Tinh chế protein là một kỹ thuật cơ bản trong sinh hóa học và sinh học phân tử, được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu, chẩn đoán và ứng dụng điều trị. Để nghiên cứu một loại protein cụ thể, bước đầu tiên là phân lập và tinh chế nó từ các mẫu sinh học. Tuy nhiên, đạt được protein có độ tinh khiết cao có thể là một thách thức, do tính đa dạng của protein và sự phức tạp của các hệ thống sinh học. Hiểu được các nguyên tắc cốt lõi của tinh chế protein và lựa chọn đúng kỹ thuật cho nghiên cứu của bạn có thể cải thiện đáng kể hiệu quả và năng suất quy trình làm việc của bạn.
Những điều cơ bản về tinh chế protein
Quá trình tinh chế protein dựa trên sự khác biệt về tính chất vật lý và hóa học của protein, chẳng hạn như kích thước, điện tích, tính kỵ nước và ái lực đối với các phối tử cụ thể. Bằng cách khai thác những khác biệt này, các nhà nghiên cứu có thể tách protein mục tiêu khỏi các thành phần sinh học khác một cách hiệu quả, giảm thiểu ô nhiễm.
Sau đây là các kỹ thuật tinh chế protein chính dựa trên các cơ chế phân tách riêng biệt:
|
| Lọc Gel | Trao đổi ion | Tương tác kỵ nước | Sự liên quan |
| Cơ chế tách | Kích cỡ | Điện tích bề mặt protein | Tính kỵ nước | Sự tương thích cụ thể |
| Tính chọn lọc | Trung bình | Cao | Cao-Trung bình | Rất cao |
| Sức chịu tải | Thấp | Cao | Cao | Cao |
| Tốc độ thanh lọc | Trung bình-Thấp | Cao | Cao | Cao |
| Khả năng tương thích sinh học | Rất tốt | Tốt | Trung bình-Tốt | Tốt |
| Năng suất protein mục tiêu | Cao | Cao | Trung bình-Cao | Cao |
Mỗi kỹ thuật này có thể được tối ưu hóa bằng cách chọn vật liệu và cột thích hợp. Phương pháp lý tưởng phụ thuộc vào đặc điểm của protein và mức độ tinh khiết cần thiết cho các ứng dụng hạ lưu.
Tối ưu hóa quy trình tinh chế protein của bạn với Ylàm dịu đi Sản phẩm sinh học
Tại
Thẻ protein thanh lọc của anh ấy (Mã số mèo #20502ES):
Trong biểu hiện protein tái tổ hợp, Thẻ của anh ấy (thường là 6×His) được sử dụng rộng rãi do kích thước nhỏ, khả năng sinh miễn dịch thấp và tác động tối thiểu đến chức năng protein. Các protein thẻ của ông có thể được tinh chế hiệu quả bằng nhựa ái lực được tạo phức với các ion niken, chẳng hạn như nhựa Ni-NTA. Nhựa Agarose HisSep Ni-NTA (Cat#20502ES) được cung cấp bởi Ylàm dịu đi Sinh vật học sử dụng gel agarose liên kết chéo cao làm ma trận, kết hợp với phối tử axit nitơ-triacetic (NTA) phối hợp bốn để tạo thành chelate ion niken ổn định. Cấu trúc kết hợp đảm bảo hiệu suất liên kết protein và giải hấp hiệu quả.
Thanh lọc ái lực kháng thể nhãn
Sự tinh chế ái lực của kháng thể gắn thẻ sử dụng liên kết đặc hiệu cao giữa kháng thể và thẻ đặc hiệu của nó để đạt được sự tinh chế protein hợp nhất. Các thẻ phổ biến bao gồm Cờ, HA, Myc, v.v. Bằng cách sử dụng môi trường có ái lực kháng thể tương ứng, protein quan tâm có thể được phân lập hiệu quả từ các mẫu phức tạp.
- Tương thích chống cờ Gel (Mã số mèo #20584ES):
Được chuẩn bị từ kháng thể đơn dòng IgG2b chuột chất lượng cao với 4% gel agarose liên kết chéo cao quaugh cung cấp khớp nối, nó có khả năng tải protein hợp nhất Flag-tag cao, sucó thể dùng để kết tủa miễn dịch và tinh chế protein Flag-tag.Yeasen .com
- Gel chống HA(Mèo#20586Tiếng Việt):
Được điều chế từ kháng thể đơn dòng IgG1 ở chuột chất lượng cao và gel Sepharose 4B thông qua phương pháp ghép nối cung cấp, sản phẩm có khả năng tải protein gắn thẻ HA cao, thích hợp cho quá trình kết tủa miễn dịch và tinh chế protein gắn thẻ HA.Yeasen .cùng với
- Gel chống Myc Affinity（Mèo#20587Tiếng Việt):
Kháng thể đơn dòng IgG1 ở chuột chất lượng cao được ghép nối với gel Sepharose 4B, được thiết kế để tinh chế các protein gắn thẻ Myc, có độ đặc hiệu cao và khả năng liên kết cao.
- Hạt từ tính miễn dịch chống cờ（Mã số mèo #20565ES):
Hạt miễn dịch từ tính này được ghép nối với các vi cầu agarose từ tính bằng kháng thể đơn dòng IgG2b có nguồn gốc từ chuột chất lượng cao, có thể nhanh chóng tinh chế các protein gắn cờ dưới tác động của từ trường và phù hợp để tinh chế các mẫu có kích thước nhỏ.
Làm sạch ái lực kháng thể (Cat#36401ES):
Làm sạch ái lực kháng thể là phương pháp sử dụng liên kết đặc hiệu của kháng thể với kháng nguyên của nó để tinh chế protein. Nhựa tinh chế protein A tái tổ hợp kháng kiềm (Cat#36401ES) thường được sử dụng làm môi trường tinh chế ái lực kháng thể và được sử dụng rộng rãi để tinh chế và làm giàu kháng thể.
Proteinase
Trong các nghiên cứu về protein, protease được sử dụng để cắt các thẻ hợp nhất, khôi phục trạng thái tự nhiên của protein mục tiêu. Việc kết hợp các protease này vào quy trình tinh chế protein của bạn có thể nâng cao chất lượng và chức năng của protein mục tiêu, tạo điều kiện cho các dự án nghiên cứu và phát triển tiên tiến.
- Enterokinase tái tổ hợp (Cat#20401ES):
Enterokinase, còn được gọi là enteropeptidase, là một loại protease serine có chức năng cắt đặc hiệu sau trình tự axit amin DDDDK.
- tôiPNGase F (Mã số: 20407ES):
PNGase F là một amidase có chức năng cắt đặc hiệu giữa các gốc GlcNAc và Asn trong cùng của glycoprotein liên kết N.
- Trypsin tái tổ hợp (MS-SAFE) (Cat#20416ES):
Trypsin là một loại protease serine có tác dụng cắt liên kết peptide ở phía carboxyl của các gốc lysine và arginine.
| Thanh lọc Phương pháp | Loại thuốc thử | Loại sản phẩm | Sản phẩm được đề xuất |
| Lọc Gel | Dextran Gel Sắc ký | Chất độn khử muối Khử muối các cột đóng gói sẵn Cột trọng lực khử muối Cột quay
| Cột khử muối G25 M（Mã số mèo #20590ES) Cột tách muối quay, 0,5 mL （Mã số mèo #20599ES) Cột khử muối bằng trọng lực, 8.3mL (Mã số mèo #20741ES) |
| Agarose Gel Sắc ký | Chất độn Cột đóng gói sẵn | Geldex 200 PG Sắc ký gel agarose độ phân giải cao (10-600 kDa) (Mã số # 20598ES) Cột sắc ký Geldex 200 PG （Mã số mèo #20593ES) | |
| Trao đổi ion | Trao đổi anion Sắc ký | Chất độn Cột đóng gói sẵn | Q Agarose HP (Q Strong Anion Exchange Chromatography Packing HP) (Mã số: 20460ES) Cột trao đổi anion mạnh Q HP đóng gói sẵn, 5 mL (Mã số: 20462ES) |
| Sắc ký trao đổi cation | SP Agarose HP (SP Strong Cation Exchange Chromatography Packing HP) (Cat#20463ES) Cột trao đổi cation mạnh SP HP được đóng gói sẵn, 5 mL (Mã số # 20465ES) | ||
| Sắc ký tương tác kỵ nước | Yếu kỵ nước Sắc ký | Chất độn Cột đóng gói sẵn | Môi trường sắc ký kỵ nước yếu Butyl độ phân giải cao (Cat#20484ES) Cột sắc ký kỵ nước yếu Butyl HP được nạp sẵn, 5 mL (Mã số # 20485ES) |
| Kỵ nước mạnh Sắc ký | Môi trường sắc ký kỵ nước mạnh Phenyl độ phân giải cao (Mã số # 20486ES) Cột sắc ký kỵ nước mạnh Phenyl HP được nạp sẵn, 5 mL (Mã số # 20487ES) | ||
| Thanh lọc ái lực | Thẻ His Tinh chế protein | Nhựa Cột đóng gói sẵn Hạt từ tính thanh lọc
| Nhựa tinh chế protein agarose his-tag (Mã số: 20502ES) Cột nạp sẵn protein thanh lọc His-tag, 5 mL (Mã số #20504ES) Hạt từ tính thanh lọc protein His-tag (Mã số: 20561ES) |
| Thuế hàng hóa và dịch vụ-nhãn Tinh chế protein | Nhựa Cột đóng gói sẵn Hạt từ tính thanh lọc
| Nhựa Agarose Glutathione (để tinh chế protein gắn nhãn GST) (Mã số # 20507ES) Cột nạp sẵn tinh chế protein gắn thẻ GST, 5 mL (Mã số # 20510ES) Hạt từ tính thanh lọc protein gắn nhãn GST (Mã số: 20562ES) | |
| MBP-nhãn Tinh chế protein | Nhựa Cột đóng gói sẵn
| Nhựa tinh chế liên kết chéo cao gắn thẻ MBP (Mã số: 20515ES) Cột nạp sẵn thanh lọc protein gắn thẻ MBP, 5mL (Mã số # 20517ES) | |
| Liên cầu khuẩn(Ⅱ) Nhãn Tinh chế protein | Nhựa Cột đóng gói sẵn
| Nhựa thanh lọc protein agarose gắn nhãn Strep(II) (Mã số: 20495ES) | |
| Sinh vật-nhãn Tinh chế protein | Nhựa Cột đóng gói sẵn Hạt từ tính miễn dịch | Nhựa thanh lọc Streptavidin Agarose (Mã số: 20512ES) Cột nạp sẵn tinh chế phân tử Biotin, 5 mL (Mã số # 20514ES) Hạt từ tính miễn dịch Streptavidin (SAV) (Mã số: 47503ES) | |
| Thẻ kháng thể ái lực tinh chế | Gel Hạt từ tính miễn dịch | Gel thanh lọc Anti-Flag Affinity (Mã số: 20584ES) Gel thanh lọc Anti-HA Affinity (Mã số: 20586ES) Gel thanh lọc Anti-Myc Affinity (Mã số: 20587ES) Hạt từ tính miễn dịch chống cờ (Mã số: 20565ES) | |
| Tinh chế ái lực kháng thể | Nhựa Cột đóng gói sẵn Hạt từ tính miễn dịch | Nhựa tinh chế protein A agarose tái tổ hợp (Mã số: 36401ES) Nhựa tinh chế protein G Agarose (Mã số: 36405ES) Nhựa tinh chế protein A/G Agarose (Mã số: 36403ES) Hạt từ tính miễn dịch Protein A/G (Mã số: 36417ES) | |
| Sự tinh chế ái lực kháng thể khác | Nhựa Cột đóng gói sẵn
| Nhựa tinh chế loại bỏ nội độc tố hiệu quả cao (Mã số: 20518ES) Môi trường tinh chế ái lực Heparin (Mã số # 20493ES) | |
| Sản phẩm của công ty | Protease | Enzym cắt nhãn Glycosidaza Enzym cấp độ khối phổ | E.coli biểu hiện Enterokinase tái tổ hợp (không có nhãn) (Mã số: 20401ES) Thrombin ở bò (Khả năng sống cao, >2000 IU/mg) (Mã số: 20402ES) Protease rTEV Protease virus khắc thuốc lá tái tổ hợp (Cat#20403ES) PNGase F, N-Glycosidase F (100000 U/mL) (Mã số: 20407ES) Trypsin tái tổ hợp (MS-SAFE) Trypsin tái tổ hợp (Cấp độ khối phổ) (Mã số: 20416ES) |
| Vật tư tiêu hao sắc ký | Cột rỗng dòng chảy trọng lực loại Cột trống Cột YXK Túi thẩm phân | Cột rỗng sắc ký trọng lực 12 mL (Cat#20523ES) Cột rỗng loại C 5 mL (kết nối với Akata, ống tiêm hoặc bơm nhu động) (Mã số # 20526ES) Cột rỗng sắc ký YXK16/70 (Cat#20443ES) Túi thẩm phân 27mm (MWCO 50 kDa) (Mã số # 20534ES) |
Kết luận: Điều chỉnh quy trình làm việc theo nhu cầu của bạn
Tối ưu hóa quy trình tinh chế protein của bạn là rất quan trọng để đạt được protein có độ tinh khiết cao, năng suất cao cho nghiên cứu hoặc ứng dụng của bạn. Bằng cách hiểu các nguyên tắc tinh chế và lựa chọn đúng công cụ, bạn có thể hợp lý hóa quy trình của mình và tránh những sai lầm thường gặp.
Để tìm hiểu thêm về cách sản phẩm của chúng tôi có thể tăng cường quá trình thanh lọc protein của bạn, hãy truy cập trang sản phẩm hoặc liên hệ với nhóm của chúng tôi để được tư vấn.
Để biết thêm thông tin hoặc mua hàng, hãy truy cập chính thức chúng tôibđịa điểm.