การถอดรหัสย้อนกลับคือกระบวนการแปลง RNA ให้เป็นดีเอ็นเอเสริม (cDNA) ซึ่งถูกควบคุมโดยเอนไซม์ทรานสคริปเทสย้อนกลับ ในที่ที่มีไพรเมอร์แอนนีลลิง ทรานสคริปเทสย้อนกลับจะจับกับเทมเพลต RNA ก่อน กิจกรรมโพลีเมอเรสของดีเอ็นเอที่ขึ้นอยู่กับ RNA ของทรานสคริปเทสย้อนกลับจะสังเคราะห์ cDNA โดยการรวม dNTP จากส่วนผสมของปฏิกิริยา กระบวนการนี้ส่งผลให้เกิดการสร้างสายไฮบริด cDNA:RNA ซึ่งเรียกว่าการสังเคราะห์ cDNA สายแรก
รีเวิร์สทรานสคริปเทสของไวรัส Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) เป็นหนึ่งในรีเวิร์สทรานสคริปเทสที่ใช้กันทั่วไปในกระบวนการทางห้องปฏิบัติการชีววิทยาโมเลกุล เพื่อให้เกิดประสิทธิภาพในการรีเวิร์สทรานสคริปเทสที่สูงขึ้น มีเสถียรภาพทางความร้อนที่ดีขึ้น และอัตราการสังเคราะห์ cDNA ที่เพิ่มขึ้น รีเวิร์สทรานสคริปเทสดั้งเดิมจึงมักถูกดัดแปลงทางพันธุกรรม ปัจจุบัน รีเอเจนต์รีเวิร์สทรานสคริปเทสที่มีจำหน่ายในท้องตลาดมักต้องใช้เวลาในการเกิดปฏิกิริยาตั้งแต่ 15 ถึง 30 นาที ซึ่งถือว่าค่อนข้างนาน เมื่อจำนวนตัวอย่างปฏิกิริยามีมาก เวลาที่ใช้โดยรวมอาจเพิ่มขึ้นอย่างมาก ผลิตภัณฑ์รีเวิร์สทรานสคริปเทส 5 นาทีที่มีอยู่ของ YESSEN สามารถเสร็จสิ้นกระบวนการรีเวิร์สทรานสคริปเทสได้ภายในเวลาเพียง 5 นาที ช่วยประหยัดเวลาและมีประสิทธิภาพสูง
| พีผลิตภัณฑ์ พีการทรงตัว | ชื่อสินค้า | แมว# |
| พรีมิกซ์การถอดรหัสย้อนกลับที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และให้ผลผลิตสูง | ไฮแฟร์™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix สำหรับ qPCR | 11156ES |
| พรีมิกซ์การถอดรหัสย้อนกลับที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และให้ผลผลิตสูง (พร้อมการกำจัด gDNA) | ไฮแฟร์™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix สำหรับ qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| การกำจัด gDNA และการถอดรหัสย้อนกลับแบบรวดเร็วในขั้นตอนเดียว | ไฮแฟร์™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix สำหรับ qPCR | 11151ES |
| ชุดการถอดรหัสย้อนกลับอย่างรวดเร็วแบบยืดหยุ่นสำหรับการเลือกไพรเมอร์ (พร้อมการกำจัด gDNA) | ไฮแฟร์™ ชุดสังเคราะห์ cDNA AdvanceFast 1st Strand (ไม่มีสีย้อม) | 11150ES |
| ชุดการถอดรหัสย้อนกลับอย่างรวดเร็วแบบยืดหยุ่นสำหรับการเลือกไพรเมอร์ (พร้อมการกำจัด gDNA และสีย้อมติดตาม) | ไฮแฟร์™ ชุดสังเคราะห์ cDNA AdvanceFast 1st Strand | 11149ES |
ร้านแนะนำบูทีค 1
พรีมิกซ์การถอดรหัสย้อนกลับที่รวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และให้ผลผลิตสูง (พร้อมการกำจัด gDNA) (หมายเลขสินค้า #11155ES)
ผลผลิตการถอดรหัสย้อนกลับสูงจากเทมเพลตที่แตกต่างกัน
| ตัวอย่าง | 293ที เซลล์ | อาราบิดอปซิส ทาเลียนา | หนู | ตับปลา |
| 11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| แบรนด์เอ | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| ยี่ห้อ บี | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| ยี่ห้อ ซี | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| แบรนด์ ดี | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
รูปภาพ การถอดรหัสย้อนกลับดำเนินการโดยใช้เทมเพลต RNA จากเซลล์ 293T ของมนุษย์ Arabidopsis thaliana ตับหนู และตับปลา แบรนด์ A, B, C และ D ล้วนเป็นรีเอเจนต์ถอดรหัสย้อนกลับแบบย่อยสองขั้นตอนที่มีเวลาถอดรหัสย้อนกลับแตกต่างกันตั้งแต่ 15 ถึง 20 นาที ผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าชุดถอดรหัสย้อนกลับ 5 นาที Hifair 11155ES ให้ผลผลิตสูงกว่าเมื่อเทียบกับแบรนด์อื่น และค่า Ct ต่ำกว่า
ร้านแนะนำบูทีค สอง
พรีมิกซ์สำหรับการย่อยและถอดรหัสย้อนกลับในขั้นตอนเดียวภายใน 5 นาที (หมายเลขสินค้า #11151ES)
ผลผลิตการถอดรหัสย้อนกลับสูง
รูปภาพ โดยใช้ RNA ของเซลล์มนุษย์ 293T เป็นแม่แบบ ได้ทำการทดสอบยีน 3 ยีนตามลำดับ โดยแบรนด์ A, B และ C ล้วนเป็นรีเอเจนต์สำหรับกำจัด gDNA และถอดรหัสย้อนกลับในขั้นตอนเดียว ผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าเมื่อใช้ RNA ทั้งหมด 1 μg และ 10 ng ผลผลิตของการถอดรหัสย้อนกลับด้วยชุด 11151ES จะเหนือกว่าแบรนด์อื่น โดยมีค่า Ct น้อยกว่า
รูปภาพ โดยใช้ RNA ของ Arabidopsis thaliana เป็นแม่แบบ แบรนด์ A, B และ C ล้วนเป็นรีเอเจนต์การถอดรหัสย้อนกลับและกำจัด gDNA ขั้นตอนเดียว ผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าเมื่อใช้ RNA ทั้งหมด 1 μg และ 10 ng ผลผลิตการถอดรหัสย้อนกลับด้วยชุด 11151ES เหนือกว่าแบรนด์อื่น โดยมีค่า Ct น้อยกว่า
ความไวต่อความรู้สึกดีเยี่ยม
รูปที่ 1 การใช้ RNA ของเซลล์มนุษย์ 293T เป็นแม่แบบ ยีนที่มีปริมาณ GC 30%, GC 50%, GC 60% และ GC 70% จะถูกขยายขึ้น โดยใช้ RNA อินพุตทั้งหมด 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng และ 1 μg สำหรับการถอดรหัสย้อนกลับตามด้วยการตรวจจับเชิงปริมาณด้วยฟลูออเรสเซนต์ ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 11151ES สามารถรองรับการถอดรหัสย้อนกลับสำหรับอินพุต RNA ตั้งแต่ 100 pg ถึง 1 μg
ร้านแนะนำ Tสาม
ชุดถอดเสียงย้อนกลับอย่างรวดเร็ว 5 นาทีหมายเลขแมว 11149/11150ES-
ความไวสูง โดยมีขีดจำกัดการตรวจจับขั้นต่ำถึง 10 pg
รูป การใช้ RNA ทั้งหมดจากเซลล์ 293T เป็นแม่แบบ ได้ทำการถอดรหัสย้อนกลับด้วย 11149ES และนำ cDNA ที่ได้ไปวิเคราะห์เชิงปริมาณด้วย qPCR ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 11149ES สามารถถอดรหัสอินพุต RNA ตั้งแต่ 10 pg ถึง 1 μg ได้สำเร็จ ทำให้ได้ผลลัพธ์เชิงปริมาณที่แม่นยำ
ประสิทธิภาพการขยายที่ดี ด้วยการขยายที่ยาวที่สุดของชิ้นส่วนขนาด 14 กิโลไบต์
รูป.การใช้ RNA ทั้งหมดจากเซลล์ 293T เป็นแม่แบบ ได้ทำการถอดรหัสย้อนกลับโดยใช้ 11149ES และทำการตรวจหา cDNA ที่ได้ด้วยวิธี PCR ผลลัพธ์ระบุว่า 11149ES สามารถสังเคราะห์ชิ้นส่วน cDNA ที่มีความยาวตั้งแต่ 1 kb ถึง 14 kb ได้ โดยการทำ PCR ในภายหลังจะมีสถานการณ์ที่สามารถใช้ได้บางกรณี หากจำเป็นต้องถอดรหัสย้อนกลับโดยตรงของชิ้นส่วนที่มีขนาดมากกว่า 10 kb ขอแนะนำให้ขยายเวลาการถอดรหัสย้อนกลับเป็น 20-30 นาที เพื่อให้แน่ใจว่าจะได้ชิ้นส่วนสุดท้าย
การเปรียบเทียบประสิทธิภาพการถอดรหัสย้อนกลับ
| ปริมาณอินพุต RNA | ค่าซีที | |
| 11149ES | แบรนด์เอ | |
| 1 ไมโครกรัม | 15.2 | 15.5 |
| 100 นาโนกรัม | 18.0 | 18.5 |
| 10 ง | 21 | 21.7 |
| 1 ง | 24.5 | 25.1 |
| 100 หน้า | 29.1 | 29.7 |
| 10 หน้า | 32.7 | 34.3 |
รูป การใช้ RNA ทั้งหมดจากเซลล์ 293T เป็นแม่แบบ ได้ทำการถอดรหัสย้อนกลับโดยใช้ 11149ES และแบรนด์ A โดยที่ 11149ES ไม่ต้องผ่านขั้นตอนการเอา gDNA ออก cDNA ที่ได้จะถูกนำไปวิเคราะห์เชิงปริมาณด้วย qPCR ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าเวลาในการถอดรหัสย้อนกลับสำหรับแบรนด์ A คือ 13 นาที ในขณะที่ 11149ES คือ 5 นาที การวิเคราะห์เชิงปริมาณของผลิตภัณฑ์ต่างๆ แสดงให้เห็นว่าค่า Ct สำหรับ 11149ES น้อยกว่าหรือใกล้เคียงกับค่าของแบรนด์คู่แข่ง ซึ่งบ่งชี้ว่าประสิทธิภาพในการถอดรหัสย้อนกลับ 5 นาทีของ 11149ES นั้นดีกว่าหรือเทียบเท่ากับแบรนด์ A
| ปริมาณอินพุต RNA | ค่าซีที | |
| 11149ES | ยี่ห้อ บี | |
| 1 ไมโครกรัม | 16.2 | 17.4 |
| 100 นาโนกรัม | 19.0 | 20.5 |
| 10 ง | 22 | 23.8 |
| 1 นาโนกรัม | 26 | 27.9 |
| 100 หน้า | 31.4 | 33.2 |
| 10 หน้า | 32.9 | 35.6 |
รูป.การใช้ RNA ทั้งหมดจากเซลล์ 293T เป็นแม่แบบ ได้ทำการถอดรหัสย้อนกลับโดยใช้ 11149ES และแบรนด์ B โดยที่ 11149ES ไม่ต้องผ่านขั้นตอนการเอา gDNA ออก cDNA ที่ได้จะถูกนำไปวิเคราะห์เชิงปริมาณด้วย qPCR ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าเวลาในการถอดรหัสย้อนกลับสำหรับแบรนด์ B คือ 20 นาที ในขณะที่ 11149ES คือ 5 นาที การวิเคราะห์เชิงปริมาณของสารตั้งต้นที่แตกต่างกันเผยให้เห็นว่าค่า Ct สำหรับ 11149ES นั้นน้อยกว่าหรือใกล้เคียงกับค่าของแบรนด์ B ซึ่งบ่งชี้ว่าประสิทธิภาพในการถอดรหัสย้อนกลับ 5 นาทีของ 11149ES นั้นดีกว่าหรือเทียบเท่ากับของแบรนด์ B โดยประมาณ
สินค้าที่เกี่ยวข้องที่แนะนำ
| วิธี | พีผลิตภัณฑ์ พีการทรงตัว | ชื่อสินค้า | แมว# |
| qPCR ที่ใช้สีย้อม | พรีมิกซ์เชิงปริมาณสากลที่มีความจำเพาะสูง (ตามสีย้อม) | ไฮฟ์ ยูนิคอน™ qPCR ขั้นสูง SYBR Master Mix | 11185ES |
| พรีมิกซ์เชิงปริมาณสากลที่มีความไวสูง (ตามสีย้อม) | 11184ES | ||
| การถอดเสียงย้อนกลับ | การย่อยแบบขั้นตอนเดียว 5 นาทีและพรีมิกซ์การถอดรหัสย้อนกลับ (สำหรับ qPCR) | ไฮแฟร์™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix สำหรับ qPCR | 11151ES |
| การถอดรหัสย้อนกลับอย่างรวดเร็ว 5 นาที สามารถสังเคราะห์ cDNA ได้ถึง 14 กิโลเบส พร้อมการกำจัด gDNA (สำหรับ PCR/qPCR) - เวอร์ชัน Tracer | ไฮแฟร์™ ชุดสังเคราะห์ cDNA AdvanceFast 1st Strand | 11149ES | |
| การถอดรหัสย้อนกลับอย่างรวดเร็ว 5 นาที สามารถสังเคราะห์ cDNA ได้ถึง 14 กิโลเบส พร้อมการกำจัด gDNA (สำหรับ PCR/qPCR) | ไฮแฟร์™ ชุดสังเคราะห์ cDNA AdvanceFast 1st Strand (ไม่มีสีย้อม) | 11150ES | |
| พรีมิกซ์การสังเคราะห์ cDNA สายแรกคุณภาพสูงพร้อมการกำจัด gDNA (สำหรับ qPCR) | ไฮแฟร์™ III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix สำหรับ qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES |