, эффективность трансфекции из текущих химических реагентов не высокий. Электропорационный или вирусный метод рекомендуются.) |
| 40806ES | siRNA、миРНК、пре-миРНК, имитирующая миРНК, антимиРНК | Адгезивные и суспензионные клетки |
6. Отношение к чтению
Реагент для трансфекции – Hieff Trans™ и PEI
Руководство по выбору реагентов для трансфекции клеток in vitro
Ссылка:
[1] Лу, И., Яо, Дж. и Чжоу, Дж. (б.д.). Формирование и агрегация комплексов полиэтиленимин-ДНК. Фармацевтический факультет, Нанкин 210009.
[2] Сабин, Дж. и др. (2022). Новые идеи о механизме трансфекции полиэтиленимина и их влияние на генную терапию и ДНК-вакцины. Коллоиды и поверхности B: Биоинтерфейсы, 210, 112219.
[3] Транзиторная трансфекция клеток млекопитающих полиэтиленимином (ПЭИ). Лонго ПА, Кавран ДЖМ, Ким МС, Лихи ДЖД