Virus gây dịch tả lợn châu Phi - Giải pháp tổng hợp Master Mix/khuếch đại trực tiếp qPCR

Dịch tả lợn châu Phi (ASF) là một bệnh truyền nhiễm cấp tính, nghiêm trọng và dễ lây lan do virus dịch tả lợn châu Phi (ASFV) gây ra ở lợn nhà hoặc lợn rừng. Tỷ lệ mắc bệnh và tử vong có thể lên tới 100%, gây nguy hiểm nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi lợn toàn cầu và gây ra thiệt hại kinh tế không thể tính toán được. Tổ chức Thú y Thế giới (OIE) liệt kê đây là bệnh động vật phải báo cáo.

Hiện nay, chưa có vắc-xin hoặc phương pháp điều trị hiệu quả cho bệnh dịch tả lợn châu Phi. Chẩn đoán nhanh và chính xác bệnh dịch tả lợn châu Phi thông qua các phương pháp chẩn đoán trong phòng thí nghiệm là rất quan trọng để ngăn ngừa sự lây lan của bệnh. OIE khuyến nghị qPCR là công cụ chính để chẩn đoán thường quy ASF.

Yeasen là nhà sản xuất có nhiều kinh nghiệm trong R&D nguyên liệu thô IVD. Trước tình hình dịch tả lợn Châu Phi, Yeasen phản hồi tích cực và hợp tác với khách hàng để phát triển ba giải pháp toàn bộ quy trình từ chiết xuất đến phát hiện virus dịch tả lợn Châu Phi. Vậy ba giải pháp đó là gì? Và ứng dụng của các giải pháp này là gì? Tiếp tục đọc...

Hình 1. Yeasen Giải pháp phát hiện dịch tả lợn Châu Phi

Giải pháp I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG cộng thêm)cuộc điều tra)

Yeasen's TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) (Cat#13171) là hỗn hợp master được tối ưu hóa để phát hiện ASFV có chứa hỗn hợp enzyme, Mg2+, dNTP và đệm. Hỗn hợp master được sử dụng trong bước khuếch đại và được định cấu hình như dung dịch trộn sẵn bằng cách thêm mồi và đầu dò. Hỗn hợp master được thiết kế với các yếu tố có thể ức chế hiệu quả quá trình khuếch đại PCR không đặc hiệu và cải thiện hiệu quả khuếch đại lên 4-plex.

Tính năng sản phẩm

👍Hệ thống chống ô nhiễm UDG, ngăn ngừa hiệu quả nguy cơ ô nhiễm khí dung

👍Độ ổn định lâu dài của dung dịch PCR được trộn sẵn (hỗn hợp chính + mồi + đầu dò) ở nhiệt độ phòng, giúp đơn giản hóa đáng kể khó khăn trong phát hiện

👍Hiệu suất khuếch đại cao và khả năng lặp lại tốt

👍Phù hợp với nhiều nền tảng và nhiều hệ thống

Hiển thị trường hợp

👉Độ ổn định lâu dài của dung dịch PCR pha sẵn
Cat#13171 được sử dụng để cấu hình dung dịch PCR pha sẵn có thể đặt ở 37°C trong 7 ngày, và đông lạnh và rã đông lặp lại 15 lần trong quá trình khuếch đại hệ thống plasmid ASF. Kết quả cho thấy giá trị Ct và độ nhạy của dung dịch PCR không khác biệt đáng kể sau khi đặt ở 37℃ trong 7 ngày, và giá trị Ct không thay đổi đáng kể sau khi đông lạnh và rã đông lặp lại 15 lần.

Hình 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG cộng với)Hỏi thăm) được sử dụng trong dung dịch PCR pha sẵn có độ ổn định lâu dài trong khuếch đại hệ thống plasmid ASF. 2A-Giá trị Ct ở 37℃ trong 0 ngày và 7 ngày 2B-Độ nhạy ở 37℃ trong 0 ngày và 7 ngày 2C-Độ ổn định sau khi đông lạnh-rã đông 15 lần

👉Thuốc thử ổn định và có thể tái tạo
Bốn lô khác nhau của Cat#13171 đã được chọn để lặp lại thí nghiệm khuếch đại hệ thống plasmid ASFV 20 lần. Không có sự khác biệt đáng kể nào về giá trị Ct, với CV dưới 1%.

Hình 3.Kiểm tra khả năng lặp lại của Yeasen Mèo#13171

👉Áp dụng đa nền tảng đa hệ thống
Yeasen Cat#13171 được sử dụng để khuếch đại plasmid kép ASFV/ACT của bệnh dịch tả lợn châu Phi trên các nền tảng Bio-Rad CFX96, ABI Q5 và Slan tương ứng. Có thể thấy rằng Yeasen Cat#13171 phù hợp với nhiều loại thiết bị khác nhau, dữ liệu đáng tin cậy và ổn định.

Hình 4. Hệ thống PCR thời gian thực Bio-Rad CFX96


Hình 5. Hệ thống PCR thời gian thực ABI Q5

Hình 6. Hệ thống PCR thời gian thực Slan

Giải pháp II:Hỗn hợp chính qPCR đa kênh TaqMan phổ quát

YeasenHỗn hợp master qPCR multiplex Universal TaqMan (Cat#11211) được tối ưu hóa sâu sắc để khuếch đại hiệu quả các mẫu có nồng độ thấp bằng cách sử dụng DNA polymerase Hot-Start Taq được biến đổi kháng thể và đệm đa plex phù hợp. Sản phẩm này hỗ trợ phản ứng PCR lên đến 4 plex trong một ống và lý tưởng cho phân tích kiểu gen và qPCR đa plex.

Tính năng sản phẩm

👍Khả năng chịu đựng tạp chất máu mạnh, có thể sử dụng với Yeasen Thuốc thử chiết xuất axit nucleic Cat#13720 Thuốc thử giải phóng axit nucleic V2, lý tưởng cho qPCR trực tiếp
👍Độ nhạy cực cao với 3 bản sao/phản ứng, cải thiện đáng kể độ chính xác phát hiện
👍Độ ổn định lâu dài của dung dịch PCR được trộn sẵn (hỗn hợp chính + mồi + đầu dò) ở nhiệt độ phòng, giúp đơn giản hóa đáng kể khó khăn trong phát hiện

Hiển thị trường hợp

👉Khả năng chịu đựng tạp chất trong máu cao
So với các sản phẩm tương tự của các thương hiệu khác, Yeasen Cat#11211 có khả năng chịu đựng chất ức chế cao hơn trong các mẫu máu. Kết quả cho thấy rằng Yeasen Cat#11211 có khả năng chịu đựng cao với EDTA và natri citrat, và có thể chịu được 0,5% máu toàn phần.

Hình 7. Cat#11211 Hỗn hợp chính qPCR đa kênh TaqMan phổ biến và hỗn hợp chính từ nhiều thương hiệu khác nhau được sử dụng cho các dung dịch qPCR ASF bổ sung lần lượt 3 mM EDTA (3A), 6 mM natri citrat (3B), 0,5% máu (3C).

👉Độ nhạy cực cao với 3 bản sao/phản ứng

Việc khuếch đại plasmid ASFV với 20 lần lặp lại được thực hiện dựa trên các sản phẩm từ các thương hiệu khác nhau. Kết quả thí nghiệm cho thấy tỷ lệ phát hiện Yeasen sản phẩm cao hơn.

Hình 8. So sánh tỷ lệ phát hiện giữa các sản phẩm tương tự từ các thương hiệu khác nhau (3 bản sao trong hệ thống cuối cùng)

👉Độ ổn định lâu dài, ổn định trong 7 ngày ở nhiệt độ phòng

Dung dịch PCR của hệ thống plasmid kép ASFV/ACT có thể duy trì hiệu suất ổn định sau 7 ngày ở 4℃, 25℃ và 37℃. Có thể thấy giá trị Ct và giá trị huỳnh quang không thay đổi đáng kể.

Hình 9. Độ ổn định của dung dịch PCR

Giải pháp III: Sự khuếch đại đẳng nhiệt

YeasenCác sản phẩm của 's hỗ trợ công nghệ khuếch đại đẳng nhiệt giúp phát hiện ASF nhanh hơn và hiệu quả hơn. Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) có nguồn gốc từ Thermophilic Geobacillus sp DNA Polymerase I, thiếu hoạt động exonuclease 5'-3'.Sản phẩm này có hoạt tính DNA polymerase 5'-3' mạnh hơn, hoạt tính dịch chuyển sợi và khả năng chịu dUTP, phù hợp hơn cho các phản ứng khuếch đại đẳng nhiệt chống ô nhiễm như LAMP, CPA, v.v.

Tính năng sản phẩm

👍Hiệu suất khuếch đại cao

👍Khuếch đại năng suất cao

👍Khả năng chịu đựng dUTP, có thể được sử dụng kết hợp với Cat#10303 Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)(Hỏi thăm), không chịu nhiệt, 1 U/μL để ngăn ngừa nguy cơ nhiễm bẩn khí dung

Hiển thị trường hợp

👉Sự thay thế tuyệt vời cho các sản phẩm thương hiệu N* nhập khẩu

Quá trình khuếch đại được thực hiện bằng cách sử dụng DNA polymerase Bst từ Yeasen và Công ty N*. Không có sự khác biệt đáng kể về giá trị Ct và cường độ huỳnh quang giữa các thương hiệu khác nhau.

Hình 10. Đường cong khuếch đại của các thương hiệu khác nhau

Đặt hàng sản phẩm

Yeasen cung cấp nhiều sản phẩm khác nhau để phát hiện ASFV trong ba giải pháp trên. Các sản phẩm được mô tả và các sản phẩm liên quan được liệt kê trong bảng dưới đây. Vui lòng chọn phương pháp phát hiện phù hợp và các sản phẩm tối ưu theo nhu cầu của bạn.

Loại

Mô tả sản phẩm

Tên sản phẩm

Mã sản phẩm

Chiết xuất

Chiết xuất hạt từ tính

Thuốc thử giải phóng axit nucleic V2 (Hỏi thăm)

13720ES

qPCR Trộn

Premix ổn định

Hieff Unicon™ TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG cộng thêm)Hỏi thăm)

13171ES

Độ nhạy cao

Hieff Unicon™ Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

11211ES

Enzym & Kháng thể

Taq

Hieff UNICON™ HotStart Direct Taq DNA Polymerase(Hỏi thăm)

10717ES

Kháng thể Taq

Kháng thể DNA Polymerase kháng Taq khối kép Hieff™

31303ES

Bst

DNA Polymerase Hieff™ Bst Plus (40 U/μL)

14402ES

DNA Polymerase Hieff™ Bst Plus (2000 U/μL)(Hỏi thăm)

14403ES

UDG

Uracil DNA Glycosylase (UDG), không bền với nhiệt(Hỏi thăm)

10303ES

Về việc đọc:

Yeasen Giải pháp tổng thể của Biology để phát hiện virus gây dịch tả lợn Châu Phi

Virus đậu khỉ bùng phát trên toàn thế giới, chúng ta nên làm gì? -Yeasen cung cấp nguyên liệu enzyme để phát hiện virus

Cuộc điều tra