Qubit, một công cụ mạnh mẽ để định lượng thư viện NGS!
Bản chất của định lượng thư viện NGS là định lượng axit nucleic (DNA hoặc RNA). Phân tích chính xác định lượng thư viện NGS là rất quan trọng để có được dữ liệu giải trình tự chất lượng cao. Nếu nồng độ định lượng của thư viện NGS cao, năng suất dữ liệu giải trình tự có thể thấp do phân cụm không đủ. Tuy nhiên, nồng độ định lượng thấp có thể gây nhiễu tín hiệu giữa các cụm tạo ra dữ liệu chất lượng thấp và thậm chí dẫn đến lỗi giải trình tự. Ngoài ra, với sự gia tăng trong luồng giải trình tự của máy giải trình tự, nhiều thư viện NGS thường được kết hợp để giải trình tự. Theo yêu cầu về kích thước dữ liệu giải trình tự, các thư viện NGS có số lượng mol tương ứng được trộn lẫn dựa trên kết quả định lượng để ổn định đầu ra của kích thước của từng dữ liệu mẫu. Do đó, định lượng thư viện NGS chính xác là rất quan trọng.
Hiện nay, có hai phương pháp chính để định lượng thư viện NGS, phương pháp hấp thụ tia cực tím và phương pháp nhuộm huỳnh quang. NanoDrop là một thiết bị định lượng DNA được thiết kế dựa trên nguyên lý hấp thụ tia cực tím; Qubit là một thiết bị định lượng DNA được phát triển theo nguyên lý nhuộm huỳnh quang. Độ chính xác định lượng và chi phí của hai phương pháp này là khác nhau. Phương pháp qubit chủ yếu được đề xuất ở đây. Vậy tại sao chúng tôi lại giới thiệu qubit cho bạn? Các đặc điểm của sản phẩm Qubit do
1. Tại sao chúng tôi giới thiệu Qubit cho bạn?
2. Đặc điểm của sản phẩm Qubit do
- Qubit hoạt động như thế nào?
- Sản phẩm phổ biến được cung cấp bởi
Yeasen - Tính năng sản phẩm
3. Làm thế nào để chọn Qubit cho các mẫu khác nhau?
1. Tại sao chúng tôi giới thiệu Qubit cho bạn?
Không còn nghi ngờ gì nữa, Qubit tốt hơn Nanodrop. Vậy tại sao qubit lại tốt hơn nanodrop? Sự khác biệt giữa qubit và nanodrop là gì? Đầu tiên, như đã đề cập trước đó, chúng khác nhau về nguyên lý định lượng DNA, NanoDrop được thiết kế dựa trên sự hấp thụ tia cực tím. Nguyên lý của phương pháp hấp thụ tia cực tím là có các bazơ purin và pyrimidin trong các thành phần axit nucleic và các bazơ này có liên kết đôi liên hợp. Có sự hấp thụ ánh sáng mạnh ở 250-280nm trong vùng UV và giá trị hấp thụ tối đa là khoảng 260nm. Do đó, sự hấp thụ tia cực tím của axit nucleic có thể được sử dụng để định lượng nồng độ. NanoDrop vận hành đơn giản và nhanh chóng, nhưng không thể phân biệt giữa DNA, RNA, axit nucleic bị phân hủy, nucleotide tự do và các tạp chất khác. Nó không phù hợp để thu được dữ liệu định lượng thư viện chính xác. Nhưng, định lượng Qubit là lựa chọn tốt nhất để định lượng thư viện NGS chính xác, đặc biệt là định lượng DNA. Vậy các tính năng của định lượng DNA qubit là gì? Vui lòng xem bảng sau:
| Tính đặc hiệu | Thuốc nhuộm huỳnh quang liên kết ưu tiên với dsDNA |
| Chiều dài của đoạn DNA | Không có hạn chế cụ thể |
| Sự chính xác | Cao |
| Yêu cầu về kích thước mẫu | Pha loãng mẫu 1-20μl |
| Phạm vi nồng độ phát hiện | 0.2-100ng |
| Số lượng tiêu chuẩn | Thường là hai |
| Thử nghiệm với thời gian vận hành thủ công | Đặt thời gian là 5 phút và thời gian đo cho một mẫu đơn là 3 giây |
| Thời gian phát hiện | 5 phút-30 phút (tùy thuộc vào kích thước mẫu) |
| Công cụ áp dụng | Qubit (3.0/4.0); Đầu đọc vi mạch có bước sóng tương ứng |
| Cảnh áp dụng | định lượng dsDNA; định lượng dsDNA trong xây dựng thư viện NGS và định lượng nhanh trong thư viện thông thường |
2. Đặc điểm của sản phẩm Qubit do Yeasen ?
Trước khi giới thiệu các đặc điểm của sản phẩm Qubit do
2.1 Qubit hoạt động như thế nào?
Nguyên lý của Qubit là sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang để liên kết với các phân tử DNA để phát huỳnh quang, sau đó đo cường độ huỳnh quang để thu được nồng độ axit nucleic. Thuốc nhuộm huỳnh quang chỉ phát huỳnh quang sau khi liên kết với chuỗi kép DNA và huỳnh quang thu được tỷ lệ thuận với nồng độ DNA.
2.2 Sản phẩm phổ biến được cung cấp bởi Yeasen
Các Bộ xét nghiệm HS 1×dsDNA cho Qubit® (Mã số: 12642ES), được phát triển dựa trên Bộ xét nghiệm dsDNA HS cho bộ xét nghiệm Qubit® (Mã số: 12640ES), là dung dịch pha sẵn Qubit đã pha sẵn để pha loãng trước thuốc nhuộm cô đặc trong bộ ban đầu thành dung dịch làm việc. Khi vận hành, bạn chỉ cần trộn chất lỏng làm việc với mẫu cần thử để xác định nồng độ mẫu bằng máy đo huỳnh quang Qubit®, tiện lợi hơn khi sử dụng.
2.3 Tính năng sản phẩm
Đơn giản và dễ vận hành: chất lỏng được trộn sẵn để sử dụng, không cần chuẩn bị chất lỏng làm việc, vận hành đơn giản, tiết kiệm thời gian định lượng hơn;
Hình 1. Các quy trình của Bộ xét nghiệm HS dsDNA cho Qubit
Độ nhạy cực cao: định lượng chính xác pha loãng gradient 64x, 0,2-100 ng dsDNA có mối quan hệ tuyến tính tốt;
Siêu đặc hiệu: dsDNA phát hiện đặc hiệu, có khả năng chịu đựng tuyệt vời đối với một số chất ô nhiễm thông thường;
Tốc độ liên kết thuốc nhuộm nhanh: có thể đạt độ bão hòa trong vòng 2 phút, do đó không cần phải chờ đọc nhanh kết quả định lượng chính xác;
Độ ổn định cao: Tín hiệu huỳnh quang kéo dài trong 3 giờ và độ chính xác định lượng không bị ảnh hưởng sau 20 ngày ở nhiệt độ phòng.
Hình 1. Kiểm tra độ ổn định của sản phẩm. Kết quả cho thấy nó vẫn ổn định sau khi bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 2 tuần (độ lệch giữa giá trị đo được và giá trị lý thuyết là <10%)
Lưu ý: Hai nồng độ dsDNA đã được chọn và Thermo#Q33230 được lưu trữ ở 4℃,
Hình 2. Kiểm tra độ ổn định của sản phẩm. Độ ổn định cao, kết quả kiểm tra có tính liên quan cao trong thời hạn hiệu lực
3. Làm thế nào để chọn Qubit cho các mẫu khác nhau?
Qubit, định lượng nhanh! Sử dụng Qubit để định lượng thư viện có nhiều ưu điểm. Quá trình phát hiện của nó nhanh và hiệu quả.Kết quả giải trình tự có thể thu được trong vòng vài giây cho một mẫu duy nhất và nồng độ có thể được đưa ra trực tiếp, rất trực quan. Đồng thời, nó cũng có thể tương thích với hầu hết các thiết bị nhãn enzyme để định lượng mẫu theo lô, đây là lựa chọn đầu tiên cho định lượng thư viện thông thường và định lượng dsDNA.
| Tên sản phẩm | Số danh mục | Kích cỡ | Ứng dụng |
| Bộ xét nghiệm 1×dsDNA HS cho Qubit | 12642ES | 100 tấn/500 tấn | định lượng dsDNA Định lượng thư viện |
| Bộ xét nghiệm HS dsDNA cho Qubit | 12640ES | 100 tấn/500 tấn | |
| Bộ xét nghiệm ssDNA | 12645ES | 100 tấn/500 tấn | định lượng ssDNA Định lượng thư viện |