Nhân bản phân tử được sử dụng trong hầu hết mọi phòng thí nghiệm. Endonuclease hạn chế là một thành phần quan trọng trong các thí nghiệm nhân bản phân tử, nhưng mọi người cũng thường gặp phải nhiều vấn đề khác nhau với các thí nghiệm endonuclease hạn chế. Các vấn đề phổ biến như sau:

• Có rất nhiều loại endonuclease hạn chế nên rất khó để lựa chọn.
• Sự phân cắt không đồng đều, sự phân cắt ngẫu nhiên hoặc sự phân cắt bằng enzym không hoàn toàn.
• Tốc độ tiêu hóa chậm; có thể mất một giờ hoặc thậm chí qua đêm.
• Ngoài ra, các thí nghiệm tiêu hóa nhiều loại enzyme cũng cần phải lựa chọn nhiều loại enzyme tiêu hóa khác nhau.

Để chứng minh với ide bạn hiểu rõ hơn về endonuclease hạn chế, sau đây sẽ giải thích ngắn gọn endonuclease hạn chế là gì và cách phân loại các endonuclease khác nhau để trả lời câu hỏi đầu tiên. Yeasen Dòng FuniCut™ của Fast Restriction Endonuclease có thể dễ dàng giải quyết vấn đề thứ hai đến thứ tư thông qua điều chế biến dạng và quy trình cải tiến!

1. Endonuclease hạn chế là gì?
2. Danh pháp endonuclease hạn chế
3. Hạn chế về phân loại endonuclease
4. Yeasen FuniCut™ Fast Restriction Endonuclease

1. Endonuclease hạn chế là gì?

Endonuclease hạn chế là một loại enzyme có khả năng nhận biết trình tự nucleotide cụ thể trong phân tử DNA mạch kép và cắt liên kết phosphodiester trong chuỗi DNA tại các vị trí cụ thể.

Các endonuclease hạn chế khác nhau sẽ nhận diện các trình tự DNA khác nhau. Chúng có thể cắt DNA bên trong trình tự nhận diện hoặc ở một vị trí không xa trình tự nhận diện, tạo ra nhiều sản phẩm khác nhau, như minh họa trong Hình 1. BamHI tạo thành đầu dính, KpnI tạo thành đầu 3'ticky và EcoRV tạo thành đầu tù.

Hình 1. Sơ đồ quá trình tiêu hóa BamHI, KpnI, EcoRV

2. Danh pháp endonuclease hạn chế

Tên chi, tên loài, chủng vi khuẩn hoặc huyết thanh, và thứ tự phát hiện là những yếu tố chính được sử dụng để đặt tên cho endonuclease hạn chế. Các hướng dẫn về tên được hiển thị trong Bảng 1 bên dưới, sử dụng BstEII làm ví dụ:

Bảng 1. Danh pháp endonuclease hạn chế

3.Những hạn chế trong phân loại endonuclease

Theo độ phức tạp của cấu trúc, phương thức hoạt động và sự khác biệt giữa các cofactor, enzyme hạn chế có thể được chia thành bốn loại. Bảng 2 sau đây tóm tắt các đặc điểm và enzyme tiêu biểu của từng loại.

Bảng 2. Sự khác biệt giữa một số endonuclease hạn chế

Như được chỉ ra trong Bảng 3 bên dưới, nó cũng có thể được chia thành ba nhóm dựa trên điểm giống và khác nhau giữa các vị trí nhận biết và tiêu hóa.

Bảng 3.Phân tích so sánh Isoschizomer, Neoschizomer và Isocaudarner

Xét đến thực tế là một số endonuclease hạn chế trên thị trường vẫn cần phải tiêu hóa qua đêm và các sản phẩm này dễ bị tiêu hóa không đúng cách, Yeasen Nuclease Endoa hạn chế nhanh, một chất đệm phổ biến, tiêu hóa hoàn toàn chính xác trong 5 phút, giúp các thí nghiệm tiêu hóa của bạn không còn gặp rắc rối nữa!

4. Yeasen FuniCut™ Endonuclease hạn chế nhanh