Trong quá trình nuôi cấy tế bào thường cần đến quá trình tiêu hóa tế bào, do đó trypsin dùng để tiêu hóa tế bào sẽ không thể thiếu đối với nuôi cấy tế bào, đồng thời cũng rất quan trọng, điều này sẽ ảnh hưởng đến trạng thái sinh trưởng của tế bào.

Trypsin có thể được chia thành hai loại chính, một là trypsin tái tổ hợp và loại còn lại là trypsin không tái tổ hợp.

• Trypsin không tái tổ hợp có nguồn gốc từ động vật, và cũng là cách sử dụng trypsin truyền thống, thường có trong hệ tiêu hóa của động vật và được chiết xuất trực tiếp từ mô tụy của gia súc hoặc lợn.
• Trypsin tái tổ hợp được sản xuất bằng công nghệ tái tổ hợp di truyền và không có nguồn gốc từ động vật.

Giới thiệu sản phẩm và ứng dụng

Trypsin không tái tổ hợp (có nguồn gốc từ động vật)

Tính năng sản phẩm:

Trypsin không tái tổ hợp (còn gọi là trypsin) là một loại enzyme phân giải protein serine được chiết xuất từ ​​tuyến tụy của gia súc, cừu và lợn, có khả năng phân cắt đặc hiệu đầu carboxyl của lysine và arginine tích điện dương, được tinh chế bằng phương pháp kết tinh nhiều lần và được điều chế thêm bằng công nghệ sắc ký và siêu lọc, có nguồn gốc từ động vật.

Do các enzym tuyến tụy có thể tác động lên các protein xuyên màng và protein trong ma trận ngoại bào, chẳng hạn như cadherin, integrin, v.v., nên hiện nay chúng thường được sử dụng để phân tách các mô và tế bào đơn lớp. Mặc dù trypsin có thể thủy phân quá trình phân giải protein giữa các tế bào thành các tế bào riêng biệt, nhưng phản ứng của các mô hoặc tế bào khác nhau đối với trypsin là khác nhau và hoạt động của các tế bào phân tán cũng liên quan đến nồng độ trypsin, nhiệt độ và thời gian phản ứng, và khả năng phân tán tế bào của trypsin mạnh nhất trong điều kiện pH từ 7-9 và nhiệt độ 37 °C. Việc thêm EDTA vào dung dịch trypsin như một tác nhân tạo phức sẽ liên kết canxi và magiê thành cấu trúc sáu răng, có thể làm suy yếu sự kết dính tế bào-tế bào và tăng cường sự thu nhận các liên kết peptide mục tiêu thủy phân của trypsin.

Ứng dụng chính của trypsin trong những ngày đầu trong lĩnh vực dược phẩm sinh học là sản xuất insulin, và sau đó cũng được sử dụng trong các lĩnh vực nuôi cấy tế bào khác. Enzym tuyến tụy động vật thường được sử dụng trong nuôi cấy huyết thanh, và thành phần và nồng độ trypsin được thêm vào các tế bào khác nhau là khác nhau.

Ứng dụng

1. sản xuất insulin và vắc-xin bất hoạt;
2. Phân lập và nuôi cấy tế bào mô;
3. Sử dụng lâm sàng và phẫu thuật;
4. Chất hỗ trợ chế biến trong ngành thực phẩm;

Trypsin tái tổ hợp (không có nguồn gốc động vật)

Tính năng sản phẩm

Trypsin tái tổ hợp là một loại enzyme được sản xuất bằng công nghệ kỹ thuật di truyền, có ưu điểm là ổn định tốt, độ tinh khiết cao và không có nguồn gốc từ động vật. Trong quá trình sản xuất dược phẩm sinh học hiện đại, việc sử dụng nguyên liệu có nguồn gốc động vật có thể đưa các nguồn vi-rút tiềm ẩn gây ra các bệnh truyền nhiễm từ động vật vào sản phẩm, chẳng hạn như bệnh bò điên, vi-rút lở mồm long móng, v.v., để giảm nguồn ô nhiễm, trypsin được tổng hợp thông qua công nghệ kỹ thuật di truyền, giải quyết nguy cơ nhiễm vi-rút có thể do trypsin lợn hoặc bò truyền thống mang lại.

Trypsin tái tổ hợp chủ yếu được biểu hiện tái tổ hợp bởi hệ thống E. coli hoặc nấm men tái tổ hợp và được tinh chế bằng sắc ký nhiều bước, không bị nhiễm heterozyme như chymotrypsin. Trypsin tái tổ hợp có cùng đặc tính như trypsin chiết xuất tự nhiên, với trình tự amino axit tương đồng với trình tự trypsin lợn, đặc biệt cắt nhóm carboxyl trong các gốc lysine và arginine trong chuỗi polypeptide.Do không có nguồn ô nhiễm từ động vật và độ tinh khiết cao nên nó có nhiều ứng dụng trong phát triển dược phẩm, nghiên cứu sinh hóa, nghiên cứu protein và các lĩnh vực khác.

Trypsin tái tổ hợp chính thống trên thị trường là trypsin lợn tái tổ hợp được biểu hiện trong Escherichia coli hoặc nấm men bằng công nghệ tái tổ hợp DNA và trình tự axit amin của nó hoàn toàn phù hợp với trypsin lợn, có cùng hoạt tính và tính đặc hiệu như trypsin tự nhiên. Nó bao gồm 223 axit amin và chứa 6 cặp liên kết disulfide. Enzym chứa hai dạng trypsin hoạt động: α-trypsin và β-trypsin. Hoạt động của nó bị ức chế bởi các chất ức chế protease serine như PMSF và TLCK, chất tạo phức ion kim loại như EDTA, v.v. Trypsin tái tổ hợp được sử dụng trong nuôi cấy không huyết thanh và giống như trypsin, các tế bào khác nhau được thêm vào các thành phần và nồng độ trypsin khác nhau.

Ứng dụng

1. sản xuất vắc-xin và insulin tái tổ hợp;
2. Chuẩn bị mẫu mô để phân tích tế bào;
3. Liệu pháp tế bào miễn dịch;
4. Sản xuất dược phẩm sinh học;
5. Nghiên cứu trình tự, cấu trúc và omics protein

So sánh chi tiết các sản phẩm

các sản phẩm	Trypsin không tái tổ hợp (có nguồn gốc từ động vật)	Trypsin tái tổ hợp (không có nguồn gốc động vật)
Mục	40123ES（phenol đỏ(-),EDTA(+)） 40124ES（phenol đỏ(-),EDTA(-)） 40126ES（phenol đỏ(+),EDTA(-)） 40127ES（phenol đỏ(+),EDTA(+)）	40512ES 20416ES（MS-AN TOÀN）
Nguồn	Lấy từ tuyến tụy của gia súc, lợn và cừu	trực khuẩn coli（40512ES） Pichia pastoris (20416ES)
Bảo vệ	Nhiễm bẩn với các tác nhân gây bệnh tiềm ẩn	Không có sự nhiễm bẩn virus ngoại sinh
Độ tinh khiết	Hơn 90% dung dịch trypsin 1:250 là tạp chất	Độ tinh khiết cao (β-trypsin≥ 70%, α-trypsin≤20%）
Loại tế bào tiêu hóa	Hầu hết các dòng tế bào bám dính chặt chẽ liền kề	Hầu hết các dòng tế bào bám dính chặt chẽ liền kề
Giới hạn chymotrypsin	Không quá 50 đơn vị chymotrypsin trên 2500 đơn vị trypsin.	Không có myrosinase và các tạp chất khác gây ô nhiễm enzyme
Hoạt động cụ thể	≥2500 Đơn vị USP/mg protein	≥3800 Đơn vị USP/mg protein
Tác dụng tiêu hóa	sự bất ổn	Tiêu hóa mạnh và lượng enzyme thấp
Tỷ lệ tự cắt	Dễ dàng tự cắt và tạo ra các mảnh tự cắt, ảnh hưởng đến kết quả phân tích khối phổ	Dễ dàng tự cắt và tạo ra các mảnh tự cắt, ảnh hưởng đến kết quả phân tích khối phổ
Chất lỏng hòa tan	Dung dịch HBSS có hoặc không có Ca2+, Mg2+	Dung dịch HBSS có hoặc không có Ca2+ và Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL（20416ES）
Sự sống còn của tế bào	Bình thường	Bình thường
Có cần đông lạnh-tan băng không	Đúng	Đúng

Ngoài loại trypsin phổ biến nhất được sử dụng trong quá trình tiêu hóa tế bào, còn có nhiều loại sản phẩm enzyme tiêu hóa khác cũng có thể được sử dụng, chẳng hạn như sau.

Về lĩnh vực ứng dụng của collagenase

Collagenase là một endonuclease peptidase có khả năng nhận biết đặc hiệu trình tự Pro-X-Gly-Pro và cắt liên kết peptide giữa axit amin trung tính (X) và glycine (Gly) trong trình tự, collagenase là protease duy nhất có thể phân hủy các sợi collagen tự nhiên có cấu trúc siêu xoắn ba sợi và có thể thủy phân hiệu quả các protein, polysaccharides và lipid khác trong ma trận ngoại bào của mô liên kết và mô biểu mô, làm cho sản phẩm này rất thích hợp cho quá trình tiêu hóa mô.

1. Collagenase I, thường được sử dụng như một chế phẩm của tế bào biểu mô, tế bào gan, phổi, mỡ và mô tuyến thượng thận;
2. Collagenase II, được sử dụng để chuẩn bị các tế bào có nguồn gốc từ mô như tim, xương, cơ, gan, tuyến giáp và sụn;
3. Collagenase III, thường được sử dụng trong quá trình chuẩn bị tế bào vú;
4. Collagenase IV, thường được sử dụng để chuẩn bị tế bào đảo tụy hoặc cho các thí nghiệm chuẩn bị tế bào khi cần duy trì tính toàn vẹn của thụ thể.
5. Collagenase V., thích hợp để phân lập tế bào đảo tụy và tế bào mô liên kết.

Về lĩnh vực ứng dụng của hợp chất trypsin

Accutase là một chất tiêu hóa tế bào có chứa hoạt tính phân giải protein và collagenase, và là một chất thay thế hoàn hảo cho các chất tiêu hóa trypsin-EDTA để tiêu hóa các tế bào từ các bình nuôi cấy mô thông thường và các bình nuôi cấy bám dính. Accutase thích hợp cho việc phân tách mô và phân lập tế bào, vì các tế bào được phân lập vẫn giữ nguyên các kháng nguyên bề mặt và không chứa bất kỳ thành phần nào có nguồn gốc từ động vật hoặc vi khuẩn, có thể đáp ứng các yêu cầu của các thí nghiệm tiếp theo như đánh dấu bề mặt tế bào, phân tích tăng trưởng vi-rút, đo lưu lượng tế bào và các xét nghiệm liên quan đến lò phản ứng sinh học.

Các lĩnh vực ứng dụng cho chất thay thế enzyme tuyến tụy

Các sản phẩm enzyme PerfCell Tryzyme™ Express có độ tinh khiết cao, ít gây tổn thương tế bào, dễ tiêu hóa và có thể bảo quản ổn định ở nhiệt độ phòng, khiến chúng trở thành enzyme tiêu hóa lý tưởng cho các dòng tế bào nuôi cấy khác nhau. Loại sản phẩm này không yêu cầu sử dụng chất ức chế trypsin để bất hoạt và không chứa nguồn gốc động vật, thân thiện hơn với một số thí nghiệm tế bào bám dính không có huyết thanh.

Về lĩnh vực ứng dụng của dispase

Dispase II dispase II, một metalloproteinase không đặc hiệu, thường được sử dụng trong sinh học tế bào để phân lập các tế bào đơn lẻ từ các mô hoặc cơ quan khác nhau và được sử dụng trong các nuôi cấy tế bào tiếp theo, chẳng hạn như phân lập tế bào sơ cấp, truyền tế bào, v.v., và cũng có thể được sử dụng để loại bỏ sự kết tụ tế bào xảy ra trong quá trình nuôi cấy tế bào treo. So với các protease khác thường được sử dụng trong sinh học tế bào (ví dụ, trypsin, collagenase, pronase, v.v.), enzyme này có những ưu điểm sau:

1. Enzym tiêu hóa tế bào nhanh, hiệu quả và nhẹ nhàng, ít gây tổn hại đến tế bào và có thể duy trì tính toàn vẹn của màng tế bào;
2. Có nguồn gốc từ vi khuẩn, không có mycoplasma hoặc nhiễm virus động vật khác;
3. Độ ổn định cao, không bị ảnh hưởng bởi nhiệt độ, pH và các thành phần huyết thanh;
4. Nó có thể được sử dụng để phân lập nhiều loại mô và tế bào khác nhau.

Khuyến nghị sản phẩm liên quan

Số danh mục	Tên sản phẩm	Kích cỡ
40123ES60	PerfCel™l Trypsin-EDTA (0,25%), Phenol đỏ	100mL
40124ES60	PerfCell™ Trypsin-không có EDTA (0,25%), không có phenol đỏ	100mL
40126ES60	PerfCell™ Trypsin (0,25%), phenol đỏ	100mL
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0,25%), Phenol đỏ	100mL
40101ES25	Trypsin 1:250 (bột)	25g
40512ES10/60	PerfCell™ Trypsin tái tổ hợp (bột)	10mg/100mg
20416ES60	Trypsin tái tổ hợp (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100mL
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100mL
40506ES60	CHÍNH XÁC	100mL
40104ES60/80	Phân tán II	100mg/1g