Genel bakış
Konak hücre kalıntı DNA'sı, biyolojiklerin üretiminde yer alan bir süreçle ilgili safsızlıktır ve yalnızca biyolojiklerin etkinliğini azaltmakla kalmaz, aynı zamanda bulaşıcılık veya tümör oluşumu gibi güvenlik endişeleri de yaratabilir. Bu nedenle, çeşitli ülkelerdeki düzenleyici kurumlar biyolojiklerdeki kalıntı DNA miktarına sınırlamalar getirmiştir.
Mevcut WHO ve FDA kılavuzları, bitmiş ürünlerdeki kalıntı DNA'nın doz başına 10 ng'den fazla olmamasını önermektedir ve FDA ayrıca biyolojiklerin konak hücre DNA'sındaki kalıntı DNA'nın doz başına 100 pg'den fazla olmaması gerektiğini belirtmektedir. Avrupa Farmakopesi'nin Genel İlkeleri, biyolojik ürünlerin kalıntı DNA limitlerinin çoğunun doz başına 10 ng'den fazla olmaması gerektiğini şart koşmaktadır, ancak bireysel aşıların kalıntı DNA limitleri daha katıdır, örneğin, hepatit A'ya karşı inaktif aşıdaki kalıntı DNA, doz başına 100 pg'den fazla olmamalı ve hepatit B'ye karşı aşıdaki kalıntı DNA, doz başına 10 pg'den fazla olmamalıdır. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, Bölüm III, hücresel matris üzerinde üretilen biyolojik preparatlardaki DNA kalıntısının doz başına 100 pg'yi ve bakteriyel veya fungal matris üzerinde üretilen aşılardaki DNA kalıntısının doz başına 10 ng'yi geçmemesi gerektiğini şart koşmaktadır.
Ek olarak, ekzojen DNA kalıntısı belirleme yöntemleri için ulusal farmakopeler de rehberlik önerileri sunar. ABD Farmakopesi'nin USP40-NF35 Genel Hüküm 1130'unun 2017 baskısı, ekzojen DNA kalıntılarının belirlenmesi için DNA prob hibridizasyonu, eşik yöntemi ve gerçek zamanlı kantitatif PCR yöntemi olan 3 yöntemi açıklar. Avrupa Farmakopesi, konak hücrelerindeki kalıntı DNA'yı ölçmek için 2 hassas analitik yöntem olan gerçek zamanlı kantitatif PCR ve immünoenzimatik yöntemleri önermektedir. Üç genel kuralın 3407'nin Çin Farmakopesi 2020 versiyonu da konak hücre DNA kalıntısı tespit yöntemlerinin DNA prob hibridizasyonu, floresan boyama ve kantitatif PCR olduğunu şart koşmaktadır.
Bunlar arasında qPCR yöntemi, biyofarmasötik endüstrisi için proses araştırmalarında ve bitmiş ürünlerin kalite kontrolünde güvenilir bir tespit yöntemi sağlayabilen, çok yüksek hassasiyete, dizi özgüllüğüne ve doğruluğa sahip olup, artık her biyolojik ürün üreticisi için tercih edilen tespit yöntemi haline gelmiştir.
Yeasen Biyoteknoloji Kalıntı DNA Tespit Kitleri
Floresan prob qPCR ilkesine dayanarak Yeasen, CHO, HEK293, E.coli, Vero, İnsan, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris vb. dahil olmak üzere bir dizi hızlı ve uzmanlaşmış konak hücre kalıntısı DNA tespit kiti geliştirdi. Bu kitler, antikor ilaçları, hücre ve gen terapisi ürünleri, rekombinant protein ilaçları ve aşılar gibi biyolojiklerin geliştirilmesi ve üretimi sırasında ara, yarı mamul ve tamamlanmış ürünlerdeki DNA kalıntılarının uzmanlaşmış ve hızlı bir şekilde tespit edilmesini sağlar.
Özellik
Yüksek hassasiyet: LLOD'u 0 kadar düşük olan floresan prob qPCR yöntemine dayalı olarak geliştirilmiştir.05fg/µL;
Yüksek doğruluk: Örnekteki spike kurtarmaları %70~%130 aralığında;
Yüksek özgüllük: alakasız DNA ile çapraz reaksiyon oluşmaz, bu sayede tespitte yanlış pozitif sonuçlar azalır;
Mevzuata uyum: Chp, USP, ICHQ2(R1) ve diğer gerekliliklere uygun olarak tamamen doğrulanmış, Çin ve yabancı düzenleyici standartlara uygun performans;
Denetleme ile işbirliği yapın: Ürün üretimi ISO13485 kalite sistem standartlarına uygun olup, denetim belgeleri kusursuzdur.
Kaliteyi garanti ediyoruz: Kitlerin hammaddeleri tamamen bağımsız olarak geliştirilmekte olup, qPCR Mix ve diğer enzim ürünleri ultra temiz bir enzim fabrikasında üretilmektedir.
Başvuru
Antikor İlaçlarıAna hücre kalıntı safsızlık tespitiAşılarAna hücre kalıntı safsızlık tespiti
Rekombinant Protein ilaçlarıAna hücre kalıntı safsızlık tespiti
Şartname
| Test ve doğrulama programı | Referans standartları veya gereksinimleri | Nnot | |
| 1. Kit Standartları (Referans Standartları) | Ulusal standartlara göre kıyaslama veya Hazırlanmış standartlar |
| |
| 2. Lkulaklı Rmelek | Standart eğrinin kapsamı | Kılavuza veya gerçek duruma bakın (örn.30fg/μL~300pg/μL) |
|
| R2 | ≥0,98 (PsYeasen Kitleri≥0,99） | Çin Farmakopesi 2020 Sürümü 3407 Genel Hükümler'de HCD için Gereksinimler | |
| Eğim | -3.1~-3.8 (PsYeasen Kitleri -3.1~-3.6) | Çin Farmakopesi 2020 Sürümü 3407 Genel Hükümler'de HCD için Gereksinimler | |
| Amplifikasyon verimliliği | %90~%110（（PsKarşılık gelen eğim -3.1~-3.6, Sektördeki gereksinimler） |
| |
| 3. Adoğruluk | Ulusal standart DNA'dan sapma | <15% |
|
| Örnek spike kurtarma oranı | %50~%150 (Sektördeki gereksinimler) 70~130%） | Çin Farmakopesi 2020 Sürümü 3407 Genel Hükümler'de HCD için Gereksinimler | |
| 4. Pgeri çekilme | Tekrarlanabilir | Özgeçmiş＜%15 |
|
| Orta düzey hassasiyet | Özgeçmiş＜%15 |
| |
| 5. Suzmanlık | Ekzojen DNA ile hiçbir etkileşim yok |
| |
| 6. Lniceleme taklidi | fg/μL seviyesi |
| |
| 7. Sistikrar | Tekrarlanan dondurma ve çözme | 10 kez |
|
| İvmelenme Stabilitesi | 2~8℃ 30 gün, 37℃ 14 gün |
| |
| Geçerlilik süresi | -20°C'de 2 yıl depolama |
| |
Rakamlar
Yüksek hassasiyet: LLOQ 0,3 fg/µL kadar düşük, LLOD 0,05 fg/µL kadar düşük.
1. CHO Ana Hücre Kalıntı DNA Tespit Kiti'nin (3G) doğrusal aralığı 3fg/μL~300pg/μL idi, R2=1, amplifikasyon verimliliği %99,29 idi ve her konsantrasyonun tespit değerinin CV'si <%15 idi.
Şekil 1. CHO DNA (3G) kalibrasyon grafiği (sol) ve amplifikasyon eğrisi doğrusal eşlemesi (sağ)
2. Standardize şarkının en düşük konsantrasyon noktasında 3fg/uL ve altındaki konsantrasyonlarda, konsantrasyon başına 10 tekrarla CHO DNA'sını (3G) tespit edin. Sonuçlar, 0,3 fg/uL ve üzeri konsantrasyonlarda CV'nin <%20 olduğunu, yani CHO Host Cell DNA Residue Assay Kit'in (3G) kantifikasyon sınırının 0,3 fg/uL olduğunu gösterdi.
Şekil 3. 0,05fg/μL CHO DNA (3G) qPCR testi sonuçları
Yüksek özgüllük: Diğer konak hücre DNA'sı ile çapraz reaksiyona girmez.
CHO DNA'sına yüksek afinite gösteren fare türlerinin genomik DNA'sı (3G) ile biyolojik ürünlerin üretiminde yaygın olarak kullanılan hücrelerin genomik DNA'larının CHO DNA tespit reaktifine olan etkileşimi değerlendirildiğinde, etkileşim grubu ile kontrol grubunun amplifikasyon eğrileri örtüşmüş ve herhangi bir etkileşim görülmemiştir (aşağıdaki grafikler sırasıyla Fare, HEK293 ve E. coli genomik DNA'sının CHO DNA tespit reaktifine olan etkileşim verilerini göstermektedir).
Şekil 4.CHO DNA (3G) kiti ile yapılan girişim deneylerinin sonuçları
Ürün Bilgileri
| Kategorizasyon | Ürün No | Ürün Adı | Şartname |
| Örnek Ön İşlemi | 18461ES | 25T/100T | |
| 18467ES | MolPure® Mag48 Örnek Hazırlama Kiti FN | 3×16T/6×16T | |
| Nükleik Asit Çıkarma Aleti | 80511ES | 48 Kanallı Otomatik Nükleik Asit Çıkarıcı | 48 Akı |
| Kalıntı DNA Tespiti | 41307ES | 50T/100T | |
| 41308ES | 50T/100T | ||
| 41310ES | SV40LTA&E1A Kalıntı DNA Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41317ES | Hansenula polymorpha Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41319ES | MDCK Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41323ES | Plazmit DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41324ES | S. cerevisiae Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41325ES | İnsan Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41328ES | Pichia pastoris Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41330ES | Sf9 ve Bakulovirüs DNA Kalıntısı Tespit Kiti | 50T/100T | |
| 41331ES | 50T/100T | ||
| 41332ES | 50T/100T |