——การสร้างจีโนไทป์มากขึ้น ใช้เวลาน้อยลง และสารเคมีน้อยลง

การสร้างจีโนไทป์โดยใช้ PCR และการทดลองอื่นๆ มักต้องใช้การฟอกดีเอ็นเอจีโนมจากตัวอย่าง เมื่อมีตัวอย่างจำนวนมากที่ต้องทดสอบ กระบวนการฟอกดีเอ็นเอจีโนมจะใช้เวลานาน ซ้ำซาก และมีค่าใช้จ่ายสูง Yeasen บริษัท Biology ได้พัฒนาผลิตภัณฑ์ Direct PCR Kit ชุดหนึ่งโดยปรับเปลี่ยน Taq DNA polymerase และปรับปรุงระบบปฏิกิริยา PCR ให้เหมาะสม ทำให้ไม่จำเป็นต้องทำการทำให้บริสุทธิ์ทางจีโนมอีกต่อไป

Clever PCR: พีซีอาร์โดยตรง

Yeasenชุด Direct PCR ของ 's เริ่มต้นโดยตรงจากตัวอย่าง โดยใช้ตัวอย่างดิบจำนวนน้อย (รูปที่ 1-A) หรือผลิตภัณฑ์ไลเสทของตัวอย่าง (รูปที่ 1-B) โดยไม่ต้องทำการทำให้บริสุทธิ์ทางจีโนมเป็นแม่แบบสำหรับการสร้างจีโนไทป์โดยใช้ PCR (รูปที่ 1) เมื่อเปรียบเทียบกับการสร้างจีโนไทป์โดยใช้ PCR ทั่วไปแล้ว ชุด Direct PCR จะใช้ตัวอย่างน้อยกว่า ใช้งานง่าย มีต้นทุนการทดลองต่ำ และช่วยให้ตรวจจับตัวอย่างได้ในปริมาณมาก

รูปที่ 1 เวิร์กโฟลว์การขยาย PCR โดยตรง

วิธีการโดยตรง: นำตัวอย่างปริมาณเล็กน้อยแล้วเติมลงใน PCR Master Mix โดยตรงเพื่อระบุ PCR

B. วิธีการไลซิส: หลังจากเก็บตัวอย่างแล้ว ให้เติมตัวอย่างลงในสารละลายไลซิสเพื่อไลซิสและปลดปล่อยดีเอ็นเอจีโนม นำน้ำไลเสทปริมาณเล็กน้อยมาเติมลงใน PCR Master Mix เพื่อระบุด้วย PCR

ข้อได้เปรียบทางเทคนิค

โดยตรง: ไม่จำเป็นต้องใช้เวลานานและมีราคาแพงในการทำให้ DNA บริสุทธิ์
รวดเร็ว: การเตรียมเทมเพลตเสร็จสิ้นภายใน 10 นาที และปฏิกิริยา PCR เสร็จสิ้นภายในเวลาเพียง 30 นาที
ง่ายๆ: ตัวอย่างสามารถไลซ์ได้โดยไม่ต้องตัดหรือบด และ PCR Mix อยู่ในรูปแบบที่ผสมไว้ล่วงหน้า ช่วยลดจำนวนขั้นตอนการปิเปต
การประหยัด : ใช้ปริมาณวัสดุเพียงเล็กน้อย
ปริมาณงานสูง: ปฏิกิริยาไลซิสสามารถเสร็จสมบูรณ์ได้ในเพลต 96 หลุม
ทนทานต่อการยับยั้ง: ทนทานต่อตัวอย่างสัตว์และพืชต่างๆ

กระบวนการทดลองชุด PCR โดยตรง

ผลิตภัณฑ์ชุดนี้ใช้ระบบไลซิสโปรตีเอสเฉพาะในการไลซิสตัวอย่าง สารละลายไลซิสสามารถใช้เป็นเทมเพลตโดยตรงและจับคู่กับ PCR Master Mix ที่ให้มาในชุดเพื่อการขยายยีน

รูปที่ 2 กระบวนการทดลอง PCR โดยตรงของเนื้อเยื่อหนู

มะเดื่อ.3. กระบวนการทดลอง PCR โดยตรงกับเนื้อเยื่อพืช

ตารางการเลือกผลิตภัณฑ์ PCR โดยตรง

ซีรี่ส์ผลิตภัณฑ์	เมาส์ไดเร็กต์พีซีอาร์เจเนอเรชั่นที่สอง	เมาส์ไดเร็กต์พีซีอาร์ รุ่นแรก	บลัดไดเร็ค PCR	การปลูกพืชโดยตรง PCR
หมายเลขสินค้า	10189ES	10185ES	10188ES	10187ES
ข้อมูลจำเพาะ	20ตัน/50ตัน/200ตัน/500ตัน	50 ตัน/200 ตัน	20ตัน/50ตัน/200ตัน/500ตัน	50 ตัน/200 ตัน
คุณสมบัติ
ความยาวของแอมพลิคอน	≤5กิโลไบต์	≤1กิโลไบต์	≤8กิโลไบต์	≤1กิโลไบต์
ระยะเวลาขยาย (s/kb)	3-20 วินาที	30 วินาที	≤2kb: 3-5 วินาที ≤8 กิโลไบต์: 10 วินาที	60 วินาที
สิ่งมีชีวิตที่สามารถนำไปใช้ได้	หนู, หนูบ้าน	หนู, หนูบ้าน	มนุษย์ หนู แพะ ไก่ หมู ฯลฯ	ข้าว ข้าวโพด ยาสูบ เรพซีด ข้าวสาลี ถั่วเหลือง ฯลฯ
ประเภทเนื้อเยื่อ/วัสดุที่สามารถใช้งานได้	หางหนู หูหนู นิ้วเท้า (พร้อมกล้ามเนื้อ) และอวัยวะอื่นๆ	หางหนู หูหนู นิ้วเท้า (พร้อมกล้ามเนื้อ) และอวัยวะอื่นๆ	เลือดสดที่มีสารกันเลือดแข็งทั่วไป เช่น EDTA, เฮปาริน, ซิเตรต, เลือดแช่เย็น (แช่แข็ง) และเลือดแห้งที่วางขายตามท้องตลาด เช่น Whatman903 และเอฟทีเอ	ใบอ่อน ใบแก่ ต้นกล้า ลำต้นอ่อน
ตัวอย่างการใช้งาน	เนื้อเยื่อ: 5 มก. หางหนู: 1-5 มม.	เนื้อเยื่อ: 5-10 มก. หางหนู: 1-5 มม.	เลือดทั้งหมด: 0.วอตแมน 5%-20% จุดเลือดแห้ง: 1 มม2	ใบ: 1-10 มม. เมล็ด: 1-3 มม.
เวลาปล่อยจีโนม	5-10 นาที	15 นาที	0-3 นาที	0-10 นาที
โครงสร้างปลายผลิตภัณฑ์	ปลายมน	ปลายมน	ปลายมน	ปลายมน
อุณหภูมิการอบ	เทอร์โมมิเตอร์-(2~5)℃	เทอร์โมมิเตอร์-(2~5)℃	เทอร์โมมิเตอร์-(1~2)℃	เทอร์โมมิเตอร์-(2~5)℃
GC คลิปปิ้ง เรนจ์	29-70%	30-70%	30-75%	40-65%
กิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส 5'-3'	ใช่	ใช่	ใช่	ใช่
แอปพลิเคชั่น
การกำหนดจีโนไทป์	ใช่	ใช่	ใช่	ใช่
มัลติเพล็กซ์พีซีอาร์	สูงถึง 5x		สูงถึง 3-4x
การขยายตัวอย่างโดยตรง	ใช่	ใช่	ใช่	ใช่
คุณสมบัติอื่น ๆ
ตัวบ่งชี้อิเล็กโทรโฟเรซิส	ไม่มีสี	สีฟ้า	ไม่มีสี	สีฟ้า
ฮอตสตาร์ต	ใช่	ใช่	ใช่	ใช่
แบบผสมสำเร็จ/ชุด	ชุดคิท (พร้อมมิกซ์)	ชุดคิท (พร้อมมิกซ์)	ชุดคิท(พร้อมมิกซ์+บัฟเฟอร์)	ชุดคิท (พร้อมมิกซ์)

ข้อดีของผลิตภัณฑ์

Taq DNA Polymerase ที่ได้รับการปรับเปลี่ยนเป็นเครื่องรับประกัน Direct PCR: มีความทนทานต่อสารยับยั้งได้ดีเยี่ยม

เมื่อใช้ตัวอย่างที่ไม่ได้ผ่านการทำให้บริสุทธิ์เป็นเทมเพลต จะมีการนำส่วนประกอบจำนวนมากที่ยับยั้งปฏิกิริยา PCR เข้ามา การบรรลุผลลัพธ์ที่เหมาะสมหรือแม้กระทั่งทำการขยาย PCR ไม่ได้นั้นทำได้ยากด้วยระบบปฏิกิริยา PCR ทั่วไปและ Taq DNA polymerase PCR Mix ในชุดอุปกรณ์นี้เป็นพรีมิกซ์ที่ปรับสูตรให้เหมาะสม โดยใช้ Taq DNA polymerase ที่ดัดแปลง ซึ่งจะเพิ่มความสามารถในการจับกับ DNA เทมเพลต และมีความทนทานต่อสารยับยั้ง PCR ทั่วไปได้ดีกว่า จึงสามารถปรับใช้กับเทมเพลตได้กว้างขึ้น

รูปที่ 4 ส่วนผสม PCR ในชุด Direct PCR มีความทนทานต่อสิ่งเจือปนได้สูงกว่า สำหรับ PCR จะใช้เทมเพลตจำนวนเท่ากันกับ PCR Mixes ที่แตกต่างกัน และจะเติมสารยับยั้งปฏิกิริยา PCR ในความเข้มข้นต่างๆ ลงในระบบ ปริมาณของผลิตภัณฑ์ PCR ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันจะถูกเปรียบเทียบ

ย.อีเซน ได้พัฒนาผลิตภัณฑ์ชุดต่างๆ สำหรับตัวอย่างต่างๆ:

I. ชนิดเฉพาะสำหรับสัตว์ฟันแทะ: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)

ตัวอย่างที่ใช้ได้: เนื้อเยื่อของหนู (เช่น หางหนู หูหนู นิ้วเท้าหนู ฯลฯ)

ประสิทธิภาพการขยายสูง (ความยาว ความเร็ว ความเข้ากันได้กับ GC)

รูปที่ 5 ชุด Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus ขยายไลเสทจากเนื้อเยื่อต่างๆ 1: พลาสมิด 2: หูของหนู 3: หางของหนู 4: ตับ สภาวะการสลาย: สลายที่อุณหภูมิ 70°C เป็นเวลา 10 นาที ยุติการทำงานที่อุณหภูมิ 95°C เป็นเวลา 5 นาที ชิ้นส่วนเป้าหมายคือ 1 กิโลไบต์ 2 กิโลไบต์ 3 กิโลไบต์ และ 6 kb โดยกำหนดเวลาขยายเป็น 3, 5, 10 และ 20 วินาทีต่อ kb ตามลำดับ M: 10510ES60 (Yeasen-

ความเข้ากันได้ของเทมเพลตที่กว้าง (10189ES)

รูปที่ 6 ใช้ชุด Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus เพื่อไลซ์โดยตรง (70°C เป็นเวลา 10 นาที) และขยายเซลล์ของมนุษย์จำนวน 293 เซลล์ (1) น้ำลาย (2) และเนื้อเยื่อหนังศีรษะ (3) ตัวอย่างทั้งหมดแสดงแถบเป้าหมายที่ชัดเจน M: 10510ES60 (Yeasen-

II. ชุดตรวจเลือดแบบหลายสายพันธุ์ เลือดแบบสากล: ชุดตรวจเลือดแบบ Advanced Direct PCR Kit (10188ES)
ความยาวขยายได้ถึง 8 kb

รูปที่ 7 ชิ้นส่วน DNA ที่มีความยาวแตกต่างกันได้รับการขยายโดยตรงจากเลือดทั้งหมดของมนุษย์โดยใช้ชุด Blood Advanced Direct PCR ตัวอย่างเลือดถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20℃ โดยใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง ความเข้มข้นของเทมเพลตเลือดอยู่ที่ 10% และระยะเวลาการขยายถูกตั้งไว้ที่ 10 วินาที/กิโลเบส M: 10510ES60 (Yeasen-

ความอดทนสูง

รูปที่ 8 ก: ชุด Blood Advanced Direct PCR ใช้สำหรับขยายชิ้นส่วน DNA ขนาด 2 kb ที่มีปริมาณ GC 71% โดยตรงจากเลือดทั้งหมดที่ผ่านการป้องกันการแข็งตัวของเลือดด้วย EDTA ของมนุษย์ ความเข้มข้นของเทมเพลตเลือดจะตั้งค่าแบบไล่ระดับตั้งแต่ 0.5-50% และระยะเวลาการขยายจะตั้งค่าเป็น 10 วินาที/kb B: ชุด Blood Advanced Direct PCR ใช้สำหรับขยายชิ้นส่วน DNA ขนาด 2.2 kb ที่มีปริมาณ GC 67% โดยตรงจากเลือดทั้งหมดที่ป้องกันการแข็งตัวของเลือดด้วย EDTA ของเมาส์ ความเข้มข้นของเทมเพลตเลือดตั้งไว้ที่ 0.5-50% และเวลาในการขยายคือ 10 วินาที/kb M: 10510ES60 (Yeasen-

III. ชนิดเฉพาะพืช: ชุด PCR เนื้อเยื่อพืชโดยตรง (10187ES)
ตรวจสอบด้วยตัวอย่างพืชหลายประเภท

รูปที่ 9 ผลการขยายโดยตรงจากเนื้อเยื่อใบของพืชชนิดต่างๆ M: บันไดดีเอ็นเอ 100 คู่เบส C: ดีเอ็นเอจีโนมที่บริสุทธิ์จากพืชที่เกี่ยวข้องเป็นแม่แบบ 1-2: ไลเสทเนื้อเยื่อใบเป็นแม่แบบ จำนวนรอบ: 30 รอบ

กรณีศึกษาลูกค้า

I. การระบุจีโนไทป์ของหนู

บริษัทชีวภาพแห่งหนึ่งในเมืองกว่างโจว:

รูปที่ 10 การขยายขนาดหางหนูโดยใช้ชุด Mouse Direct PCR (10189ES) ยีนเป้าหมาย: 500 bp; เวลาไลซิส: 10 นาที; ระบบปฏิกิริยา PCR: 25 μL, เวลาขยาย: 5 วินาที/กิโลเบส

II. การขยายยีนข้าวโดยตรง

XX มหาวิทยาลัย

รูปที่ 11 ชุด Plant Direct PCR Kit (10187ES) ใช้สำหรับขยายยีนที่เกี่ยวข้องกับข้าว

อาร์ดีใจมาก พีผลิตภัณฑ์

การวางตำแหน่งผลิตภัณฑ์	ชื่อสินค้า	หมายเลขสินค้า	ข้อมูลจำเพาะผลิตภัณฑ์
อะกาโรสคุณภาพสูง	อะกาโรส	10208ES60/76	100กรัม/500กรัม
คราบกรดนิวคลีอิก (ภายใต้แสงยูวี)	เจลสเตนกรดนิวคลีอิก YeaRed (10,000× ในน้ำ)	10202ES76	500 ไมโครลิตร
การอัพเกรด PCR อย่างรวดเร็ว สามารถทำเป็น PCR แบบโคโลนีได้ และเหมาะสำหรับการขยายเทมเพลตที่ซับซ้อน	2×ไฮฟ์^{ทีเอ็ม} มาสเตอร์มิกซ์ Ultra-Rapid II HotStart PCR	10167ES03/08	1 มล./5×1 มล.

บทความก่อนหน้า บทความถัดไป

โดยตรง PCR จากสัตว์และตัวอย่างพืชหลายชนิด