UCF.ME™ UltraNuclease,又称为全能核酸酶、广谱核酸酶和非限制性抑制性内切酶,源自粘质沙雷氏菌,但随后由
1. 什么是全能核酸酶?
2.全能核酸酶的使用场景有哪些?
3.全能核酸酶需要具备什么优势?
4. 常见问题
5.相关产品
1. 什么是全能核酸酶?
全能核酸酶是经过基因改造的内切核酸酶,能够降解多种核酸形式,包括单链、双链、线性、天然和变性核酸。它们产生长度从 3 到 5 个碱基的 5'-单磷酸寡核苷酸,并且没有特定的碱基识别。这些多功能核酸酶在各种条件下表现出强大的稳定性和消化活性,使其能够高效地消除样品或产品中的核酸残留物。这提高了样品的纯度和产品的生物有效性,使全能核酸酶成为科学研究、疫苗和蛋白质和多糖药物等行业的首选酶制剂。
此外,全能核酸酶在疫苗、抗体、细胞治疗和其他生物制品制备过程中的核酸去除中起着至关重要的作用,确保符合 FDA 规定,即用于治疗的最终产品中残留的核酸不得超过 10 pg/剂。通过降解核酸,全能核酸酶可降低细胞裂解物的粘度,促进病毒、AAV 载体和包涵体等细胞衍生颗粒纯化过程中的溶液过滤/超滤过程。这简化了处理过程,改善了离心,提高了沉淀和上清液的分离效率,并提高了色谱纯化的有效性,最终提高了产量和产品纯度。
2.全能核酸酶的使用场景有哪些?
UltraNuclease的应用范围很广,下面介绍具体的使用场景。
2.1病毒纯化(慢病毒、AAV、重组腺病毒疫苗、灭活病毒、溶瘤病毒等)
病毒在生物医学领域的应用正在显著扩大,涉及疫苗、细胞治疗、基因治疗和其他各个领域。负责病毒产生的宿主细胞主要是连续传代细胞 (CCL)。CCL 表现出不受控制的生长的遗传倾向,使其能够无限增殖。然而,CCL 中残留的 DNA 可能带来潜在风险,例如不受控制的人类细胞增殖导致肿瘤形成。此外,这些残留的 DNA 片段可能含有传染性病毒基因组,这引发了人们对感染风险和肿瘤发生的担忧。因此,严格的控制措施对于管理生物产品中的残留 DNA 以确保其安全至关重要。在这方面,我们的 UCF。ME™ UltraNuclease 为病毒纯化提供了安全的解决方案。
盐在减轻蛋白质或病毒聚集方面起着关键作用,有助于 DNA 和 RNA 与蛋白质和其他细胞成分分离。盐活性超核酸酶是一种非特异性内切酶,在高盐浓度下表现出最佳活性。在高盐条件下,酶可以更好地接触释放的 DNA 和 RNA,从而增强其降解。在高盐环境中活性增强的核酸酶在增强纯化过程方面被证明更有效。盐活性超核酸酶可用于降低细胞上清液和裂解液的粘度,从而提高高盐条件下的纯化效率。这种酶还将宿主核酸残基降低到皮克级,从而提高各种生物产品应用的性能和安全性,包括病毒纯化、疫苗制造以及蛋白质和多糖药物的生产。
2.2 大肠杆菌表达重组蛋白的纯化
大肠杆菌中表达的某些蛋白质倾向于聚集成包涵体,这使纯化过程变得复杂,因为它们经常与宿主 DNA 缠绕在一起。由此产生的破裂的细菌细胞会表现出高粘度,从而大大降低蛋白质纯化效率。但是,通过在超声波破碎过程中将 10-50 U/mL 的 UCF.ME™UltraNuclease 引入细菌溶液中,并在破碎完成后将样品在 37°C 下孵育 30 分钟或 4°C 下孵育过夜,可以有效降低细菌溶液中的粘度。这反过来又大大提高了纯化过程的效率。总之,您可以依靠我们的 UCF.ME™ UltraNuclease 来促进蛋白质的有效纯化。
2.3 防止细胞聚集
近年来,冻存的外周血单核细胞(PBMC)在免疫检测中的应用急剧增加。PBMC细胞最大的特点是复苏后极易凝结,容易导致细胞质量低下,检测结果不可靠。复苏时,在培养基中加入适当浓度(25-50 U/mL)的UCF.ME™UltraNuclease,与细胞共培养,可有效防止细胞凝结。因此,您可以充分利用我们的UCF.ME™UltraNuclease,增加成功率。
3.全能核酸酶需要具备什么优势?
3.1 应用范围广泛
UCF.ME™ UltraNuclease可以在多种实验条件下切割和降解各种形式的DNA和RNA,可用于去除各种生物制品中残留的核酸。
3.2 纯度高、酶活高
我们的UCF.ME™ UltraNuclease酶纯度大于等于99%(HPLC),酶活力大于等于1.5*106 U/mg(一般底物绝对定量法)。
3.3 适应性强
UCF.ME™ UltraNuclease 在储存和冻融过程中具有较高的稳定性。我们将 UCF.ME™ UltraNuclease 储存在 -20°C、4°C 和 37°C 下,以检测酶活性趋势。在 37°C 下放置 2 周,酶活性没有明显变化。同时,为了保证酶的稳定性,我们采用干冰+冰袋的组合来 运输 UCF.ME™ UltraNuclease 可满足您的各种需要。它还具有很强的耐受性,可以适应各种操作条件。
3.4 遵守药典
UCF.ME™ UltraNuclease 是在 UCF.ME (超洁净工厂.分子酶) 生产的超洁净酶。什么是超洁净酶?它是分子酶,达到无 HCD、HCR、HCP、DNASE FREE、RNASE FREE、无蛋白酶残留、无微生物残留、无病原体、无动物来源、无抗生素污染、超低内毒素残留、高酶活性、高纯度等质量标准。因此,您可以放心使用我们的产品,安全可靠。
3.5 GMP生产
UltraNuclease生产全过程在GMP生产车间完成,质量检验计划严格按照 药典 满足了从研发到生产的大规模需求。
UCF.ME™ UltraNuclease的合作伙伴——UltraNuclease ELISA试剂盒
在正常的纯化步骤中,UCF.ME™ 超核酸酶 很容易作为杂质被除去。 检测 UCF.ME™ 的残留 超核酸酶,
超核酸酶 酶联免疫吸附试验试剂盒
线性范围在0.047~3 ng/mL之间,R2大于0.99。批次间重现性良好,我们在样本中添加固定浓度的UltraNuclease,用3个不同批次的ELISA试剂盒进行检测,当核酸酶浓度在3~0.186 ng/mL之间时,检测回收率在70%~110%之间,CV小于10%,不同浓度的UltraNuclease模拟样本回收率均在70%~130%之间,优于其他品牌。特异性强,我们评估了UltraNuclease抗体与8个常见样本的非特异性结合,干扰组与对照组结果有重叠,未见干扰。
根据 UltraNuclease 的 DMF 申请,
4. 常见问题
Q1:在哪一步添加UltraNuclease?
A:这要看你处理的样品,病毒纯化时一般在病毒澄清后加入;大肠杆菌蛋白纯化时可在细胞裂解时加入;处理细胞团块时可直接加入培养基与细胞共培养。
问题2: 如果反应温度达不到37℃,如何使用?
一个: UltraNuclease的酶活力受温度、处理时间、酶活力单位影响,若温度达不到37℃可适当增加酶量,或延长孵育时间。
问题3:UltraNuclease 与蛋白酶抑制剂兼容吗?
一个: 兼容,但要注意很多蛋白酶抑制剂含有EDTA,当EDTA开始高于1mM时,EDTA会抑制一些核酸酶的活性。
问题4: 如何去除 UltraNuclease?
一个: 可以通过TFF、透析、色谱柱等方法去除。
问题5: UltraNuclease ELISA试剂盒可以用于检测其他品牌的全能核酸酶残基吗?
一个: 我们不建议这么做,本ELISA试剂盒完全基于UltraNuclease开发,可以准确定量UltraNuclease,其他品牌的Altipotent核酸酶可能在序列和生产工艺上与UltraNuclease不同,检测结果可能不准确。
5. 相关产品
提供的产品
表 1 相关产品
产品名称 | 库存单位 | 规格 |
20157ES25/60/80/90 | 25千单位/100千单位/1万个/5万个 | |
20159ES25/60/80/90 | 25千单位/100千单位/1万个/5万个 | |
36701ES59 | 96T | |
盐活性 超核酸酶 ELISA 试剂盒 | 36703ES96 | 96T |