الإشريكية القولونية مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة (2G)
ملخص المؤهلات (رقم الفئة: 4)1308ES60)
- خلفية
البيانات الملخصة في هذا التقرير تم إجراؤها بواسطة Yeasen Biotechnology لمنتج 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G). البيانات الموجزة هي فقط للرجوع إليها من قبل المستخدم، ويحتاج المستخدم إلى التحقق من بقايا الخلايا المضيفة يتم استخدام طريقة DNA من خلال عينات خاصة بهم للتأكد من أن الطريقة يمكن أن تلبي متطلبات المستخدم. يُنصح جميع المختبرات التي تستخدم هذه المجموعة بالتحقق من المعلمات التالية: الخطية، والنطاق، والدقة، والإحكام، وحد الكم، والخصوصية، والمتانة.
يمكن لشركة Yeasen Biotechnology تقديم تقرير تأهيل مفصل لهذه المجموعة. إذا استخدم المستخدم هذا التقرير، فلن يتم تحديد مدى ملاءمته (بما في ذلك الدقة، دقة ويجب التحقق من (الخصوصية والجودة).
- المواد والطرق التجريبية
2.1 مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلية المضيف E.coli (2G)، البائع: Yeasen، رقم القطعة: 41308ES60.
2.2 مجموعة تحضير عينة الحمض النووي المتبقي المغناطيسي MolPure®، البائع: Yeasen، رقم الكتالوج: 18461ES60.
2.3 المعيار الوطني لمحتوى الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية: الفئة 270027، رقم الدفعة: 201101، التركيز: 96.2 ميكروجرام/مل، ظروف التخزين: -70 درجة مئوية، تم الشراء من: المعاهد الوطنية لمراقبة الأغذية والأدوية.
2.4 البيانات الأصلية: تم تسجيل النسخة الإلكترونية في "التقرير التجريبي" الملف الفرعي للملف الرئيسي 'مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا E.coli المضيفة (2G)'.
2.5 الطريقة: تم إنتاج المواد وطرق التشغيل المستخدمة في التجربة بشكل أساسي أو ضبطها بواسطة Yeasen Biotechnology، والتي تم تقييمها والتحقق منها لفترة طويلة، ويتم تطوير وتصنيع المجموعة وفقًا لنظام ISO 13485.
- محتويات ونتائج التأهيل
3.1 نطاق الكشف
كان النطاق الخطي للمجموعة 30 بيكو جرام/ميكرولتر ~ 300 بيكو جرام/ميكرولتر مع R2=1، وكانت كفاءة التضخيم 101.74% مع معامل تغير اللون <15% لكل اختبار تركيز.
الشكل 1 منحنى qPCR القياسي لـ DNA E.coli (2G)
3.2 الدقة
3.2.1 الانحراف عن المعيار الوطني لمحتوى الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية
تم معايرة مادة مرجع الحمض النووي لـ E.coli في كل دفعة من المجموعة باستخدام المعيار الوطني لمحتوى الحمض النووي لـ E.coli. كانت مادة مرجع الحمض النووي لـ Yeasen خالية بشكل أساسي من الانحراف عن المعيار الوطني لمحتوى الحمض النووي لـ E.coli منحنى المعايرة، وانحراف قيمة التحليل كان <5%.
3.2.2 رإعادة التأهيل
3.2.2.1 تجربة استعادة عينة فارغة من الشوكة
تم تحضير عينات من معايير الحمض النووي لـ E.coli بتركيزات عالية ومنخفضة: 300 بيكو جرام/ميكرولتر، و3 بيكو جرام/ميكرولتر، و30 فغ/ميكرولتر، على التوالي، وتم تحليلها بعد الاستخلاص باستخدام طريقة الخرز المغناطيسي لمجموعة المعالجة المسبقة لعينة الحمض النووي المتبقي (تم إجراء تكرارين للاستخلاص لكل عينة، وتم إجراء 3 تكرارات للتحليل لكل استخلاص)، وتم تحليل استرداد العينة وCVs.
بالنسبة لتركيزات مختلفة من عينات الحمض النووي، تراوحت معدلات الاسترداد من 70% إلى 130%، وكانت جميع معاملات التباين أقل من 20%.
| نوع العينة | التركيز النظري | استخراج 1 يعني | استخراج 2 يعني | متوسط التركيز | السيرة الذاتية | استعادة |
| عينة فارغة | / | / | / | / | / | / |
| عينة الاسترداد 1 | 300 بيكو جرام/ميكرولتر | 250.56 بيكو جرام/ميكرولتر | 262.11 بيكو جرام/ميكرولتر | 256.33 بيكو جرام/ميكرولتر | 4.41% | 85.44% |
| عينة الاسترداد 2 | 3 بيكو جرام/ميكرولتر | 2.29 بيكو جرام/ميكرولتر | 2.56 بيكو جرام/ميكرولتر | 2.42 بيكو جرام/ميكرولتر | 7.09% | 80.77% |
| عينة الاسترداد 3 | 30 ميكروغرام/ميكرولتر | 33.62 فغ/ميكرولتر | 32.61 فغ/ميكرولتر | 33.12 فغ/ميكرولتر | 14.28% | 110.39% |
الجدول 1 استعادة عينة فارغة من المسامير
3.2.2.2 تجربة استعادة عينة محاكاة للمسامير
تم استخراج عينات من نفس التركيز (3 بيكو جرام / ميكرولتر من الحمض النووي لـ E.coli) (تم إجراء تكرارين للاستخراج لكل عينة وتم إجراء 3 تكرارات للتحليل لكل استخراج) مع 5 محاليل خلفية مختلفة (بروتين عالي، حمض نووي عالي، درجة حموضة عالية ومنخفضة، ملح مرتفع) وتم تحليل استرداد العينات و CV.
تراوحت نسبة استرداد عينات الحمض النووي لحلول الخلفية المختلفة من 70% إلى 130%، مع جميع المتغيرات <20%.
| نوع العينة | التركيز النظري | استخراج 1 يعني | استخراج 2 يعني | متوسط التركيز | السيرة الذاتية | استعادة |
| العينة الأساسية | / | / | / | / | / | / |
| نسبة عالية من البروتين | 3 بيكو جرام/ميكرولتر | 2.25 | 2.23 | 2.24 | 1.09% | 74.74% |
| حمض نووي مرتفع | 3.93 | 3.96 | 3.95 | 1.56% | 131.52% | |
| عالية الملح | 2.69 | 2.67 | 2.68 | 2.63 | 89.20% | |
| درجة الحموضة عالية | 2.90 | 3.67 | 3.29 | 13.82% | 109.55% | |
| انخفاض الرقم الهيدروجيني | 2.77 | 2.87 | 2.82 | 3.41% | 94.01% |
الجدول 2 - استرداد عينة أساسية من المسامير
3.3 الدقة
3.3.1 قابلية التكرار
كرر الاختبار 10 مرات لمعايير الحمض النووي لـ E.coli بتركيز 3 بيكو جرام/ميكرولتر مع معامل تغير <15%.
| التكرارات | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | يقصد | السيرة الذاتية |
| قيمة الكشف (fg/μL) | 3.16 | 2.87 | 2.97 | 2.86 | 2.81 | 2.97 | 3.14 | 3.21 | 3.14 | 3.1 | 3.02 | 4.78% |
الجدول 3 نتائج التكرار
3.3.2 دقة متوسطة
قام ثلاثة من الباحثين بشكل مستقل باختبار عينات قياسية من الحمض النووي لـ E.coli عند تركيزات عالية ومنخفضة: 300 بيكو جرام/ميكرولتر، و3 بيكو جرام/ميكرولتر، و30 فكرو جرام/ميكرولتر، وتم إجراء ثلاث تكرارات لكل تركيز، وكانت معامل التغير لجميع البيانات التسع التي تم الحصول عليها <15٪.
| خبرة |
التركيز الفعلي التركيز النظري | الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية (2G) | ||
| 300 بيكو جرام/ميكرولتر | 3 بيكو جرام/ميكرولتر | 30 فغ/ميكرولتر | ||
| الخبرة 1 | التحديد 1 | 295.65 | 3.22 | 26.90 |
| التحديد 2 | 287.71 | 3.24 | 32.00 | |
| التحديد 3 | 300.23 | 3.17 | 27.50 | |
| الخبرة 2 | التحديد 4 | 306.06 | 3.13 | 37.30 |
| التحديد 5 | 299.76 | 3.02 | 32.70 | |
| التحديد 6 | 299.63 | 3.02 | 34.00 | |
| الخبرة 3 | التحديد 7 | 266.70 | 3.01 | 35.90 |
| القرار 8 | 272.89 | 3.09 | 40.70 | |
| القرار 9 | 276.51 | 3.01 | 35.20 | |
| / | يقصد | 289.46 | 3.10 | 33.60 |
| / | السيرة الذاتية | 4.89% | 3.02% | 13.18% |
الجدول 4 نتائج الدقة المتوسطة
3.4 الخصوصية
تم تقييم تداخل الحمض النووي الجينومي الخلوي المستخدم عادة في إنتاج المواد البيولوجية للتداخل مع كواشف الكشف عن الحمض النووي لـ E.coli، وتداخلت مجموعة التداخل مع مجموعة التحكم ولم يُشاهد أي تداخل (يُظهر الشكل أدناه، بالترتيب، بيانات التداخل بين الحمض النووي الجينومي HEK293 وVero وCHO مع كواشف الكشف عن الحمض النووي لـ E.coli).
الشكل 2 نتائج تجربة التداخل
3.5 حد الكميات
تم الكشف عن الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية عند 50 fg/μL، و40 fg/μL، و30 fg/μL، و10 fg/μL، و5 fg/μL، مع 10 تكرارات لكل تركيز. أظهرت النتائج أن معامل التباين كان أقل من 20% عند تركيزات 30 fg/μL وما فوق. وهذا يعني أن حد القياس الكمي لمجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا المضيف لبكتيريا الإشريكية القولونية (2G) كان 30 fg/μL.
|
التكرارات عنصر الاختبار | الحمض النووي لبكتيريا الإشريكية القولونية (2 جرام) (fg/μL) | |
| كمية | نسبة إعادة الحساب | |
| 1 | 29.43 | 98.09% |
| 2 | 29.51 | 98.35% |
| 3 | 32.04 | 106.79% |
| 4 | 26.07 | 86.89% |
| 5 | 34.06 | 113.53% |
| 6 | 33.54 | 111.79% |
| 7 | 26.95 | 89.82% |
| 8 | 27.38 | 91.26% |
| 9 | 27.04 | 90.13% |
| 10 | 26.10 | 87.02% |
| يقصد | 29.21 | / |
| السيرة الذاتية | 10.40% | / |
الشكل 3 نتيجة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي لـ 30fg/μL DNA E.coli (2G)
3.6 المتانة
لقد تم اختبار هذه المجموعة وهي مناسبة، ولكن لا تقتصر على، الأدوات التالية:
| بائع | نماذج الآلات | كفاءة التضخيم | ر2 | حد التقدير الكمي (fg/μL) | السيرة الذاتية |
| ثيرمو | أبي 7500 | 101.74% | 1 | 30 | 13.30% |
| ثيرمو | برنامج ABI QuantStudio5 | 100.46% | 1 | 30 | 12.40% |
| بيو راد | سي اف اكس 96 | 99.20% | 0.999 | 30 | 13.76% |
| شنغهاي هونغشي | شبكة محلية | 100.40% | 0.999 | 30 | 11.67% |
الجدول 5 نتائج اختبار ملاءمة الأداة
3.7 الاستقرار
3.7.1 استقرار التجميد والذوبان
تم اختبار مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا المضيفة لبكتيريا E.coli (2G) عن طريق التجميد والذوبان المتكرر 10 مرات، ولم يتأثر أداء المجموعة.
|
مؤشرات الاختبار أوقات التجميد والذوبان | المعلمة | الوقت T0 | تجميد وتذويب 10 مرات |
| معامل المنحنى القياسي | كفاءة التضخيم | 98.23% | 100.20% |
| ر2 | 1 | 0.999 | |
| حد التقدير الكمي (30 fg/μL) | السيرة الذاتية | 15.07% | 9.66% |
الجدول 6 تحليل نتائج استقرار التجميد والذوبان
3.7.2 الاستقرار المتسارع
هـ.تم تخزين مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي لخلايا المضيف لـ coli (2G) عند درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية لمدة 30 يومًا و37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا على التوالي. لم يتأثر أداء المجموعة بأي شكل من الأشكال.
|
مؤشرات الاختبار تسارع درجة الحرارة والوقت | المعلمة | التجربة 1 | التجربة 2 | ||
| الوقت T0 | 2~8 درجة مئوية 30 أيام | الوقت T0 | 37 درجة مئوية لمدة 14 يومًا | ||
| معامل المنحنى القياسي | كفاءة التضخيم | 97.77% | 99.81% | 98.39% | 98.65% |
| ر2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| حد التقدير الكمي (30 fg/μL) | السيرة الذاتية | 11.04% | 13.79% | 9.55% | 14.55% |
الجدول 7 تحليل نتائج الاستقرار المتسارع
- 4.مرجع
4.1 لجنة دستور الأدوية الصيني (ChPC). دستور الأدوية لجمهورية الصين الشعبية (المجلد الثالث) [S]. بكين: مطبعة العلوم الطبية والتكنولوجيا الصينية، ص 542-543، 2020.
4.2 NMPA، 2007: المبادئ العامة للمراجعة الفنية للتحقق من صحة الطريقة التحليلية لمراقبة جودة المنتجات البيولوجية.
4.3 ICH(2022)《التحقق من صحة الطريقة التحليلية Q2》، نسخة المسودة.
معلومات الطلب
| وصف | رقم القطعة |
| 41332ES | |
| مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة HEK293 (3G) | 41331ES |
| 41307ES | |
| مجموعة الكشف عن بقايا الحمض النووي للخلية المضيفة لبكتيريا الإشريكية القولونية (2G) | 41308ES |
| 18461ES | |
| مجموعة الكشف عن الميكوبلازما qPCR من MycAway™ (2G) | 40619ES |