Yeasen และ Molefuture ได้พัฒนา Thermotolerant, High Fidelity T4 DNA Ligase เพื่อต่อสู้กับการผูกเทียม

Yeasen และ Molefuture แนะนำ Advanced T4 DNA Ligase เพื่อเอาชนะความท้าทายทางชีววิทยาโมเลกุล

Yeasen และ Molefuture ได้ร่วมกันพัฒนา T4 DNA ligase ที่ทันสมัยโดยใช้แพลตฟอร์ม ZymeEditor ของตน โดยแก้ไขปัญหาสำคัญในชีววิทยาโมเลกุลและการสร้างคลัง DNA สำหรับการจัดลำดับยีนรุ่นถัดไป (NGS) T4 DNA ligase แบบดั้งเดิมเผชิญกับความท้าทาย เช่น ความเสถียรต่ำ การสร้างไดเมอร์อะแดปเตอร์สูง และการผูกตัวเองด้วยชิ้นส่วน DNA จำนวนมาก เอนไซม์ใหม่นี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อเอาชนะข้อจำกัดเหล่านี้

เอนไซม์ T4 DNA ligase ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่ขึ้นกับ ATP มีลักษณะเด่นคือโดเมนจับ DNA แบบเกลียวกะทัดรัด (DBD) โดเมน nucleotidyl-transferase (NTase) และโดเมน OB-fold โดยการวิเคราะห์โครงสร้างของโปรตีน นักวิจัยสามารถระบุสารตกค้างที่สำคัญภายในระยะ 5 ถึง 20Å ของสารตั้งต้น DNA ได้ โดยใช้เครื่องมือคำนวณขั้นสูง การคัดกรองในซิลิโก และการวิเคราะห์โครงสร้างและฟังก์ชัน พวกเขาออกแบบมิวแทนต์โดยใช้การจัดตำแหน่งลำดับฉันทามติ โดยผสานรวมข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับโครงสร้างและฟังก์ชันเข้าด้วยกัน

นอกเหนือจากการออกแบบที่สมเหตุสมผลแล้ว ทีมยังใช้หลักการ MTPS สำหรับวิวัฒนาการแบบกำหนดทิศทาง โดยคัดกรองมิวแทนต์กว่า 10,000 ตัวเพื่อความเสถียร กิจกรรม และกิจกรรมที่เหลือ ผู้สมัครที่มีแนวโน้มดีจะต้องผ่านกระบวนการทำให้บริสุทธิ์และการทดสอบอย่างเข้มงวด จากนั้นจึงดำเนินการวิเคราะห์ลักษณะเฉพาะโดยละเอียด โดยประเมินกิจกรรม ความเสถียร การผูกตัวเองของอะแดปเตอร์ การผูกตัวเองของชิ้นส่วน DNA และผลผลิต DNA

นักวิจัยได้ผสมผสานการออกแบบ DNA อย่างมีเหตุผลและการกลายพันธุ์แบบกำหนดทิศทางบนยีนกลายพันธุ์ G1 เพื่อพัฒนาตัวแปรพิเศษที่เหมาะสำหรับการใช้งานที่หลากหลาย แนวทางที่ครอบคลุมนี้ส่งผลให้ได้ DNA ligase T4 ที่มีประสิทธิภาพสูงและเชื่อถือได้ ซึ่งพร้อมที่จะปรับปรุงการวิจัยชีววิทยาโมเลกุลและการสร้างคลัง DNA ใน NGS

รูปที่ 1 แสดงให้เห็นวิวัฒนาการของ Versatility T4 DNA Ligase (A) การออกแบบที่สมเหตุสมผล ของ T4 DNA ligase (B) การคัดกรองกลายพันธุ์ของ T4 DNA ligase ที่ทนความร้อนที่ 45℃ นำไปสู่การระบุกลายพันธุ์ที่มีกิจกรรมเฉพาะที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (C) การคัดกรองกลายพันธุ์ของ T4 DNA ligase ที่มุ่งลดการก่อตัวของไดเมอร์อะแดปเตอร์ระหว่างการเตรียมห้องสมุด DNA (D) การประเมินการคงอยู่ของผลผลิตจากห้องสมุดหลังจากการให้ความร้อนที่ 42℃ เป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้วิธีการเตรียมห้องสมุด DNA
ตารางที่ 1. Yeasen เอนไซม์ไลเกส DNA T4 อเนกประสงค์มีความคงตัวต่อความร้อน เอนไซม์ได้รับการบำบัดที่อุณหภูมิ 30℃ เป็นเวลา 5 วัน และวิเคราะห์ด้วยวิธี DNA Lib Prep
รูปที่ 2. Yeasen ไลเกส DNA T4 อเนกประสงค์มีความเที่ยงตรงสูงกว่า เมื่อเปรียบเทียบกับ DNA ligase T4 ชนิดป่า (WT) ที่ระบุโดยการสร้างไดเมอร์อะแดปเตอร์น้อยลงเนื่องจากการผูกตัวเองผิดพลาด (A) และ (B) ที่วิเคราะห์โดยวิธี DNA Lib Prep
รูปที่ 3. Yeasen ลิกาเซส DNA T4 อเนกประสงค์แสดงให้เห็นการสร้างไดเมอร์อะแดปเตอร์ต่ำที่สุดเมื่อเปรียบเทียบกับลิกาเซส DNA T4 เชิงพาณิชย์ รวมถึงลิกาเซสทนความร้อนที่วิเคราะห์โดยวิธี DNA Lib Prep
ความก้าวหน้าครั้งนี้แสดงให้เห็น Yeasen และความมุ่งมั่นของ Molefuture ในด้านนวัตกรรมและความเป็นเลิศด้านวิศวกรรมเอนไซม์

ข้อมูลการสั่งซื้อ

ชื่อ แมว# หมายเหตุ
เอนไซม์ Hieff™ ดีเอ็นเอไลเกส T4 อเนกประสงค์ (600 U/µL) 12996ES ทนความร้อนและความแม่นยำสูงสำหรับการตรวจจับยีนเนื้องอก
ดีเอ็นเอ ชุดเตรียมห้องสมุด DNA ของ Hieff NGS® 13577ES วิธีการเนื้องอก/กลไก
ชุดเตรียมไลบรารี DNA OnePot Pro ของ Hieff NGS® V2 12194ES วิธีเนื้องอก/เอนไซม์
ไฮเอฟเอ็นจีเอส® วันพอต ชุดเตรียมห้องสมุด DNA II สำหรับ Illumina 13490ES พาธเจน/เอ็นไซม์ติก/เวลาปกติ (140นาที)
ชุดเตรียมไลบรารี DNA แฟลช OnePot ของ Hieff NGS® 12316ES พาธเจน/เอ็นไซม์ติก/อัลตราฟาสต์ (100นาที)
Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit V2 12305ES Pathgen/ Enzymetic/ DNA & RNA Co-Prep
อาร์เอ็นเอ ชุดเตรียมไลบรารี mRNA แบบดูอัลโหมด Hieff NGS® Ultima 12308ES ไม่มีเม็ดแม่เหล็กโอลิโกดีที 11 หลอด
ชุดเตรียมไลบรารี mRNA แบบดูอัลโหมด Hieff NGS® Ultima 12309ES โอลิโก ดีที แม่เหล็ก บีดส์ พลัส 14 หลอด
ชุดเตรียมไลบรารี RNA แบบดูอัลโหมด Hieff NGS® Ultima 12310ES เวอร์ชั่นพรีมิกซ์ 5 หลอด
ชุดเตรียมไลบรารี RNA Hieff NGS ® EvoMax (เวอร์ชันผสมล่วงหน้า) (แอกติโนไมซิน ดี ฟรี) 12340ES เวอร์ชันพรีมิกซ์ (แอกติโนไมซิน ดี ฟรี)
ชุดกำจัด rRNA ของ Hieff NGS® MaxUp (พืช) 12254ES ปลูก
ชุดกำจัด rRNA ของมนุษย์ Hieff NGS® MaxUp (rRNA และ ITS/ETS) 12257ES มนุษย์

กรุณาฝากข้อความเพื่อสอบถามเกี่ยวกับข้อมูลการเปรียบเทียบประสิทธิภาพระหว่างเอนไซม์ตัวนี้กับเอนไซม์ไลเกส DNA T4 เกรดสูงและแบบธรรมดาอื่นๆ

เกี่ยวกับ Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology เป็นบริษัทในเครือของ Yeasen บริษัท ไบโอเทคโนโลยี (เซี่ยงไฮ้) จำกัด เชี่ยวชาญด้านการจัดหาโซลูชันการดัดแปลงเอนไซม์แบบกำหนดเองที่ขับเคลื่อนด้วยเทคโนโลยีวิวัฒนาการเอนไซม์ โดยใช้ประโยชน์จากทรัพยากรของ Yeasen ในด้านเทคโนโลยีชีวภาพ Molefuture ดำเนินงานบนแพลตฟอร์มเทคโนโลยีหลัก 6 แพลตฟอร์ม ได้แก่ แพลตฟอร์มวิวัฒนาการเอนไซม์เชิงนวัตกรรม ZymeEditor แพลตฟอร์มการแสดงออกประสิทธิภาพสูงแบบโฮสต์หลายตัว แพลตฟอร์มการพัฒนาขั้นตอนการหมัก แพลตฟอร์มการพัฒนาขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ แพลตฟอร์มการผลิตเอนไซม์ที่สะอาดเป็นพิเศษ และแพลตฟอร์มการวิเคราะห์และควบคุมคุณภาพของเอนไซม์ ด้วยแพลตฟอร์มเทคโนโลยี 6 แพลตฟอร์มนี้ Molefuture สามารถนำเสนอชุดโซลูชันที่ปรับแต่งได้ครบชุด รวมถึงวิวัฒนาการที่ควบคุมด้วยเอนไซม์ การพัฒนาเอนไซม์ใหม่ การพัฒนากระบวนการเอนไซม์ และการผลิตในระดับ GMP เพื่อตอบสนองความต้องการในการใช้งานเอนไซม์ในด้านต่างๆ เช่น การวินิจฉัยในหลอดทดลอง ชีวการแพทย์ ชีววิทยาสังเคราะห์ ความงามทางการแพทย์ สารตั้งต้นทางเภสัชกรรม เป็นต้น

การสอบถาม