Linear PEI 40000, ett mer effektivt transfektionsreagens
I allmänhet är transfektion processen att artificiellt introducera nukleinsyror (DNA eller RNA) i eukaryota celler. Transfektionsreagens, som namnet antyder, är en serie reagenser involverade i transfektion. Under transfektionsprocessen besväras vi ofta av den låga transfektionseffektiviteten, snäva tillämpningsområde, stark toxicitet, besvärlig drift och dyra pris på transfektionsreagenser. Så, finns det ett transfektionsreagens som kan lösa dessa problem? Ja, linjär PEI är det bästa valet för att lösa dessa problem.
Obs: Yeasen har lanserat en ny PEI Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV Transfektionsreagens för storskalig produktion av olika virusvektorer och övergående uttryck av proteiner lämpliga för adherenta och suspensionssystem.
1. Vilka typer av celltransfektion finns?
2. Vad är linjär PEI MW 40000?
3. Hur fungerar linjär PEI MW 40000?
4. Vilka egenskaper har PEI MW 40000?
5. Andra transfektionsreagens från Yeasen
6. Angående läsning
1. Vilka typer av celltransfektion finns?
Innan vi introducerar linjär PEI MW 40000, låt oss först kortfattat förstå typerna av celltransfektion. Celltransfektion är av stor betydelse för genetisk forskning, proteinforskning och cytologiforskning, vilket hänvisar till processen att artificiellt introducera nukleinsyror (DNA eller RNA) i celler med hjälp av icke-virala infektionsmetoder. Huvudsyftet med transfektion är att studera funktionen hos gener eller genprodukter, genom att förstärka eller hämma specifikt genuttryck i celler, eller att producera rekombinanta proteiner. Införandet av exogen nukleinsyra kommer att förändra cellers egenskaper för att uppnå syftet med transfektion, vilket är användbart för studiet av genreglering och proteinuttryck, såväl som syntes och produktion av proteiner.
Celltransfektioner kan delas upp med kemiska, biologiska och fysikaliska metoder, eller uppehållstiden för en främmande gen i cellen. Vid transient transfektion kan den införda nukleinsyran existera i cellen under en begränsad tid utan att replikera, medan den införda nukleinsyran med stabil transfektion integreras i värdgenomet och kan uttryckas i avkomman till den transfekterade cellen.
Med så många olika celltransfektionsmetoder, hur väljer man rätt metod?
Ingen enskild transfektionsmetod är lämplig för alla celltyper och uppfyller alla experimentella behov. Den optimala transfektionsmetoden bör väljas i enlighet med kraven för celltypen och experimentella förhållanden.
För närvarande är kemiska transfektionsreagens fortfarande de vanliga celltransfektionsmetoderna på grund av deras enkla drift och kompatibilitet med en mängd olika cellinjer.
2. Vad är linjär PEI MW 40000?
Polyetylenimin linjär (PEI) MW40000 (snabb lysis) är ett transient transfektionsreagens baserat på polyetylenimin med en molekylvikt på 40 000 (PEI 40000). PEI 40000 är en högladdad katjonisk polymer som lätt kan binda negativt laddade nukleinsyramolekyler för att bilda komplex och därigenom introducera komplex i celler.
Jämfört med PEI 25000 transfektionsreagens är PEI 40000 lätt att lösa och kan lösas direkt i vatten. Dessutom innehåller PEI 25000 4-11 % propionylrester, vilket förhindrar polymerstommen från att binda till DNA.Men PEI 40000 är en komplett byggnadskonstruktion, så dess prestanda är genomgående effektiv.
3. Hur fungerar linjär PEI MW 40000?
Polyetylenimin (PEI) är en utmärkt multifunktionell icke-viral vektor med god cellvidhäftning och kan användas för att transfektera celler oberoende av lysosomala inhibitorer. PEI och DNA är bundna av elektrostatiska krafter, vilket gör att DNA:t kollapsar från den lösa spolliknande strukturen till sfäriska partikelkomplex. PEI-DNA-komplexen är vanligtvis positivt laddade för att interagera elektrostatiskt med det externa cellmembranet och tas upp av endocytos. De endocytoserade PEI-DNA-komplexen fångas sedan upp av endosomer för överföring till lysosomer för nedbrytning. Det ständigt ökande inre jontrycket gör att endosomen sväller och brister, vilket frigör främmande DNA i cytoplasman. Denna transfektionsmekanism kallas "protonsvamp"-effekt.
Studier har visat att PEI-molekyler kan täcka ytan av PEI-DNA-komplexen för att tillräckligt skydda DNA från att brytas ned av nukleaser i cytoplasman, vilket säkerställer transitering av främmande DNA från cytoplasman till kärnan. Dessutom kan PEI-molekyler infogas i fosfolipidmembranen och skapa stabila kanaler för att överföra DNA till cellkärnan. PEI-molekyler kommer inte in i cellkärnan och spelar en viktig roll som DNA-vektor.
Genuttrycket kan detekteras 1-4 dagar efter att den exogena genen introducerats i däggdjursceller. Detta uttryck beror på det faktum att en del av det införda DNA:t transkriberas till mRNA efter att ha kommit in i kärnan och sedan translaterat till cytoplasman. Eftersom denna metod är relativt enkel och lätt att implementera, genom att välja en bra expressionsvektor och transfektionsmetod, kan mängden proteinuttryck nå en högre nivå. PEI-transfektionsreagensen har använts i stor utsträckning i vetenskaplig forskning och industriella tillämpningar som en vanlig transfektionsmetod för att studera proteinstruktur och funktion.
4. Vilka egenskaper har PEI MW 40000?
Som ett transient transfektionsreagens med låg cytotoxicitet har PEI 40000 hög transfektionseffektivitet och hög genuttryckseffektivitet i celler som HEK293 och CHO. Linjär PEI-transfektionsreagens har validerats för ett brett spektrum av cellinjer inklusive HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 och Hela-celler. Transfektionseffektiviteten är så hög som 80% ~ 90%. Fortsätt att se prestationsdata:
- Hög transfektionseffektivitet, lämplig för vidhäftande och suspensionsceller
Den är lämplig för en mängd olika cellinjer inklusive HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 och Hela-celler, etc., transfektionseffektiviteten är så hög som 80% ~ 90%.
Tabell 1.Lista över validerade cellinjer
| Vidhäftande celler (1 μg DNA) | Effektivitet | Suspensionsceller (2 μg DNA) | Effektivitet |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85 % |
| Sf9 | 80%-90% | HEK-293T | 70%-80% |
| HepG2 | 80%-90% | THP-1 | 70%-80% |
| Hela | 80%-90% |
| |
Figur 2. PEI 40000 transfekterade GFP-plasmid till vidhäftande celler HEK-293, transfektionseffektiviteten nådde 90% efter 72 timmar (vänster); PEI 40000 transfekterade GFP-plasmid till suspensionsceller CHO-K1, och transfektionseffektiviteten nådde 80% efter 72 timmar (höger)
- Låg toxicitet
Det säkerställer cellviabilitet och förbättrar transfektionseffektiviteten.
Figur 3. PEI 40000 från YEASEN har mycket lägre cytotoxicitet än konkurrerande poly**
- Transfektionseffektiviteten är högre än PEI 25000, som helt kan ersätta PEI 25000
PEI 25000 innehåller 4-11 % propionylrester, vilket förhindrar polymerryggraden från att binda till DNA. Jämfört med PEI 25000 är PEI 40000 en komplett skjulkonstruktion, så dess prestanda är genomgående effektiv.
Figur 4. HEK-293-celler transfekterades övergående med GFP-plasmid med PEI 25000 och PEI 40000 transfektionsreagens, och fluorescensen observerades efter 72 timmar. Experimentella resultat: PEI 40000 transfektionseffektivitet är bättre än PEI25000.
- Enkel konfiguration och kort transfekteringstid
Denna produkt är av en omedelbar typ, som kan lösas direkt i vatten utan pH-justering. Och kompatibel med serum och antibiotika, inget behov av att byta medium.
- Kostnadseffektiv, lämplig för storskalig transient transfektion
Jämfört med importerade produkter har Yeasen PEI 40000 transfektionsreagens ett lågt pris och stabila partier.
5. Andra transfektionsreagens från Yeasen
Yeasen har en komplett produktlinje av transfektionsreagenser, inklusive de nuvarande vanliga kemiska transfektionsmetoderna, katjoniska liposomreagenser och katjoniska polymerreagenser, som kan användas i en mängd olika användningsscenarier. I det här avsnittet listar vi alla transfektionsreagenser från Yeasen och deras tillämpningar i följande tabell, du kan välja den bästa som är lämplig för ditt experiment.
Tabell 2.Lista över Yeasen-transfektionsreagenser
| Katt# | Produktnamn | Nukleinsyratyp | Celltyp |
| 40823ES | DNA | Anhängare och Suspensionsceller | |
| 40816ES | DNA | Anhängare och Suspensionsceller | |
| 40820ES | DNA | Anhängare och Suspensionsceller | |
| 40821ES | DNA | Anhängare och Suspensionsceller | |
| 40802ES | DNA (<10 kb), shRNA | Atillhörande celler | |
| 40805ES | Hieff Trans™ upphängningscellfri Liposomal transfektionsreagens (Fråga) | DNA (<10 kb) | Suspensionsceller (för suspenderade blodkroppar eller immunförsvar celler, transfektionseffektiviteten av nuvarande kemiska reagenser är inte hög. Elektroporations- eller virusmetod rekommenderas.) |
| 40806ES | siRNA、miRNA、pre-miRNA, härma miRNA, antimiRNA | Vidhäftande och suspensionsceller |
6. Angående läsning
Transfektionsreagens – Hieff Trans™ och PEI
In vitro produktvalsguide för celltransfektionsreagens
Hänvisning:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Bildning och aggregeringsbeteende hos polyetylenimin-DNA-komplex. Department of Pharmaceutics, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Nya insikter om mekanismen för polyetylenimintransfektion och deras implikationer på genterapi och DNA-vacciner. Kolloider och ytor B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Övergående däggdjurscelltransfektion med polyetylenimin (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ