Hücre transfeksiyonu, hücrelere ekzojen nükleik asitleri (DNA, mRNA, siRNA, miRNA vb.) sokmak için kullanılan bir tekniktir ve modern biyomedikal araştırmalarda önemli bir rol oynar. Bilimsel araştırmalar derinleşmeye devam ettikçe, çeşitli hücre tiplerine olan talep de giderek çeşitlendi ve yaygın HEK293 hücrelerinden özel tümör hücresi tiplerine ve her biri kendine özgü özelliklere ve gereksinimlere sahip birincil hücrelere kadar uzandı. Benzer şekilde, farklı nükleik asit tipleri de verimli ve güvenli gen iletimini sağlamak için belirli transfeksiyon stratejileri gerektirir. Bu nedenle, doğru transfeksiyon reaktifini seçmek deneyin başarısı için önemlidir.
Kimyasal transfeksiyon reaktifleri, hücre biyolojisi araştırmalarında vazgeçilmez araçlardır ve gen ekspresyonu, susturma veya fonksiyonel çalışmalar elde etmek için DNA, mRNA, siRNA, miRNA vb. gibi nükleik asitleri farklı mekanizmalar aracılığıyla hücrelere sokarlar. Günümüzde yaygın olarak kullanılan kimyasal transfeksiyon reaktifleri esas olarak lipozom transfeksiyon reaktifleri, PEI transfeksiyon reaktifleri ve kalsiyum fosfat transfeksiyon reaktiflerini içerir ve her birinin kendine özgü avantajları ve uygulanabilir senaryoları vardır.
Tablo 1: Farklı kimyasal transfeksiyon reaktifleri arasındaki farklar nelerdir?
| Ürün Kategorisi | İlke | Avantajları | Dezavantajları |
| Lipozom transfeksiyon reaktifi | 1. Lipozom transfeksiyon reaktifleri, lipit-nükleik asit kompleksleri oluşturmak üzere negatif yüklü nükleik asitlere bağlanan pozitif yüklü lipitlere sahiptir. 2. Bu kompleksler negatif yüklü hücre zarına çekilir. 3. Hücre, kompleksleri endositoz yoluyla endosomlara alır. 4. Komplekslerdeki lipitlerin "proton süngeri" etkisi, endosom asitlenmesini önleyerek membranın dengesizleşmesine ve yırtılmasına yol açarak komplekslerin sitoplazmaya salınmasını sağlar. 5. siRNA, miRNA veya mRNA gibi küçük nükleik asitler sitoplazmada çalışabilirken, DNA'nın ifade edilebilmesi için çekirdeğe girmesi gerekir. 6. DNA çekirdeğe girdiğinde mRNA'ya dönüştürülür ve yabancı geni ifade eden proteinlere çevrilir. | 1. Lipozom transfeksiyon reaktifleri, transfekte edilmesi zor birincil hücreler de dahil olmak üzere çeşitli hücre hatlarında yüksek verimlilik sağlar. 2. Çok yönlüdürler, hem yapışık hem de süspansiyon hücreleriyle ve DNA, siRNA ve miRNA gibi çeşitli nükleik asitlerle uyumludurlar. 3. Bu reaktifler serum içeren ortamlarda iyi çalışır, serumun çıkarılmasına gerek kalmaz ve böylece hücre hasarı en aza indirilir. | 1. Lipozom transfeksiyon reaktifleri, özellikle yüksek konsantrasyonlarda veya uzun süre kullanıldığında hücreler için toksik olabilir ve potansiyel olarak hücrenin hayatta kalmasını ve işlevini etkileyebilir. 2. Kalsiyum fosfat transfeksiyonu gibi geleneksel yöntemlere kıyasla daha pahalıdırlar. 3. Serum klirensi, akciğer dokusunda birikme, güçlü inflamatuvar yanıtlara ve yüksek toksisiteye neden olma potansiyeli nedeniyle in vivo uygulamaları sınırlıdır. |
| PEİ transfeksiyon reaktifi | 1. Pozitif yüklü bir polimer olan PEI, elektrostatik etkileşimler yoluyla negatif yüklü DNA'ya bağlanarak PEI-DNA kompleksleri oluşturur. 2. Bu kompleksler negatif yüklü hücre zarına bağlanır. 3. Hücreler endositoz yoluyla PEI-DNA komplekslerini içine alarak endosomları oluştururlar. 4. PEI'nin "proton süngeri" etkisi, asidik ortamda endozomların şişmesine ve patlamasına neden olur ve kompleksler sitoplazmaya salınır. 5.Sitoplazmada PEI-DNA bağları kopar ve DNA'nın çekirdeğe girmesine, burada transkripsiyona uğramasına ve proteinlere çevrilmesine olanak tanır. | 1. PEI transfeksiyon reaktifleri DNA ile stabil kompleksler oluşturarak transfeksiyon verimliliğini arttırır. 2. Diğer katyonik polimerlere göre daha düşük sitotoksisiteye sahiptirler, hücre canlılığını ve fonksiyonunu korurlar. 3. PEI reaktifleri, özellikle viral vektör üretimi gibi büyük ölçekli transfeksiyonlar için uygun maliyetli bir çözüm sunmaktadır. 4. PEI reaktifleri klinik ve ticari üretim için GMP sınıfında mevcuttur, bu da kalite ve uyumluluğu garanti eder. | 1. PEI transfeksiyon reaktifleri sınırlı çok yönlülüğe sahiptir, öncelikli olarak DNA için kullanılır ve mRNA, siRNA ve miRNA gibi diğer nükleik asitlerle daha az etkilidir. 2. Virüs paketleme ve protein ekspresyonu için HEK293 hücreleri gibi belirli hücre tiplerinde yüksek verimlilik gösterirler, ancak transfekte edilmesi zor hücrelerde düşük performans gösterirler. |
| Kalsiyum Fosfat transfeksiyon reaktifi | 1. DNA/kalsiyum fosfat eş çökeltileri, DNA'nın negatif yükünün pozitif kalsiyum iyonlarına bağlandığı fosfatlı HEPES tamponunda oluşur. 2. Hücreler, yüzeylerine yapışan bu eş çökeltileri, transfeksiyon etkinliği için kritik bir adım olan endositoz yoluyla yutarlar. 3. Hücrelerin içinde, eş-çökeltiler DNA'yı serbest bırakır, bu da geçici ifadeye veya genoma kalıcı entegrasyona yol açabilir. | 1. Kalsiyum fosfat transfeksiyonu maliyet açısından avantajlıdır, bütçesi kısıtlı laboratuvarlar için uygundur. 2. Uygulaması kolaydır, basit adımlar ve asgari teknik beceri gerektirir. 3. Hem geçici protein ekspresyonu hem de stabil hücre hatları oluşturmak için kullanılabilir. | 1. Kalsiyum fosfat transfeksiyon etkinliği değişkendir ve pH ve DNA saflığı gibi faktörlere duyarlıdır, bu da özellikle saf olmayan DNA ile başarısız transfeksiyonlara yol açabilir. 2. Tüm hücre tipleri için uygun değildir, esas olarak HEK293 hücreleri için kullanılır ve birincil hücreler ve diğer bazı hücre tipleri için daha az etkilidir. |
Yeasen Biotech, güçlü Ar-Ge kapasitelerini ve üretim teknolojisi ekibini kullanarak, DNA ve RNA transfeksiyon reaktiflerinin formülasyonlarını sürekli olarak optimize ediyor ve üretim süreçlerini iyileştiriyor. Şirket, transfeksiyon reaktifleri alanındaki araştırma kurumlarının ve işletmelerin geniş ihtiyaçlarını karşılamak için katyonik lipozomlar ve katyonik polimerlere dayalı çeşitlendirilmiş bir ürün serisi başlattı. Bu ürünler, transfeksiyon reaktiflerinin çeşitli uygulamalarını kapsar ve aşağıdaki avantajlara sahiptir:
Geniş Uygulanabilirlik: Plazmit DNA, siRNA, miRNA ve mRNA'yı etkili bir şekilde transfekte edebilme yeteneğine sahiptir.
Yüksek Transfeksiyon Verimliliği: Hücre transfeksiyon verimliliği %90'ın üzerinde olup, birden fazla plazmidin eş-transfeksiyonuna olan ihtiyacı karşılamaktadır.
Birden Fazla Hücre Hattında Doğrulandı: 40'tan fazla farklı hücre hattında iyi transfeksiyon verimliliği gösterildi.
Geniş Uygulama Yelpazesi: Kararlı hücre hattı inşası, geçici protein ekspresyonu ve AAV ve LV viral paketleme için kullanılır.
Literatürde Yüksek Atıf Sıklığı: 400'den fazla yüksek etkili yayında atıf almış olup, toplam etki faktörü 3000'i aşmaktadır.
İhtiyaçlarınıza uygun bir transfeksiyon reaktifi nasıl seçilir
Farklı hücre tipleri ve nükleik asitlerde (DNA, mRNA, siRNA vb.) transfeksiyon verimliliği ve koşulları için özel gereksinimler göz önüne alındığında, doğru transfeksiyon reaktifinin seçilmesi deneyin başarısı için kritik öneme sahiptir.Deneyin özel ihtiyaçlarına dayanarak, deneysel verilerin doğruluğunu ve deneysel sonuçların sağlamlığını garantilemek için transfeksiyon verimliliğini optimize edebilen ve sitotoksisiteyi en aza indirebilen bir transfeksiyon reaktifi seçin. YEASEN Biotech, farklı uygulama senaryoları için optimize edilmiş bir dizi ürün sunarak araştırma amaçlarınız için en uygun transfeksiyon reaktifini bulmanızı ve özel deneysel ihtiyaçlarınızı karşılamanızı sağlar.
Vaka Sunumu
6-kuyulu bir plaka sisteminde, GFP ekspresyonlu plazmidler YEASEN 40802ES transfeksiyon reaktifi ve bir rakibin transfeksiyon reaktifi kullanılarak HEK293 hücrelerine transfekte edildi. Transfekte hücrelerdeki GFP ekspresyonu transfeksiyondan 48 saat sonra mikroskop altında gözlemlendi. YEASEN'in transfeksiyon reaktifinin performansı üstündü.
12 kuyulu bir plaka içerisinde HEK293 hücreleri toplam 1 μg plazmit DNA ile transfekte edildi; 3 μL transfeksiyon reaktifi kullanılarak iki plazmitin başarılı bir şekilde ko-transfekte edilmesi mümkün oldu.
Müşteri Davası
Birden fazla hücre hattında doğrulanmış olup, daha geniş uygulama yelpazesine sahiptir.
| Hücreler | Hücreler | Hücreler | Hücreler | Hücreler |
| 293F | Kako2 | HEK293T | LM3 | Ulusal Sağlık Enstitüleri-3T3 |
| 293T | ÇÖP-K1 | HEK293 | MCF10A | Bilgisayar12 |
| 3t3 | KOS-7 | HeLa | MCF-7 | Raw264.7 |
| 5-8F | DF-1 | Hep 3B | MDA-MB-231 | RKO |
| A549 | H520 | Hepa1-6 | MEF | SGC-7901 |
| BV-2 | H9 | HepG2 | MKN-28 | SMCC7721 |
| C2C12 | H9c2 | HUVEC | N2A | Vero |
| C6 | HaCaT | Lenti X-293T | NCI-H1975 | HCT116 |
| WRL-68 | THP-1 | MDK | Hep2C | Daha fazla… |
Ürün Listesi
| Kedi numarası | Ürün adı | Nükleik asit | Başvuru |
| 40802ES | DNA | Yüksek performanslı lipozom transfeksiyon reaktifi | |
| 40804ES | Yüksek gerilim | Lentiviral enfeksiyon yeteneğini arttırır. | |
| 40806ES | siRNA, miRNA, ASO | Yüksek baskılama etkinliğine sahip siRNA ve miRNA'ya özgü transfeksiyon reaktifleri. | |
| 40808ES | DNA, siRNA, miRNA | Çeşitli hücre tiplerinde DNA ve RNA transfeksiyonları gerçekleştirebilen ve transfeksiyonu zor hücrelerde bile iyi etkiler gösteren yükseltilmiş lipozom transfeksiyon reaktifi. | |
| 40809ES | mRNA | Çeşitli hücre tiplerinde yüksek transfeksiyon verimliliğine sahip mRNA-spesifik transfeksiyon reaktifi. | |
| 40815ES | DNA | Protein ekspresyonu ve viral paketleme (toz form) için yaygın olarak uygulanabilir. | |
| 40816ES | Hieff Trans® Polietilenimin Doğrusal (PEI) MW40000(hızlı lizis) | DNA | |
| 40820ES | DNA | AAV ve LV viral paketleme için daha yüksek verim elde edebilen, viral paketleme için özel transfeksiyon reaktifleri | |
| 40821ES | DNA | ||
| 40823ES | DNA | En yüksek transfeksiyon verimliliği. Özellikle süspansiyon kültüründe AAV üretimi için uygundur ve daha yüksek çıktılar sağlar. |
Çok sayıda yüksek etkili yayında atıfta bulunulması, kalitenin garanti altına alınması (atıf yapılan referansların kısmi listesi)
- Liang X, Gong M, Wang Z, ve diğerleri. LncRNA TubAR, mikrotübül montajını desteklemek ve miyelinasyonu sürdürmek için TUBB4A ve TUBA1A ile kompleks oluşturur. Cell Discov. 2024;10(1):54. 21 Mayıs 2024'te yayımlandı. doi:10.1038/s41421-024-00667-y. EĞER=33.5(40808ES)
- Wang A, Chen C, Mei C, ve diğerleri. Lizozomal işlev bozukluğunun doğuştan gelen bağışıklık algılaması, çoklu lizozomal depolama bozukluklarına yol açar. Nat Cell Biol. 2024;26(2):219-234. doi:10.1038/s41556-023-01339-x.EĞER=21.3(40802ES)
- Liu H, Zhen C, Xie J, ve diğerleri. TFAM, sitoplazmik mitokondriyal DNA'ya bağlanarak inflamasyonu sınırlayan bir otofaji reseptörüdür. Nat Cell Biol. 2024;26(6):878-891. doi:10.1038/s41556-024-01419-6.EĞER=21.3(40802ES)
- Wang WW, Ji SY, Zhang W, ve diğerleri. Hipertrofik olmayan apelin reseptör modülatörünün yapıya dayalı tasarımı. Hücre. 2024;187(6):1460-1475.e20. doi:10.1016/j.cell.2024.02.004.EĞER=64.5(40802ES)
- Ke J, Pan J, Lin H, ve diğerleri. Rab7-Rilp Aracılı Mikrolipofajiyi Hedeflemek Diyabetik Kardiyomiyopatide Lipid Toksisitesini Hafifletir. Adv Sci (Weinh). 5 Haziran 2024'te çevrimiçi olarak yayınlandı. doi:10.1002/advs.202401676.EĞER=15.1(40806ES)
- Jiang L, Xie X, Su N, ve diğerleri. Canlı hücrelerde çift emisyonlu floresan ve biyolüminesans görüntüleme için büyük Stokes kaydırma floresan RNA'ları. Nat Yöntemleri. 2023;20(10):1563-1572. doi:10.1038/s41592-023-01997-7.EĞER=48(40802)
- Lou M, Huang D, Zhou Z ve diğerleri. DNA virüsü onkoproteini HPV18 E7, cGAS-STING tetiklemeli doğuştan gelen bağışıklık aktivasyonunu seçici olarak antagonize eder. J Med Virol. 2023;95(1):e28310. doi:10.1002/jmv.28310.EĞER=20.69(40802ES)
- Su J, Shen S, Hu Y ve diğerleri. SARS-CoV-2 ORF3a, cGAS-STING aracılı otofaji akışını ve antiviral işlevi engeller. J Med Virol. 2023;95(1):e28175. doi:10.1002/jmv.28175.EĞER=20.69(40802ES)
- Lu YY, Zhu CY, Ding YX ve diğerleri. Keap1-Nrf2'nin bir düzenleyicisi olan sefarantin, oksidatif stres ve enerji metabolizması yoluyla mide kanseri büyümesini engeller. Hücre Ölümü Diskopu. 2023;9(1):450. 2023 Aralık 12'de yayımlandı. doi:10.1038/s41420-023-01752-z.EĞER=7(40806ES)
- Li X, Zhang Y, Xu L, ve diğerleri. Ultra hassas sensörler fizyoloji ve hastalıkta laktat metabolizmasının zamansal ve mekânsal manzarasını ortaya koyuyor. Hücre Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002.EĞER=31.373(40802ES)
- Li X, Zhang Y, Xu L ve diğerleri. Ultra hassas sensörler fizyoloji ve hastalıkta laktat metabolizmasının zamansal ve mekânsal manzarasını ortaya çıkarır. Hücre Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002.EĞER=31.373(40804ES)
- Huang Y, Motta E, Nanvuma C, ve diğerleri. Mikroglia/makrofaj türevi insan CCL18, insanlaştırılmış dilim modelinde analiz edilen CCR8-ACP5 ekseni aracılığıyla glioma ilerlemesini teşvik eder. Cell Rep. 2022;39(2):110670. doi:10.1016/j.celrep.2022.110670.EĞER=8.8(40804ES)
- Chai Q, Yu S, Zhong Y, ve diğerleri. Bakteriyel bir fosfolipid fosfataz, ubiquitin'i ele geçirerek konak piroptozisini engeller. Bilim. 2022;378(6616):eabq0132. doi:10.1126/science.abq0132.EĞER=63.714(40802ES)
- Liu R, Yang J, Yao J, ve diğerleri. Mühendislikle üretilmiş ışıkla değiştirilebilen RNA bağlayıcı proteinler kullanılarak RNA fonksiyonu ve metabolizmasının optogenetik kontrolü. Nat Biotechnol. 2022;40(5):779-786. doi:10.1038/s41587-021-01112-1.EĞER=54.908(40802ES)
- Chen S, Chen G, Xu F, ve diğerleri. Tasarlanmış IL-5-bağlantılı kimerik antijen reseptörü T hücreleri aracılığıyla alerjik eozinofilik astımın tedavisi. Hücre Keşfi 2022;8(1):80. Yayımlanma tarihi 2022 Ağustos 16. doi:10.1038/s41421-022-00433-y.EĞER=38.079(40804ES)