Strand'a özgü RNA kütüphanesi hazırlığında dikkate değer bir atılım

Bir RNA kütüphanesi oluştururken hiç şüphe duydunuz mu? Belirli reaktiflerin toksisitesi ve ışıksız bir ortamda çalışma gerekliliği hakkındaki endişeler, özellikle çok sayıda numuneyle uğraşırken oldukça kafa karıştırıcı olabilir. Actinomycin D, toksisitesi ve ışık duyarlılığıyla bilindiği için genellikle bu endişelerin kaynağı olmuştur. Peki actinomycin D kütüphane kitlerine neden dahil edilmiştir?

Son bulgular, aktinomisin D'nin transkripsiyonu engelleme yeteneğine sahip olduğunu ortaya koymuştur. Bunu, transkripsiyon başlatma kompleksindeki DNA'ya bağlanarak ve böylece RNA polimerazı tarafından RNA zincirlerinin uzamasını önleyerek başarır. Esasen, aktinomisin D, polimeraz aktivitesine müdahale ederek cDNA sentez süreci sırasında ikinci ipliğin eş zamanlı sentezini engeller. Bu, iki iplikli sentezde dTTP yerine dUTP kullanımına olanak tanır ve RNA kütüphanesi yapımında zincir özgüllüğünün artmasına yol açar.

Actinomycin D'nin RNA kütüphanesi oluşturma kitlerine dahil edilmesi, tartışmasız bir şekilde, zincir özgül kütüphanelerin oluşturulmasını iyileştirdi ve zincir özgüllüğünü önemli ölçüde artırdı. Bu yenilik deneysel süreci hızlandırdı ve araştırmacılar için basitleştirdi. Dahası, RNA ile ilgili bilimsel araştırmaların temel bir yönü olan zincir özgüllüğünü önemli ölçüde iyileştirdi.

Ancak, actinomycin D'nin dezavantajları da vardır: toksisite gösterir ve ışıktan korunmayı gerektirir. Günümüzde önceden karıştırılmış ve plak kütüphanesi oluşturma kitlerine olan talebin arttığı bir ortamda, ışığa karşı koruma gerekliliği plak kiti geliştirmelerinde sınırlamalar oluşturmaktadır.

Neyse ki, artık aktinomisin D konusunda endişelenmeye gerek kalmadı. Yeasen ZymeEditor platformu, aktinomisin D'nin işlevini değiştiren çığır açıcı bir MMLV enzim mutantını tanıttı. Bu yeni Kit kokusuzdur, toksik değildir vekaçınmaya gerek yok Hafiftir. Üstün zincir özgüllüğü sunarak sağlık ve ışık hassasiyetiyle ilgili endişeleri ortadan kaldırır.

Tablo 1： Yeasen'in RNA Lib Hazırlık Kitlerinin Ayırt Edici Özellikleri

Şekil 3. Aktinomisin D içeren kiti, aktinomisin D içermeyen yeni kit ile birlikte kullanırken, verimler her iki kit için de 10 ng ve 1 μg RNA girdilerinde karşılaştırılabilirdi. Ancak, 4 μg RNA girdisinde, aktinomisin D içermeyen yeni kit daha yüksek verimler sergiledi.

Şekil 4. Actinomycin D eklenmeden MMLV mutantı içeren yeni kitin kullanımı, Actinomycin D içeren kite kıyasla daha üstün iplik özgüllüğü ile sonuçlanmaktadır. Bu ayrım, özellikle 10 ng gibi düşük RNA girdilerinde daha belirgin hale gelmektedir.

Müşteri deneyimini iyileştirmeye kendini adamış olan Yeasen, RNA kütüphane kitleri alanında yeni çığırlar açmaya devam ediyor.

Ürün önerisi