Định lượng axit nucleic, là một trong những thí nghiệm cơ bản nhất trong sinh học phân tử, ảnh hưởng trực tiếp đến kết quả của các thí nghiệm hạ nguồn. Độ chính xác của định lượng axit nucleic là rất quan trọng. Hiện nay, có hai phương pháp chính để định lượng thư viện NGS, phương pháp hấp thụ tia cực tím và phương pháp nhuộm huỳnh quang.

Phương pháp hấp thụ tia cực tím sử dụng máy quang phổ để đo độ hấp thụ ở 260 nm đối với DNA và RNA để định lượng. Phương pháp này cũng ước tính độ tinh khiết của axit nucleic bằng cách tính tỷ lệ OD260/OD280. Tuy nhiên, các giá trị được phát hiện rất dễ bị nhiễu từ các chất gây ô nhiễm khác như nucleotide tự do, muối và hợp chất hữu cơ.

Định lượng huỳnh quang Qubit sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang liên kết đặc hiệu với DNA sợi đôi, DNA sợi đơn, RNA hoặc protein. Khi được kích thích bởi nguồn sáng có bước sóng cụ thể, thuốc nhuộm phát ra huỳnh quang, không bị ảnh hưởng bởi các phân tử tạp chất khác có thể có trong mẫu. Cường độ huỳnh quang tỷ lệ thuận với nồng độ của các phân tử mục tiêu trong mẫu.

Bảng 1. So sánh các phương pháp định lượng axit nucleic chính thống

Mục tiêu	UV Abs (Nanodrop)	Qubit DNA HS	Qubit DNA BR	RNA Qubit	Qubit ssDNA
Loại axit nucleic	ADN, ARN	dsDNA	dsDNA	ARN	ssDNA, oligo
Nồng độ mẫu (ng/μL)	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 ng/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
Lợi thế	Giới hạn định lượng cao hơn	Độ đặc hiệu tốt	Phạm vi định lượng rộng	Có tính chọn lọc cao đối với RNA	Được dung nạp tốt
Hạn chế	Độ đặc hiệu kém	Tránh ánh sáng trong quá trình sử dụng	Tránh ánh sáng trong quá trình sử dụng	Tránh ánh sáng trong quá trình sử dụng	Độ đặc hiệu kém và cũng liên kết với dsDNA

Độ hấp thụ UV và định lượng huỳnh quang Qubit đều có ưu điểm riêng và có thể bổ sung cho nhau. Đối với định lượng sơ bộ các mẫu axit nucleic thông thường để xác định nồng độ, độ tinh khiết và sự hiện diện của chất gây ô nhiễm, có thể chọn phương pháp định lượng độ hấp thụ. Định lượng Qubit phù hợp hơn với các mẫu quý có nồng độ thấp hoặc định lượng chính xác cần thiết cho các thí nghiệm tiếp theo, chẳng hạn như giải trình tự thế hệ tiếp theo và PCR định lượng thời gian thực.

Yeasen đã ra mắt một số sản phẩm định lượng Qubit: Bộ xét nghiệm HS dsDNA cho Qubit^® (Cat#12640), Sẵn sàng sử dụng: 1× Bộ xét nghiệm HS dsDNA cho Qubit^® (Cat#12642), Bộ xét nghiệm ssDNA cho Qubit^® (Cat#12645) và Bộ xét nghiệm dsDNA BR (Cat#12643), đã nhận được nhiều lời khen ngợi kể từ khi ra mắt.

Giải pháp 1 Định lượng độ nhạy cao dsDNA HS

Hỗn hợp định lượng dsDNA đã sẵn sàng sử dụng—Bộ xét nghiệm HS dsDNA 1× cho Qubit^®

^{Vận hành dễ dàng: Đã trộn sẵn, không cần trộn trước;}

^{Độ nhạy cao: Nồng độ có thể phát hiện thấp tới 50 pg/μL;}

^{Độ ổn định tốt: Tín hiệu huỳnh quang kéo dài trong 3 giờ, bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 20 ngày không ảnh hưởng đến độ chính xác của phép định lượng;}

^{A. Độ ổn định tuyệt vời: Bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 2 tuần vẫn duy trì được độ ổn định (giá trị đo được chênh lệch so với giá trị lý thuyết dưới 10%).}

Bảng 2. Kiểm tra độ ổn định của các mẫu khác nhau ở 4°C và nhiệt độ phòng so với các đối thủ cạnh tranh

Thuốc thử định lượng	Xác định sự tập trung của λDNA（ng/μL）
	0ngày		1 ngày		3 chiều	7ngày			10 ngày		14 ngày
T* 4℃	0,51		0,496		0,524	0,534			0,495		0,499
Yeasen 4℃	0,51		0,508		0,513	0,475			0,48		0,495
Yeasen nhiệt độ phòng kho	0,51		0,517		0,506	0,486			0,506		0,523
Thuốc thử định lượng	Xác định sự tập trung của gDNA bê (ng/μL)
	0ngày	1 ngày		3 chiều			7ngày	10 ngày		14 ngày
T* 4℃	55,3	53,5		55,40			57,9	55,8		58
Yeasen 4℃	59,4	55,4		57,8			56,1	56,3		59,8
Yeasen nhiệt độ phòng kho	59	55,7		61,3			58	58,7		56,1

B. Độ nhạy cao, độ ổn định từng lô tốt

Bảng 3.Kiểm tra độ ổn định của các lô khác nhau

Bbắt	Vật mẫu	L*			Yeasen			lỗi
		nồng độ1（ng/μL）	nồng độ2（ng/μL）	TRUNG BÌNH（ng/μL）	nồng độ1（ng/μL）	nồng độ2（ng/μL）	TRUNG BÌNH（ng/μL）
D9801060	ADN	0,3160	0,3250	0,3205	0,320	0,320	0,320	0,16%
D8801050		0,3310	0,3320	0,3315	0,319	0,306	0,3125	5,73%
D7813110		0,345	0,358	0,352	0,334	0,329	0,332	-6,03%

Giải pháp 2 dsDNA BR Định lượng phạm vi rộng

Định lượng dsDNA phạm vi rộng—Bộ xét nghiệm dsDNA BR

Độ nhạy cao: Nồng độ có thể phát hiện thấp tới 50 pg/μL;

Độ tuyến tính tuyệt vời: Độ tuyến tính tốt trong khoảng 2-1000 ng;

Khả năng chịu đựng tốt với các chất gây ô nhiễm: Có thể chịu được các chất gây ô nhiễm thông thường.

Bảng 4. Độ ổn định và khả năng chịu đựng các chất gây ô nhiễm so với các đối thủ cạnh tranh

Yeasen BR						T* BR
tiêu chuẩn	RFU1	RFU2	TRUNG BÌNH	lỗi		tiêu chuẩn	RFU1	RFU2	TRUNG BÌNH	lỗi
S1	159,63	160,71	160,17	1%		S1	216,17	211,56	213.865	-2%
S2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		S2	20532,46	20452.26	20492.36	0%
đo lường						đo lường
Chất gây ô nhiễm	Nồng độ trong mẫu 10 μL	nồng độ1	nồng độ2	TRUNG BÌNH	Để được kiểm tra/kiểm soát	Chất gây ô nhiễm	Nồng độ trong mẫu 10 μL	nồng độ1	nồng độ2	TRUNG BÌNH	Để được kiểm tra/kiểm soát
Kiểm soát (H2Ồ)	/	49	48,6	48,8	0,0%	Kiểm soát (H2Ồ)	/	49,8	48	48,9	0,0%
BSA	1mg/mL	51,8	52	51,9	6,4%	BSA	1mg/mL	54	51,2	52,6	7,6%
Etanol	20%	44,6	44	44,3	-9,2%	Etanol	20%	44,8	43,4	44,1	-9,8%
clorofom	4,00%	49.0	49,8	49,4	1,2%	clorofom	4,00%	50.0	47	48,5	-0,8%
SDS	0,2%	46,6	45,8	46,2	-5,3%	SDS	0,2%	53,2	51,6	52,4	7,2%
Trition-X100	0,20%	41,6	40,6	41,1	-15,8%	Trition-X100	0.20%	53	51	52.0	6,3%
dNTP	2mM	44,2	45	44,6	-8,6%	dNTP	2mM	47,8	46,4	47,1	-3,7%

Giải pháp 3 Định lượng ssDNA

Lựa chọn lý tưởng cho việc định lượng ssDNA—Bộ xét nghiệm ssDNA hiệu suất cao chi phí thấp cho Qubit^®

^{Độ nhạy cao: Nồng độ có thể phát hiện thấp tới 50 pg/μL;
Độ tuyến tính tuyệt vời: Độ tuyến tính tốt trong khoảng 0-200 ng;
Tín hiệu ổn định: Thuốc nhuộm tuyệt vời kết hợp với Bộ đệm được tối ưu hóa nâng cấp, có thể duy trì cường độ huỳnh quang ổn định ở nhiệt độ phòng và có khả năng ứng dụng cao ngay cả trong các môi trường ô nhiễm thông thường như muối, nucleotide tự do, dung môi, chất tẩy rửa hoặc protein, đảm bảo định lượng chính xác;
Độ ổn định tốt: Không có thay đổi đáng kể về hiệu suất sau 6 tháng xử lý ở nhiệt độ 4°C hoặc 25°C;
Phạm vi ứng dụng rộng: Quy trình vận hành đơn giản, cho phép định lượng nhanh các oligonucleotide, mồi, DNA biến tính, DNA vòng sợi đơn, v.v.}

A. Độ lặp lại tốt: Định lượng trong các thiết bị Qubit khác nhau, các loại mẫu khác nhau bằng cách sử dụng Yeasen nhiều lô Cat#12645 đã được thử nghiệm. Trong phạm vi 0-200ng, khả năng lặp lại tốt trong các phép đo từ các thiết bị Qubit khác nhau.