Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit là bộ hạt từ tính chuyên dụng cho tinh chế mRNA. Các hạt thu giữ mRNA là các vi cầu thuận từ có kích thước micromet được ghép nối với đuôi Oligo dT (poly A), có thể được sử dụng để cô lập mRNA từ 10 ng đến 4 μg RNA hoàn chỉnh bằng cách liên kết với mRNA bằng đuôi poly A.

Thông số kỹ thuật

Thành phần

Kho

Sản phẩm nên được bảo quản ở nhiệt độ 2 ~ 8℃ trong một năm và tránh đông lạnh.

Hướng dẫn

1. Không bao gồm vật liệu bắt buộc

Giá từ, ống PCR không có Nuclease

2. Hoạt động

1) Cân bằng các hạt bắt mRNA ở nhiệt độ phòng (~ 30 phút).

2) Pha loãng 10 ng – 4 μg tổng RNA thành 50 μL bằng nước không có Nuclease trong ống PCR không có Nuclease, đặt ống vào đá.

3) Trộn các hạt từ tính bằng cách đảo ngược hoặc xoáy. Thêm 50 μL hạt từ tính vào 50 μL mẫu RNA tổng số và hút 6 lần để trộn đều. Quay nhanh xuống đáy ống.

4) Ủ hỗn hợp hạt từ tính và RNA trong máy luân nhiệt và chạy chương trình sau: 65°C, 5 phút; 25°C, 5 phút; 25°C, giữ.

5) Đặt ống trên một nam châm giá đỡ trong 5 phút để tách mRNA khỏi tổng RNA. Cẩn thận loại bỏ phần dịch nổi.

6) Tháo ống ra khỏi nam châm giá đỡ và tái huyền phù các hạt từ tính với 200 μL đệm rửa hạt. Hút toàn bộ thể tích lên xuống 6 lần để trộn đều. Đặt ống trên một máy từ tính giá đỡ trong 5 phút và cẩn thận loại bỏ phần dịch nổi.

7) Lặp lại bước 6.

8) Tháo ống ra khỏi nam châm giá đỡ. Thêm 50 μL đệm Tris để tái huyền phù các hạt từ tính và dùng pipet 6 lần để trộn đều.

9) Đặt mẫu vào máy chu trình nhiệt và chạy chương trình sau để rửa giải mRNA: 80°C, 2 phút; 25°C, giữ.

10) Lấy mẫu ra khỏi máy luân nhiệt. Thêm 50μL đệm liên kết hạt và hút liên tục 6 lần để trộn đều.

11) Ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để mRNA liên kết với các hạt từ tính.

12) Đặt ống trên nam châm để trong 5 phút và cẩn thận loại bỏ phần nước trong.

[Lưu ý]: Cần dùng pipet 10 μL để hút phần chất lỏng còn lại.

13) Tháo ống ra khỏi nam châm giá đỡ, tái huyền phù các hạt từ tính với 200 μL đệm rửa hạt, hút liên tục 6 lần để trộn đều. Đặt ống trên máy từ tính giá đỡ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút. Lấy ra và loại bỏ toàn bộ phần nước trong.

14) mRNA giải phóng cuối cùng

Sơ đồ A: Đối với phản ứng phiên mã dự trữ

Tháo ống ra từ từ tính giá đỡ. Thêm 12μL nước không có Nuclease và dùng pipet liên tục 6 lần để trộn đều. Đặt ống vào máy luân nhiệt và chạy chương trình sau: 80°C, 2 phút. Sau đó đặt ống vào nam châm giá đỡ ngay lập tức, để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút. Sau khi dung dịch được làm trong, hãy cẩn thận hút 10 μL dịch trong vào một ống PCR không có Nuclease mới khác.

Sơ đồ B: Đối với RNA chuẩn bị thư viện

Bộ 12603 được sử dụng cùng với Bộ 12308. Vui lòng tham khảo sản phẩm:

Bộ chuẩn bị thư viện mRNA chế độ kép Hieff NGS™ Ultima -12308ES

Thêm thể tích đệm Frag/Primer thích hợp theo hướng dẫn của bộ dụng cụ liên quan để xây dựng thư viện.

Ghi chú

1. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần khi thực hiện thí nghiệm.
2. Chỉ sử dụng cho mục đích nghiên cứu.
3. Hãy đảm bảo làm ấm mẫu đến nhiệt độ phòng và trộn đều trước khi sử dụng hạt từ tính, nếu không hiệu quả thu hồi mẫu có thể bị ảnh hưởng.
4. Hoạt động này phải tuyệt đối không được nhiễm RNase và axit nucleic.
5. Khi sử dụng sản phẩm này với các thuốc thử khác, vui lòng làm theo hướng dẫn thí nghiệm cụ thể để vận hành.
6. Để có kết quả tinh sạch tốt, bạn cần có tổng RNA toàn vẹn và đảm bảo giá trị RIN >7,0.