Trong những năm gần đây, sự phát triển và ứng dụng công nghệ mRNA tiếp tục thu hút sự chú ý. Thuốc mRNA liên quan đến việc tiêm mRNA mã hóa protein kháng nguyên vào cơ thể người. Bằng cách sử dụng vật liệu di truyền bên trong tế bào người, chúng biểu hiện và tổng hợp protein kháng nguyên. Quá trình này kích thích và kích hoạt hệ thống miễn dịch của cơ thể thông qua protein kháng nguyên, nhằm mục đích ngăn ngừa và điều trị bệnh. Thuốc mRNA có những ưu điểm như an toàn, hiệu quả và chu kỳ ngắn. Chúng có thể đồng thời kích thích miễn dịch dịch thể và tế bào và đã được áp dụng trong nhiều chỉ định khác nhau, bao gồm khối u, bệnh truyền nhiễm, bệnh hiếm gặp, bệnh tim mạch, v.v.
Toàn bộ quá trình phát triển thuốc mRNA có thể được chia thành một số bước sau:
Xác định và thiết kế trình tự—phiên mã mRNA trong ống nghiệm—chuẩn bị đóng gói
Các thông thường các bước của phiên mã mRNA trong ống nghiệm (IVT) bao gồm:
Chiết xuất DNA plasmid & tuyến tính hóa—Tinh chế DNA plasmid—Phiên mã trong ống nghiệm (đồng phiên mã)—Tinh chế—Dung dịch mRNA dự trữ
Các một nồi Quá trình phiên mã mRNA trong ống nghiệm (IVT) bao gồm:
Chiết xuất DNA plasmid & tuyến tính hóa—Phiên mã trong ống nghiệm (đồng phiên mã)—Tinh chế—Dung dịch mRNA dự trữ
Hiện nay, hầu hết các quy trình hiện có đều bao gồm một bước tinh chế duy nhất đối với DNA plasmid sau khi cắt bằng enzym trước bước IVT.
Ưu điểm của quy trình:
- Tối ưu hóa quy trình, giảm các bước IVT để vận hành đơn giản hơn.
- Giảm chi phí vật liệu, loại bỏ nhu cầu thanh lọc sau khi tách và kiểm tra chất lượng.
- Duy trì chất lượng và sản lượng mRNA.
Dữ liệu:
1. Năng suất và Chính trực:
Sử dụng 1μg plasmid 2K, 4K và 9K tuyến tính hóa, quy trình onepot có thể tạo ra 150-200μg mRNA.
| Chiều dài | Năng suất | Chính trực |
| 2K | 200 μg | 94,00% |
| 4K | 185 μg | 92,20% |
| 9K | 150 μg | 87,50% |
Kiểm tra tính toàn vẹn được thực hiện bằng phương pháp điện di mao quản (CE) để đánh giá tính toàn vẹn của các mảnh có độ dài 2K, 4K và 9K. Tính toàn vẹn của các mảnh 2K và 4K là >92% và tính toàn vẹn của các mảnh 9K là >87%.
2. Phát hiện hiệu quả giới hạn mRNA
LC-MS được sử dụng để đánh giá hiệu quả đóng nắp của trình tự 2K, cho thấy hiệu quả đóng nắp là 99,5%.
Hình ảnh trên cùng: Sắc ký đồ UV HPLC
Hình ảnh bên dưới: Phổ khối lượng phân tử được giải xoắn
3. Phát hiện hiệu quả polyadenylation mRNA
LC-MS được sử dụng để phát hiện hiệu quả polyadenylation của mẫu, cho thấy kết quả phân bố bình thường.
Hình ảnh trên cùng: Sắc ký lỏng sắc ký đồ TIC
Hình ảnh dưới cùng: Phổ khối lượng phân tử được giải xoắn
4.Biểu hiện mRNA Xét nghiệm
Chuyển gen tế bào 293T với các sản phẩm mRNA được tổng hợp bằng cách sử dụng cả thông thường quá trình (Bên trái, plasmid được tuyến tính hóa chúng tôithanh lọc lần thứ i) và quy trình một nồi (Phải, plasmid được tuyến tính hóa mà không cần tinh chế) không cho thấy sự khác biệt trong biểu hiện protein huỳnh quang sau 24 giờ nuôi cấy.
Thông tin đặt hàng