Yeasen ve Molefuture, sahte ligasyonla mücadele etmek için termotolerant, yüksek sadakat T4 DNA ligaz geliştirdi

Yeasen ve Molefuture, Moleküler Biyoloji Zorluklarının Üstesinden Gelmek İçin Gelişmiş T4 DNA Ligazını Tanıttı

Yeasen ve Molefuture, ZymeEditor platformlarını kullanarak, moleküler biyoloji ve yeni nesil dizileme (NGS) için DNA kütüphanesi yapımındaki temel sorunları ele alan, son teknoloji bir T4 DNA ligazı geliştirdiler. Geleneksel T4 DNA ligazı, zayıf stabilite, yüksek adaptör dimer oluşumu ve yüksek DNA parçacığı öz ligasyonu gibi zorluklarla karşı karşıyadır. Bu yeni enzim, bu sınırlamaların üstesinden gelmeyi amaçlamaktadır.

ATP'ye bağımlı bir enzim olan T4 DNA ligazı, kompakt-heliks DNA bağlama alanı (DBD), bir nükleotidil-transferaz (NTase) alanı ve bir OB-katlama alanı içerir. Protein yapısını analiz ederek, araştırmacılar DNA substratının 5 ila 20Å'si içindeki önemli kalıntıları belirlediler. Gelişmiş hesaplama araçları, silico tarama ve yapı-işlev analizi kullanarak, yapısal-işlevsel içgörüleri içeren fikir birliği dizi hizalaması yoluyla mutantlar tasarladılar.

Rasyonel tasarıma ek olarak, ekip yönlendirilmiş evrim için MTPS yöntemini kullandı ve 10.000'den fazla mutantı kararlılık, aktivite ve kalıntı aktivite açısından taradı. Umut vadeden adaylar titiz bir saflaştırma ve testten geçti. Ardından aktivite, kararlılık, adaptör kendi kendine bağlanması, DNA parçası kendi kendine bağlanması ve DNA verimini değerlendiren ayrıntılı karakterizasyon yapıldı.

Araştırmacılar, çeşitli uygulamalara uygun olağanüstü varyantlar geliştirmek için DNA rasyonel tasarımını ve G1 mutantlarındaki yönlendirilmiş mutasyonu birleştirdiler. Bu kapsamlı yaklaşım, NGS'de moleküler biyoloji araştırmalarını ve DNA kütüphanesi yapımını geliştirmeye hazır, oldukça verimli ve güvenilir bir T4 DNA ligazıyla sonuçlandı.

Şekil 1. Versatility T4 DNA Ligazının evrimini göstermektedir. (A) Rasyonel tasarım T4 DNA ligazının. (B) 45℃'de termotolerant T4 DNA ligaz mutantlarının taranması, belirgin şekilde artırılmış özgül aktiviteye sahip mutantların tanımlanmasına yol açar. (C) DNA kütüphanesi hazırlanması sırasında adaptör dimer oluşumunu azaltmayı amaçlayan T4 DNA ligaz mutantlarının taranması. (D) DNA kütüphane hazırlama yöntemi kullanılarak 42℃'de 1 saat ısıl işlem sonrası kütüphane verimlerinin tutulmasının değerlendirilmesi.
Tablo 1. Yeasen Versatile T4 DNA ligase termostabildir. Enzim 5 gün boyunca 30℃'de muamele edildi ve DNA Lib Prep yöntemi ile analiz edildi.
Şekil 2. Yeasen Versatile T4 DNA ligazı daha yüksek doğruluğa sahiptir Doğal tip (WT) T4 DNA ligazına kıyasla, DNA Lib Prep yöntemi ile analiz edilen, kendi kendine yanlış bağlanma nedeniyle daha az adaptör dimer oluşumu ile gösterilen (A) ve (B).
Şekil 3. Yeasen Çok Yönlü T4 DNA ligazı, DNA Lib Prep yöntemi ile analiz edilen termotolerant ligazlar da dahil olmak üzere ticari T4 DNA ligazlarına kıyasla en düşük adaptör dimer oluşumunu göstermektedir.
Bu atılım, Yeasen ve Molefuture'un enzim mühendisliğinde yenilikçilik ve mükemmelliğe olan bağlılığını ortaya koyuyor.

Sipariş bilgileri

İsim Kedi# Notlar
Enzim Hieff™ Çok Yönlü T4 DNA Ligaz (600 U/µL) 12996ES Tümör gen tespiti için Termotoleranslı ve Yüksek Doğruluk
DNA Hieff NGS® DNA Kütüphane Hazırlık Kiti 13577ES Tümör/ Mekanik yöntem
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Kütüphane Hazırlık Kiti V2 12194ES Tümör/Enzimsel yöntem
Hieff NGS® OnePot II Illumina için DNA Kütüphane Hazırlık Kiti 13490ES Pathgen/ Enzim/ normal süre (140dk)
Hieff NGS® OnePot Flash DNA Kütüphane Hazırlık Kiti 12316ES Pathgen/ Enzimsel/ Ultrahızlı (100dk)
Hieff NGS® DNA&RNA Kütüphanesi Ortak Hazırlama Kiti V2 12305ES Pathgen/ Enzimetik/ DNA ve RNA Ortak Hazırlığı
RNA Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Kütüphane Hazırlık Kiti 12308ES Oligo dT manyetik boncuklar olmadan, 11 tüp
Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Kütüphane Hazırlık Kiti 12309ES oligo dT manyetik boncuklar artı, 14 tüp
Hieff NGS® Ultima Dual-mod RNA Kütüphane Hazırlık Kiti 12310ES Önceden karıştırılmış versiyon, 5 tüp
Hieff NGS ® EvoMax RNA Kütüphane Hazırlık Kiti (Önceden karıştırılmış versiyon) (aktinomisin D Özgür) 12340ES Önceden karıştırılmış versiyon, (Aktinomisin D Özgür)
Hieff NGS® MaxUp rRNA Tükenme Kiti (Bitki) 12254ES Bitki
Hieff NGS® MaxUp İnsan rRNA Tükenme Kiti (rRNA ve ITS/ETS) 12257ES İnsan

Bu enzimin diğer üst düzey termostabil ve konvansiyonel T4 DNA ligazları ile performans karşılaştırma verileri hakkında bilgi almak için lütfen bir mesaj bırakın.

Molefuture Biyoteknoloji Hakkında

Molefuture Biotechnology, Yeasen'in bir yan kuruluşudur Biyoteknoloji (Şanghay) Şirketi, enzim evrim teknolojisiyle yönlendirilen özelleştirilmiş enzim modifikasyon çözümleri sağlama konusunda uzmanlaşmıştır. Yeasen kaynaklarından yararlanarak Biyoteknoloji, Molefuture altı büyük teknolojik platformda faaliyet göstermektedir: ZymeEditor yenilikçi enzim evrim platformu, çok konaklı yüksek verimli ifade platformu, fermantasyon süreci geliştirme platformu, saflaştırma süreci geliştirme platformu, ultra temiz enzim üretim platformu ve enzim analizi ve kalite kontrol platformu. Bu altı teknolojik platformla Molefuture, enzim yönlendirmeli evrim, yeni enzim geliştirme, enzim süreci geliştirme ve in vitro tanı, biyomedikal, sentetik biyoloji, tıbbi estetik, farmasötik ara ürünler vb. alanlardaki enzimlerin uygulama taleplerini karşılamak için GMP düzeyinde ölçeklendirme üretimi dahil olmak üzere eksiksiz bir özelleştirilmiş çözüm seti sunabilir.

Sorgu