RNase HII 又称 RNase H2，是一种内切核糖核酸酶，专门针对并切断双链 DNA 螺旋内单个核糖核苷酸 5' 端的磷酸二酯键，产生 5' 磷酸和 3' 羟基（图 1）。该酶对单链 RNA 的切割活性极小，对双链 DNA (dsDNA) 和单链 DNA (ssDNA) 均无活性。RNase HII 在 50°C 至 75°C 的温度范围内保持功能活性，在 70°C 至 75°C 之间的温度下达到峰值性能。 RNase HII 具有独特的能力，可以在核苷酸整合的 DNA 位点进行靶向单点切割，而不会影响 dsDNA 或 ssDNA，可作为反应启动（包括引物激活和延伸）的精确“触发器”，以实现特异性扩增。该酶在 RNase H 依赖性 PCR (rhPCR)、环介导等温扩增 (LAMP) 技术和冈崎片段中 RNA 成分的降解中起着关键作用。

一、RNase H依赖性PCR（重组人PCR）
rhPCR 将 RNase HII 和专门设计的封闭式可裂解 rhPCR 引物整合到 PCR 过程中。这种方法利用 RNase HII 的独特性质，选择性地水解 DNA-RNA 杂交体中的 RNA，同时保持单链或双链 DNA 和 RNA 中的磷酸二酯键完好无损。因此，RNase HII 仅消化 DNA-RNA 杂交体，并在引物与目标 DNA 序列完全互补时允许引物延伸。这种有针对性的作用显著提高了反应的准确性。RNase HII 是唯一一种能够通过在核糖核酸的 5' 端进行切割来启动精确去除核糖核苷酸而不会引起突变的酶。由于其高特异性、灵敏度和可重复性，rhPCR 在单核苷酸多态性 (SNP) 检测、基因分型、同时检测多个目标和环境核酸分析等应用中具有独特的优势。

技术路线

1. 引物设计

引物设计必须保证切割后的解链温度高于退火温度，以保证引物在PCR循环过程中稳定地与模板结合。rhPCR引物由三部分组成：

1）5'DNA片段：长度和解链温度（Tm）要求与标准PCR引物相当，经RNase HII酶切割后能有效与模板DNA配对并从模板DNA上延伸。

2）单个RNA碱基：为RNase HII提供切割位点。

3）3' DNA片段：长度为4或5个碱基的片段，带有阻断剂，通常是一种较短的、不可延伸的分子，如丙二醇，它可以阻止DNA聚合酶的延伸，直到阻断剂被去除。

2.切割和延伸

rhPCR反应开始时，引物与模板DNA处于游离状态，当引物与特定的RNA:DNA异源双链模板结合时，被阻断的引物的RNA碱基5’端被RNase HII酶识别并切割，留下带有3’-羟基的DNA寡核苷酸，为DNA聚合酶延伸提供起点，之后进行常规PCR扩增过程。

图2. rhPCR原理图 ^[1]

二.环介导等温扩增（LAMP）

环介导等温扩增（LAMP）是一种简便快速的基因扩增方法，可在短时间内等温条件下扩增核酸。但由于室温制备过程中DNA聚合酶活性的启动，会形成非特异性错配，从而导致少量错配和引物二聚体，造成微小污染，可能导致假阳性。
将RNase HII应用到LAMP扩增体系中，可以有效解决LAMP技术中的假阳性问题，拓展其在临床诊断中的应用。如图3所示，采用RNase HII的引物激活LAMP方法（PA-LAMP），当引物与目标ssDNA配对时，RNase HII酶特异性地切割引物上的RNA，使其活化并允许引物延伸，实现特异性扩增，有效降低系统中的假阳性。

Yeasen 核糖核酸酶Ⅱ

Yeasen核糖核酸酶 HII （猫号#14539） 源自 深渊火球藻，且不含污染性核酸酶、切口酶及RNase残留物，宿主DNA污染低，有效降低系统中的假阳性。 Yeasen的RNase HII具有极强的耐热性，在95°C下30分钟后仍能保持活性，与各种rhPCR反应体系兼容，也适用于LAMP等应用。

1.大肠杆菌 基因组 DNA 残留量 < 0.5 拷贝/100 U

检测 大肠杆菌 不同批次RNase HII中基因组DNA残基的比较结果表明，宿主基因组DNA残基 Yeasen的 RNase HII 远低于 0.5 拷贝/100 U。

图 4. 检测 大肠杆菌 基因组 DNA 残基

2. 95℃耐热试验

将RNase HII在95℃加热0至45分钟后，检测RNase HII的酶活性。结果表明，在 Yeasen即使加热 45 分钟后，RNase HII 也不会受到影响。

图5. 95℃耐热试验

3. 无外切酶、切口酶或 RNase 残留物（1 U 剂量）

将1U不同批次的RNase HII与各自的底物DNA/RNA在37°C下孵育4小时，琼脂糖凝胶电泳结果表明RNase HII中无外切酶、切口酶及RNase残留。

图 6.外切酶、切口酶、RNase残留检测结果

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产品应用	产品名称	目录编号
重组人PCR、LAMP	RNase HII(2 U/μL) RNase HII，无甘油（2 U/μL）	14539ES 14541ES
重组人PCR	Hieff® Taq DNA 聚合酶	10101ES
RT-LAMP	希夫 Bst Plus DNA 聚合酶（40 U/μL）	14402ES
	Hifair® Ⅲ逆转录酶	11111ES

参考

[1] Dobosy JR、Rose SD、Beltz KR、Rupp SM、Powers KM、Behlke MA、Walder JA。RNase H 依赖性 PCR (rhPCR)：使用阻断可裂解引物提高特异性和单核苷酸多态性检测。BMC Biotechnol。2011 年 8 月 10 日；11:80。doi：10.1186/1472-6750-11-80。

[2] 杜伟锋, 葛建华, 李建军, 等.引物激活环介导等温扩增(PA-LAMP)技术单步高特异性检测单核苷酸突变[J].分析化学学报, 2019(1050-):1050.DOI:10.1016/j.aca.2018.10.068.