الفصل الأول: تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل
1.1 مبادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل
يشير مصطلح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى بوليميراز الحمض النووي يتم تحفيزه بواسطة السلسلة الأصلية للحمض النووي كقالب، مع مادة تمهيدية محددة لتمديد نقطة البداية، يتم إضافة dNTP وMg2+ و عوامل التمديد، تعزيز التضخيم عوامل. من خلال خطوات التحلل والتلدين والتمديد، إن تكرار السلسلة الابنة في المختبر يكون مكملًا لقالب الحمض النووي للسلسلة الأم، والذي يمكنه تضخيم أي حمض نووي مستهدف بسرعة وبشكل محدد في المختبر.
1.2 تصنيف بوليميرات الحمض النووي
DNA pol هو إنزيم مهم لـ خلوي تكرار الحمض النووي. وفقًا للاستقرار الحراري، والقدرة على التركيب، والسرعة، والدقة، خصوصيةيمكن تصنيفها على أنها بوليميراز الحمض النووي Taq، بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة، بوليميراز الحمض النووي الساخن، بوليميراز الحمض النووي المباشر التوسع، بوليميراز الحمض النووي طويل التجزئة إنزيم، بوليميراز الحمض النووي السريع، بوليميراز الحمض النووي المتعدد وما إلى ذلك.
الأكثر شيوعًا هو بوليميراز الحمض النووي Taq، الذي يتمتع بنشاط بوليميراز في الطرف 5'→3' و نشاط النوكلياز الخارجي في نهاية 5'→3'ولكن لا نشاط تصحيح النهاية 3'→5'. أهم ميزة لـ Taq هي مقاومتها الجيدة للحرارة، والتي يمكنها تحمل التحلل الحراري خطوة من تفاعل البوليميراز المتسلسل، مما يجعل من غير الضروري إضافة المزيد من الإنزيم في منتصف العملية. ومع ذلك، فإن Taq لديه دقة منخفضة لأنه لا يحتوي على نشاط تدقيق لغوي. يتم تحقيق ذلك بشكل أساسي من خلال تركيز ونسبة أيونات المغنيسيوم و dNTPs.
يحتوي بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة على مركز بلمرة ومركز انقسام، يتمتع مركز البلمرة بنشاط بوليميراز الحمض النووي 5'→3'، والذي يمكنه تحفيز تركيب الحمض النووي على طول اتجاه 5'→3'؛ يتمتع مركز الانقسام بنشاط إكسونوكلياز 3'→5'، والذي يمكنه القيام بإصلاح عدم تطابق القواعد. لذلك، بالإضافة إلى خصائص بوليميراز الحمض النووي Taq، فإن بوليميراز الحمض النووي عالي الدقة له أيضًا نشاط تصحيحي، مسؤول عن استئصال غير متطابق النيوكليوتيدات، وبالتالي ضمان دقة المنتج.
يوضح الرسم البياني أعلاه كيفية عمل بوليميراز الحمض النووي [1].
تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر (Direct PCR) هو رد فعل ذلك يستخدم عينات غير نقية لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل والحيوانات أو أنسجة نباتية للتضخيم المباشر. حالياً، ياسين يمكن استخدام مجموعات تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل للعينات الخام مثل النباتات والأنسجة الحيوانية والدم وما إلى ذلك. دون الحاجة إلى تنقية الأحماض النووية، والتي يُبسط إلى حد كبير عملية تجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل.
يوضح الشكل أعلاه تقنية Direct PCR.
أ. الطريقة المباشرة: أخذ كمية صغيرة من العينة وإضافتها مباشرة إلى جهاز PCR مزيج رئيسي للتعريف بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل؛
ب. طريقة التحلل: بعد أخذ العينة، أضفها إلى محلول التحلل لإطلاق الجينوم، خذ كمية صغيرة من السائل العلوي للتحلل وأضفها إلى PCR Master Mix للتعريف بواسطة PCR.
1.3 الأسئلة الشائعة والحلول
| مشكلة | سبب | حل |
| بدون نطاقات مكبرة | مشاكل نظام الرحلان الكهربائي | استكشاف أخطاء صبغة الحمض النووي، وتركيز الجل، ومحلول الرحلان الكهربائي وإصلاحها. |
| درجة حرارة التحلل غير دقيقة | هل درجة الحرارة المشار إليها لجهاز PCR متوافقة مع درجة الحرارة الفعلية؟ إذا كانت درجة الحرارة مرتفعة للغاية، فإن الإنزيم يتفاعل بسرعة في الدورات القليلة الأولى؛ إذا كانت منخفضة للغاية، فإن عملية تحلل القالب ليست كاملة. | |
| تلوث البروتياز والنوكلياز في نظام التفاعل | يجب تسخين نظام التفاعل إلى 95 درجة مئوية لمدة 5-10 دقائق قبل إضافة إنزيم Taq. | |
| صخطأ ريمر | التحقق من خصوصية البادئ أو إعادة تصميم البادئات باستخدام BLAST. | |
| القالب يحتوي على شوائب | على وجه الخصوص، غالبًا ما تحتوي الأنسجة المثبتة بالفورمالديهايد والمغموسة بالبارافين على حمض الفورميك، مما يتسبب في إزالة البيورين من الحمض النووي ويؤثر على نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل. | |
| تدهور وفشل البادئ | تأكد من أن البادئات الاصطناعية صحيحة أو منقاة أو غير نشطة بسبب ظروف التخزين غير المناسبة. | |
| كمية أقل من منتج PCR | درجة حرارة التلدين غير مناسبة | تم تصميم تفاعل PCR المتدرج لتحسين درجة حرارة التلدين بتدرج 2 درجة. |
| وجود مثبطات في قالب الحمض النووي | تأكد من أن قالب الحمض النووي نظيف. | |
| التحلل المطول | يؤدي التحلل المطول إلى تعطيل بوليميراز الحمض النووي. | |
| الامتداد قصير جدًا | وقت التمديد قصير جدًا. اضبط وقت التمديد على مبدأ 1 كيلو بايت/دقيقة. | |
| كمية قالب الحمض النووي منخفضة جدًا | زيادة كمية قالب الحمض النووي. | |
| كمية غير كافية من البادئات | زيادة محتوى البرايمر في النظام. | |
| عدد غير كاف من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل | زيادة عدد دورات التفاعل. | |
| فرق متعددة | ضعف في تحديد البادئ | تم استخدام برامج تصميم البادئ مثل BLAST وPrimer للتحقق من خصوصية البادئ أو إعادة تصميم البادئات. |
| عدد كبير من الحلقات | قم بزيادة كمية القالب بشكل مناسب، وقلل عدد الدورات. | |
| التلوث الخارجي للحمض النووي | ضمان التشغيل النظيف. | |
| كمية زائدة من القوالب | يجب أن تكون كمية الحمض النووي البلازميدي <50 نانوجرام، في حين يجب أن يكون الحمض النووي الجينومي <200 نانوجرام. | |
| الكثير من البرايمر | تقليل كمية البادئات في نظام التفاعل. | |
| لم يتم خلط محلول التفاعل بشكل جيد | تأكد من ذوبان محلول التفاعل بشكل كامل وخلطه جيدًا. | |
| ملغ تركيز عالي | قم بضبط تركيز الماغنيسيوم المستخدم بشكل مناسب. | |
| جرعة إنزيم عالية أو جودة إنزيم رديئة | قم بتقليل كمية الإنزيم أو استبداله بمصدر آخر. | |
| درجة حرارة التلدين المنخفضة ووقت التلدين الطويل والتمديد | قم بزيادة درجة حرارة التلدين لتقليل وقت التحلل والامتداد، أو قم بتصميم تفاعل PCR متدرج لتحسين درجة حرارة التلدين. | |
| مشاكل في مزيج PCR نفسه | إذا كان عبارة عن خليط مسبق لتفاعل البوليميراز المتسلسل، فقد تكون المشكلة في جودة الكاشف نفسه، لذلك يوصى بتغيير الدفعة أو العلامات التجارية الأخرى. | |
| حجم خاطئ | جالتلوث | قم بتنظيف المقعد باستخدام الكواشف والأطراف الجديدة. |
| الاستخدام غير الصحيح للقوالب أو البادئات | استبدال البادئات والقوالب. | |
| جالنمط الوراثي | تم إجراء تحليل التسلسل ودراسات BLAST على الجينات المدروسة. |
الفصل الثاني: التحليل الكهربائي للأحماض النووية
2.1 مبادئ التحليل الكهربائي للأحماض النووية
تسمى حركة الجسيمات المشحونة تحت تأثير مجال كهربائي نحو قطب معاكس لخواصها الكهربائية بالرحلان الكهربائي. باستخدام الجسيمات المشحونة في المجال الكهربائي التحرك بسرعات مختلفة وتحقيق فصل التكنولوجيا يسمى بالرحلان الكهربائي. الرحلان الكهربائي للأحماض النووية هو أداة مهمة للأبحاث المتعلقة بالأحماض النووية وهو جزء لا يتجزأ من التقنيات مثل مجسات الحمض النووي، تضخيم الحمض النووي وتحليل التسلسل. عادة ما يتم إجراء التحليل الكهربائي للأحماض النووية تم تنفيذها في الآغاروز أو هلاميات البولي أكريلاميد. تركيزات مختلفة من يمكن أن يشكل الأجاروز والبولي أكريلاميد مواد هلامية ذات أحجام مختلفة لشبكات الغربال الجزيئي، والتي يمكن استخدامها لفصل أجزاء الأحماض النووية ذات الأوزان الجزيئية المختلفة.
2.2 التحليل الكهربائي للهلام الآغاروزي
الآجاروز هو بوليمر خطي يتم استخراجه من الأعشاب البحرية. يتم تسخين الآجاروز في محلول منظم ثم إذابته في محلول شفاف صافٍ، ثم يتم سكبه في قالب الجيلاتين ويتصلب ليشكل مصفوفة صلبة تعرف بالهلام، وتعتمد كثافتها على تركيز الآجاروز.
أغاروز الرحلان الكهربائي للهلام هو نوع من طرق الرحلان الكهربائي باستخدام الأجار كوسيط داعم، و الفرق الرئيسي بين تحليلي المبدأ والدعم الآخر للرحلان الكهربائي هو أنه يحتوي على دور مزدوج "المنخل الجزيئي" و"الكهربائي". يتم وضع الجل في المجال الكهربائي تحت الفعل المجال الكهربائي، الشحنة تنتقل الأحماض النووية إلى إيجابي القطب خلال الشبكة ل ال هلام. ال معدل الهجرة تتأثر بحجم جزيئات الأحماض النووية، تركيز الأجاروز، الجهد المطبق، والحقل الكهربائي، ومحلول الرحلان الكهربائي، وكمية الصبغة المضمنة. بعد الوقت المناسب من الكهربيسيكون تحت ظروف مختلفةستكون شظايا الأحماض النووية ذات الأحجام والتكوينات المختلفة في مواضع مختلفة على الهلام، وبالتالي تحقيق غرض الفصل.فصل هلام الآجاروز يحتوي على مجموعة واسعة، ويستخدم عادة في استعادة هلام قطع الحمض النووي، وعزل الحمض النووي، ويستخدم لدعم ما إذا كان الحمض النووي معاد التركيب، البلازميد، وما إلى ذلك. سواء تم قطع البلازميد أم لا، فإن تركيزات مختلفة من هلام الأجاروز يمكن فصلها عن طول 200 نقطة أساس ل 50 كيلو بايت ل الحمض النووي شظايا.
2.3 الأساليب التجريبية
تحضير غراء
خذ تركيز 1% كمثال: وزن 1 جرام أجاروز، صبه في قارورة مخروطية سعة 250 مل، أضف 100 مل من محلول عازل كهربي 0.5×TBE ونخلطها جيدا ثم نغليها في الميكروويف ثم جففيه في الهواء حتى يصل إلى حوالي 60 درجة مئوية، وأضيفي كمية مناسبة من صبغة الحمض النووي ورجيها جيدًا ثم صبيها في طبق جل نظيف تم تحضيره بالفعل، ثم استخدمي مشطًا بكلتا يديك لتجفيفه. أدخله في محلول الجل عموديًا وانتظر جل ليكون يتم تبريده بشكل طبيعي حتى يتجمد تمامًا (25-30 دقيقة).
قم بإزالة مشط صنع الغراء
انقل الجل بعناية إلى خزان التحليل الكهربائي (إما باستخدام صينية الجل أو فقط الجل)), ضع جانب بئر العينة في القطب السالب، وأضف 0.5× TBE قم بعزل الجل باستخدام عازل الرحلان الكهربائي حتى يصبح الجل على عمق حوالي 1 مم تحت السطح.
يضيف عينة
أضف 10 × مخزن تحميل (تحميل المخزن المؤقت) إلى عينات الحمض النووي, امزج جيدًا، ثم أضف خليط العينة ببطء إلى الخليط السابق.بجل مدمج الآبار مع مسدس ماصة، إضافة 5-10 ميكرولتر من العينة لكل بئر (لا يزيد عن 40 ميكرولتر). بشكل عام، يجب ملء البئر الأول بعلامة DNA، والبئر الثاني بعنصر تحكم إيجابي (DNA محدد))، و الثالث مع التحكم السلبي (الكاشف أو الماء))، و ينبغي تسجيل ترتيب العينات.
الرحلان الكهربائي
تغطية خزان الرحلان الكهربائي، قم بتوصيله الأسلاكقم بتشغيل الطاقة، واضبط جهد الكهربي والتيار والوقت المعلمات. بشكل عام، يجب ألا يتجاوز الجهد 5 فولت/سم (يشير الطول إلى المسافة بين القطب الموجب والقطب السالب لخزان الكهربي)، و وقت الرحلان الكهربائي هو عموما 15-30 دقيقة.
نهاية الرحلان الكهربائي
يزيل ال الجل (بدون صينية الجل) وتصويره تحت نظام التصوير بالأشعة فوق البنفسجية للحصول على صورة كهربية واضحة، ثم تحرير الصورة الكهربية مع برنامج تحرير الصور و قم بوضع علامة عليها بمعلومات العينة والتاريخ والمشغل.
2.4 الأسئلة الشائعة والحلول
| مشكلة | سبب | حل |
| نطاق الهدف مفقود | الحمض النووي الصغير ينفد من الهلام | تقصير زمن الرحلان الكهربائي، تقليل الجهد، زيادة تركيز الهلام. |
| لا يمكن التمييز بسهولة بين نطاقات الحمض النووي ذات الوزن الجزيئي المتشابه | قم بزيادة وقت التحليل الكهربائي لتتناسب مع تركيز الهلام الأمثل. | |
| القطعة المستهدفة كبيرة جدًا بالنسبة للرحلان الكهربائي التقليدي. | تم تحليلها باستخدام تقنية الرحلان الكهربائي النبضي للهلام. | |
| مقطع بدون غرض | كانت عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل معيبة ولم تتمكن من تضخيم المنتج المستهدف. | |
| أشرطة الحمض النووي غير واضحة | مخزن الرحلان الكهربائي القديم | عند استخدام محلول الرحلان الكهربائي عدة مرات، ستقل القوة الأيونية، وسترتفع قيمة الرقم الهيدروجيني ببطء، وستضعف قدرة التنظيف، مما يؤثر على تأثير الرحلان الكهربائي، لذلك يوصى بتغيير محلول الرحلان الكهربائي بشكل متكرر. |
| تدهور الحمض النووي | تجنب تلوث النوكلياز. | |
| الظروف المستخدمة في عملية الرحلان الكهربائي ليست مناسبة لعملية الرحلان الكهربائي | يجب ألا يتجاوز جهد الرحلان الكهربائي 20 فولت/سم ويجب أن تكون درجة الحرارة أقل من 30 درجة مئوية؛ يجب أن تكون درجة حرارة الرحلان الكهربائي لخيوط الحمض النووي الضخمة أقل من 15 درجة مئوية؛ تحقق مما إذا كان عازل الرحلان الكهربائي المستخدم لديه سعة تخزين كافية. | |
| أخذ عينات زائدة من الحمض النووي | تقليل كمية الحمض النووي المأخوذة من الهلام. | |
| عينات الحمض النووي مالحة للغاية | تم إزالة الملح الزائد عن طريق ترسيب الإيثانول قبل الرحلان الكهربائي. | |
| تلوث البروتين | استخلاص الفينول قبل التحليل الكهربائي يزيل البروتينات. | |
| تركيز العينة مرتفع للغاية | يجب أن يكون تركيز العينة العلوية أقل من 500 نانوجرام/بئر، والتركيز المرتفع جدًا سيؤثر على سرعة الكهربي والتشغيل، مما يؤدي إلى السحب والتشويش. | |
| ضعف أو عدم وجود فرق | حجم عينة الحمض النووي غير كاف | زيادة كمية امتصاص الحمض النووي |
| تدهور الحمض النووي | تجنب تلوث الحمض النووي بالنوكلياز | |
| مصدر ضوء غير مناسب لصبغات الأحماض النووية | قم باختيار مصدر الضوء ذو الطول الموجي المناسب وفقًا للتعليمات الخاصة بصبغة الحمض النووي. | |
| أشرطة غير منفصلة | قلة الوقت | زيادة وقت التحليل الكهربائي |
| تركيز الجل غير صحيح | تركيز الغراء مرتفع جدًا، مما يؤدي إلى مقاومة كبيرة للانفصال. | |
| تركيز أيونات الملح في العينة مرتفع جدًا | يؤدي التركيز العالي للأيونات الملحية إلى زيادة المقاومة الكهربية ويمنع فصل النطاقات، على سبيل المثال، العينات المهضومة التي تحتوي على عازل نوكلياز. | |
| نطاقات غير محددة | تلوث الحمض النووي الريبوزي | إعادة تحضير العينات |
| التلوث بين العينات | استبدال الطرف أثناء التعبئة؛ لتجنب انسكاب العينات ذات الأحجام >40 ميكرولتر. |
2.5 التحليل الكهربائي للهلام البولي أكريلاميد
يتم تكوين هلاميات البولي أكريلاميد عن طريق التفاعل الكيميائي بين مونومر الأكريلاميد، ومحفزات البلمرة المتسلسلة N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine (TEMED) وبيركبريتات الأمونيوم، وعامل الربط المتقاطع N,N'-methylenebisacrylamide. يتبلمر مونومر الأكريلاميد في وجود محفز لتكوين سلسلة طويلة السلاسل، والتي هي مترابطة بشكل متقاطع بواسطة عامل ربط متقاطع لتكوين هلام، يتم تحديد حجم المسام فيه من خلال طول السلسلة ودرجة الربط المتقاطع. يتم تحديد حجم المسام من خلال طول السلسلة و درجة الارتباط المتبادل. يعتمد طول السلسلة على يمكن تغيير تركيز الأكريلاميد ودرجة الارتباط المتبادل للبوليمر عن طريق تعديل نسبة الأكريلاميد إلى عامل الارتباط المتبادل.
يمكن استخدام الرحلان الكهربائي للهلام البولي أكريلاميد متفرق العينات المبنية على الاختلافات في تكلفة، الحجم الجزيئي وشكل العينات المكهربة. فهو يجمع بين الغربلة الجزيئية والكهرباء الساكنة ، ولها قوة تحليل أعلى من التحليل الكهربائي للهلام الآغاروزي. شظايا الحمض النووي تختلف فقط بـ نوكليوتيد واحد يمكن فصلها.
يتم استخدام الرحلان الكهربائي للهلام البولي أكريلاميد لتحليل وإعداد شظايا الحمض النووي التي يقل طولها عن 1 كيلو بايت. اعتمادًا على حجم شظايا الحمض النووي المراد عزلها, هلاميات من مختلف يمكن إعدادها.
يظهر الجدول أدناه نطاقات الفصل الفعالة لتركيزات مختلفة من الأكريلاميد والحمض النووي:
| مركز (%) | مدى الفصل الفعال (bp) |
| 3.5 | 100 إلى 2000 |
| 5 | 80 الى 500 |
| 8 | 60 إلى 400 |
| 12 | 40 الى 200 |
| 15 | 25 إلى 150 |
| 20 | 10 الى 100 |
2.4 إرشادات لاختيار المنتجات ذات الصلة
تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي | ||||
| مواصفة | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| طول التضخيم | ≤10-15 كيلو بايت | ≤5 كيلو بايت | ≤5 كيلو بايت | ≤4 كيلو بايت |
| تمديد الوقت | 1-10 ثانية/كيلو بايت | 30 ثانية/كيلو بايت | 30 ثانية/كيلو بايت | 30 ثانية/كيلو بايت |
| هيكل المنتج النهائي | 3'-دأ | 3'-دأ | 3'-دأ | 3'-دأ |
| درجة حرارة التلدين | 60 درجة مئوية | درجة الحرارة-(2~5) درجة مئوية | درجة الحرارة-(2~5) درجة مئوية | درجة الحرارة-(2~5) درجة مئوية |
| مدى توافق GC | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| نشاط إكسونوكلياز 5'-3' | حاضر | حاضر | حاضر | حاضر |
| تفاعل البوليميراز المتسلسل للمستعمرات | مناسب | مناسب | مناسب | مناسب |
| تحديد الجينات | مناسب | مناسب | مناسب | مناسب |
| تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد | غير مناسب | غير مناسب | غير مناسب | تفاعل البوليميراز المتسلسل 3-4 |
| مؤشر الرحلان الكهربائي | أرجواني-أحمر | أزرق | عديم اللون | أزرق |
| بداية ساخنة | بداية ساخنة | بداية غير ساخنة | بداية غير ساخنة | بداية ساخنة |
| مزيج مسبق/طقم | خليط مسبق | خليط مسبق | خليط مسبق | خليط مسبق |
تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر | ||||
| مواصفة | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| نوع المنتج | تضخيم مباشر للفأرة | تضخيم الدم بشكل مباشر | التضخيم المباشر للنبات | |
| طول التضخيم | ≤1 كيلو بايت | ≤8 كيلو بايت | ≤1 كيلو بايت | |
| تمديد الوقت | 30 ثانية/كيلو بايت | 3-5 ثانية/كيلو بايت لـ ≤2 كيلو بايت، | 60 ثانية/كيلو بايت | |
| 10 ثانية/كيلو بايت لـ ≤8 كيلو بايت | ||||
| وقت تحلل العينة | 15 دقيقة | 0-3 دقيقة | 0-10 دقيقة | |
| هيكل المنتج النهائي | نهاية حادة | نهاية حادة | نهاية حادة | |
| درجة حرارة التلدين | تم-(2~5)درجة مئوية | تم-(1~2)درجة مئوية | تم-(2~5)درجة مئوية | |
| مدى توافق GC | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| نشاط إكسونوكلياز 5'-3' | √ | √ | √ | |
| تحديد الجينات | √ | √ | √ | |
| تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد | 3-4 بلكس | |||
| تضخيم العينة المباشرة | √ | √ | √ | |
| مؤشر الرحلان الكهربائي | أزرق | عديم اللون | أزرق | |
| بداية ساخنة | √ | √ | √ | |
| مزيج مسبق/طقم | مجموعة (مع مزيج) | مجموعة (مع مزيج + عازل) | مجموعة (مع مزيج) | |
| الكائنات الحية المناسبة | الفأر، الجرذ | الإنسان، الفأر، الماعز، الدجاج، الخنزير، الخ. | الأرز، الذرة، التبغ، بذور اللفت، القمح، فول الصويا، الخ. | |
| الأنسجة/المواد المناسبة | الذيل، الأذن، أصابع القدم (مع العضلات)، والأعضاء الأخرى | دم طازج مع EDTA، هيبارين، سيترات، إلخ، دم مبرد (مجمد)، بقع دم جافة تجارية | أوراق صغيرة، أوراق قديمة، شتلات، سيقان صغيرة | |
| عينة المدخلات | الأنسجة: 5-10 ملغ؛ الذيل: 1-5 ملم | الدم الكامل: 0.5%-20%، بقعة دم جافة: 1 مم² | الورقة: 1-10 ملم، البذرة: 1-3 ملم | |
تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة | ||||
| مواصفة | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| طول التضخيم | ≤10 كيلو بايت gDNA، ≤10 كيلو بايت cDNA، ≤16 كيلو بايت λDNA | ≤10 كيلو بايت gDNA، ≤10 كيلو بايت cDNA، ≤13 كيلو بايت λDNA | ≤10 كيلو بايت gDNA، ≤10 كيلو بايت cDNA، ≤13 كيلو بايت λDNA | |
| تمديد الوقت | 5 ثانية/كيلو بايت | 30 ثانية/كيلو بايت | 30 ثانية/كيلو بايت | |
| الإخلاص (التاق) | 83× | 83× | 83× | |
| هيكل المنتج النهائي | نهاية حادة | نهاية حادة | نهاية حادة | |
| درجة حرارة التلدين | 60درجة مئوية | 68درجة مئوية | 68درجة مئوية | |
| مدى توافق GC | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| نشاط إكسونوكلياز 5'-3' | غائب | غائب | غائب | |
| مؤشر الرحلان الكهربائي | أزرق | عديم اللون | أزرق | |
| إنزيم واحد/مزيج مسبق | خليط مسبق | إنزيم واحد | خليط مسبق | |
| تسامح | / | / | الدم، مستخلص أنسجة الفأر | |
التحليل الكهربائي للأحماض النووية | ||||
| فئة المنتج | القط رقم | اسم المنتج | طلب | |
| أغاروز | 10208ES | أغاروز | التحليل الكهربائي الروتيني للأحماض النووية | |
| 10221ES | أجاروز عالي النخل (درجة PCR) | مناسب لفصل شظايا الحمض النووي التي يتراوح طولها بين 20 و800 زوج قاعدي، وهو مماثل لهلام البولي أكريلاميد | ||
| 10226ES | أقراص الآجاروز (0.5 جرام/قرص) | مناسب لتطبيقات الآجار الروتينية | ||
| صبغة الحمض النووي | 10202ES | صبغة جل حمض نووي YeaRed (10000 مرة في الماء) | قابل للذوبان في الماء، مع خصائص طيفية مماثلة لـ EB، قابل للإثارة عند ضوء الأشعة فوق البنفسجية بطول موجي 300 نانومتر | |
| علامة الحمض النووي | 10510ES | سلم DNA GoldBand 1 كيلو بايت | 250-12000 زوج أساسي (13 نطاقًا) | |
| 10515ES | سلم الحمض النووي GoldBand 50 bp | 50-1000 زوج أساسي (14 نطاقًا) | ||
| 10507ES | سلم الحمض النووي GoldBand 100bp | 100-1500 زوج أساسي (12 نطاقًا) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp بالإضافة إلى DNA Ladder | 100-3000 زوج أساسي (14 نطاقًا) | ||
| 10517ES | سلم الحمض النووي GoldBand 200 bp | 200-5000 زوج أساسي (12 نطاقًا) | ||
| 10518ES | سلم الحمض النووي GoldBand 500 bp | 500-5000 زوج أساسي (8 نطاقات) | ||
| 10501ES | علامة الحمض النووي GoldBand DL2000 | 100-2000 زوج أساسي (6 نطاقات) | ||
| 10504ES | جهاز تحديد الحمض النووي GoldBand DL5000 | 100-5000 زوج أساسي (9 نطاقات) | ||
| 10505ES | علامة الحمض النووي GoldBand DL10,000 | 100-10000 زوج أساسي (10 نطاقات) | ||
| 10511ES | سلم الحمض النووي الكامل GoldBand | 100-12000 زوج أساسي (20 نطاقًا) | ||
| 10512ES | علامة الحمض النووي GoldBand DL15000 | 250-15000 زوج أساسي (7 نطاقات) |
2.5 المنشورات التي تستخدم منتجات التحليل الكهربائي للأحماض النووية (Pحرفي)
[1] لوه جيه، يانغ Q، Zhang X، وآخرون. TFPI هو مستقبل القولون لـ TcdB من الفرع 2 شديد الضراوة C. difficile. الخلية. 2022؛185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] هوانغ ن، تشن هـ، غونغ هـ، وآخرون. SeHed، نظام تعبير جيني جديد مع بيروكسيد الهيدروجين الناتج عن الإجهاد خاصية إزالة السموم وتأثير مضاد للشيخوخة. نقل الإشارة والعلاج المستهدف. 2022، 7، 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (IF: 38.1)
[3] Zhang C، Zhou B، Gu F، وآخرون. يؤدي تثبيط PACMP للببتيدات الدقيقة إلى حدوث تأثيرات قاتلة اصطناعية عن طريق تقليل CtIP وبولي (ADP-ريبوزيل). مول الخلية. 2022؛ 82 (7): 1297-1312.e8. doi: 10.1016 / j.molcel.2022.01.020 (IF:17.970)
[4] Zhu M, DaiX. ينتج قمع النمو عن طريق مستويات (p)ppGpp المعدلة عن عدم وجود مستويات مثالية تخصيص الموارد في Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019؛47(9):4684-4693. doi:10.1093/نار/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM,Zhimin L, HarsonowatiW, et al. تحديد مسببات الأمراض الفطرية للسيطرة على ما بعد الحصاد يكشف تحليل المسار المقارن لتحلل فاكهة العاطفة (Passiflora edulis) والجينات المتعددة اللون الأرجواني أكثر مقاومة nt لمسببات الأمراض من الصنف الأصفر. j Fungi (Basel). 2021؛7(10):879. نُشر في 19 أكتوبر 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (إذا: 5.816)
[6] LiT، Zhou B، Luo Z، وآخرون. التوصيف الهيكلي لـ تحييد الجسم النانوي ذو النشاط الواسع ضد متغيرات SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022؛13:875840. نُشرت في 2 يونيو 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (إذا:5.640)
[7] Wang T، Ren D، Guo H، وآخرون. CgSCD1 ضروري لتخليق الميلانين والقدرة على إحداث الأمراض من كوليتوتريكوم gloeosporioides. pathogens. 2020؛9(2):141. نُشر في 20 فبراير 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. نُشر في 20 فبراير 2020. doi:10.3390/مسببات الأمراض9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y، LiX، Zhang H، Zou F، Shen B. ملفات تعريف تعبير CircRNA في الخلايا الحساسة والمقاومة للدلتاميثرين
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). شركات الكيمياء الحيوية Physiol B Biochem Mol Biol. 2022؛261:110750. doi:10.1016 /ج.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. قمع النمو بواسطة (p) ppGpp المعدل النتائج المترتبة على تخصيص الموارد غير الأمثل في Escherichia coli[J]. أبحاث الأحماض النووية، 2019، 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. يكشف مطياف الكتلة الخاص بالسيلينوسيستين عن تيومات السيلينوبروتوينز المرشحة والمميزة للأنسجة[J]. الكيمياء الخلوية علم الأحياء، 2018، 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 المنشورات التي تستخدم منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (جزئيًا)
[1] وانغ يي فو ز, ليكس، وآخرون ال. السيتوبلازم استشعار الحمض النووي بواسطة جامعة كو معقد في مسن CD4+ T خلية يعزز ت خلية نشط نشوء و متعلق بالشيخوخة مناعي ذاتي التهاب. المناعة. 2021؛54(4):632-647.e9. دوي:10.1016/ج.إيمو
2021.02.003(IF:31.745)
[2] يانغ اكس, جاو ف, تشانغ دبليو، وآخرون ال. "نجم" مير-34ا و سي اكس سي ار 4 خصم قائم على نانوبليكس ل ثنائيي تعاونية معالجة الهجرة مرة اخرىت نقيلي صدر السرطان. ج يتحكم الإصدار. 2020؛326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(إذا:7.727)
[3] تشياو واي، دو ج, جي ر, وآخرون ال.أ عينة و كشف إبرة دقيقة رقعة ل صدفية ميكرو آر إن إيه العلامة الحيوية
تحليل في بيني سائل. شرجي الكيمياء. 2022؛94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] لين س، يي س، هوانغ ز, وآخرون ال. الجرافين أساسه أكسيد قمع ل عدم التحديد في حلقة وسيطة إيزوثير سوء التضخيم تمكين الحساسة كشف من السيكلوأكسجيناز-2 الرنا المرسال في القولون والمستقيم السرطان. الشرج الكيمياء. 2019؛91(24):15694-15702. دوي:10.1021/التحليل الكيميائي.9b03861(IF:6.350)
[5] لين س, هوانغ ز،يي إكس، وآخرون ال. مختبر في أ أنبوب: عزل، اِستِخلاص، و يكونأخرى تضخيم كشف ل حويصلات خارجية طويل غير مبرمج الحمض النووي الريبوزي من المعدة سرطان. تالانتا. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] ليو ج, زو ج, وآخرون وآخرون. 5-فورميوراسيل مثل أ متعددوظيفية مبنى حاجز في جهاز استشعار حيوي تصميمات[ج].أنجو كيمياء دولي إد الإنجليزية. 2018 يوليو 26؛57(31):9689-9693.(إذا (11.992)
[7] وانج م, تشانغ س, تشنغ ج, وآخرون ال. اكتساب الوظيفة متاتأيون من البطاقة رقم 14 يؤدي إلى تلقائي شبيه الصدفية جلد الالتهاب من خلال مُحسَّن الخلايا الكيراتينية الرد على IL-17A. المناعة. 2018؛49(1):66-79.e5.
دوى:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19).734)
[8] تشانغ يي دينغ ح، وانغ إكس، وآخرون ال. إم كيه 2 يعزز تى اف سي بي 2 ال 1 التدهور عبر β-TrCP يوبيكويتين لإيجاسي ل تنظيم فأر جذع جنيني تجديد الخلايا ذاتيا. خلية المجلة البريطانية 2021؛37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (إذا: 9.423)
[9] لين س، يي، س، يانغ ب, وآخرون ال. في الوقت الحالى الفلورسنت حلقة وسيطة متحاور مكبر للصوتاتيون فحص ل سريع و حساس كشف من العقدية فصيلة الجالوليتيكوس جالوليتايكوس مرتبط ب القولون والمستقيم السرطان[ج].
تحليلي و التحليل الحيوي الكيمياء 2019، 411(26): 6877-6887. (IF6.35)
[10] لين س، يي س، هوانغ ز, وآخرون ال. الجرافين أساسه أكسيد قمع ل عدم التحديد في حلقة وسيطة إيزوثير سوء التضخيم تمكين الحساسة كشف من السيكلوأكسجيناز-2 الرنا المرسال في اللونكتال السرطان[J]. تحليل كال الكيمياء، 2019. (IF6.35)
الاستشهاد:
[1] Loeb LA, Jr R. DNA polymerases and human disease[J]. Nature Reviews Genetics.