描述
T7 RNA聚合酶以含有T7啟動子序列(5'-TAATACGACTCACTATAG*-3')的雙股DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動子下游DNA反向鏈互補的RNA。具有平端或 5' 突出端的線性雙股 DNA 均可作為 T7 RNA 聚合酶的模板底物,這意味著線性化質粒或 PCR 產物可用作體外 RNA 合成的模板。
本試劑盒以夾心酵素連結免疫吸附試驗(ELISA)原理檢測殘留的T7 RNA聚合酶。將 T7 RNA 聚合酶標準品和測試樣本加入預先塗有抗 T7 RNA 聚合酶抗體 (36705-A) 的微孔板孔中。然後加入稀釋的生物素標記的 T7 RNA 聚合酶檢測抗體 (36705-C),然後加入鏈黴親和素-HRP (SA-HRP) (36705-D),形成抗體 + 抗原 + 抗體-生物素 + SA-HRP 複合物。洗滌後,加入TMB底物(36705-H)顯色。 TMB 在 HRP 的催化下從無色變為藍色,最後在加入終止液 (36705-I) 後變為黃色。黃色的強度與樣本中檢測到的 T7 RNA 聚合酶的量呈正相關。
成分
不。 | 姓名 | 36705ES48 | 36705ES96 |
36705-A | 抗 T7 RNA 聚合酶包覆的微量滴定試紙條 | 四十八 電視 | 96噸 |
36705-B* | 標準:T7 RNA聚合酶 | 1 小瓶 | 2 小瓶 |
36705-C | 偵測 抗體:生物素共軛 抗體 | 60 微升 | 120 微升 |
36705-D | 鏈黴親和素一辣根過氧化物酶 | 三十 微升 | 60 微升 |
36705-E | 稀釋緩衝液 1 | 二十五 毫升 | 四十五 毫升 |
36705-F | 洗滌緩衝液濃度率(20×) | 二十五 毫升 | 50 毫升 |
36705-G | 稀釋緩衝液 2 | 15 毫升 | 三十 毫升 |
36705-H | TMB 底物 | 8 毫升 | 15 毫升 |
36705-I | 停止解決方案 | 5 毫升 | 10 毫升 |
36705-J | 封板機 | 各 3 個 | 各 5 個 |
*標準 36705-B 是凍乾粉。
與T7 RNA聚合酶相容: 10625, 10628 和 10629.
驗證數據
表1. 線性範圍:1~32 ng/mL ,R2=0.999 ,變異係數≤5%。
標準 | 濃度( 毫微克/毫升) | 平均( 毫微克/毫升) | 恢復(%) | 履歷% |
標準1 | 三十二 | 31.965 | 99.9% | 2.2% |
標準2 | 16 | 16.070 | 100.5% | 5.0% |
標準3 | 8 | 7.812 | 97.7% | 2.1% |
標準4 | 4 | 4.192 | 104.8% | 0.8% |
標準5 | 2 | 2.020 | 101.8% | 3.5% |
標準6 | 1 | 1.173 | 117.3% | 0.0% |
數控 | 0 | / | / | / |
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表 2. 高特異性
蛋白質名稱 | 濃度 | 是否檢測到 |
磷積極 碳控制 | 1 奈克/毫升 | 已檢測到 |
否負面 碳控制 | 0 奈克/毫升 | nd |
超核酸酶 | 10微克/毫升 | nd |
鹽 活性超核酸酶 | 10微克/毫升 | nd |
脫氧核糖核酸酶 我 | 10微克/毫升 | nd |
小鼠 RNase 抑制劑 | 10微克/毫升 | nd |
痘苗加帽酶 | 10微克/毫升 | nd |
無機焦磷酸酶 | 10微克/毫升 | nd |
mRNA Cap 2 ´-O-甲基轉移酶 | 10微克/毫升 | nd |
1%牛血清白蛋白 | 10 米克/毫升 | nd |
表 3. 定量限: 本產品的定量限是透過稀釋標準曲線的最低濃度點來確定的,其中最低濃度下的變異係數(CV)小於20%。這被定義為定量限,即 1 ng/mL。
年代TD6 理論值 (納克/毫升) | 標準 6 檢定平均值 (納克/毫升) | 電視重複次數 | 履歷% | 恢復 |
1 | 0.858 | 24 | 12.6% | 85.8% |
表 4.LOD: 本產品的檢測極限定義為陰性對照(NC)的平均檢測值加上兩倍標準差所對應的標準濃度。透過測定24個NC標準品,計算平均值和標準差,確定檢測極限為0.318 ng/mL。
平均值(外徑) | 標準差(外徑) | 平均值 +2SD (OD) | 平均值+2SD (納克/毫升) |
0.0527 | 0.0038 | 0.0604 | 0.3176 |
運輸和儲存
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