Celletransfektion er en teknik til at introducere eksogene nukleinsyrer (såsom DNA, mRNA, siRNA, miRNA osv.) i celler, og den spiller en afgørende rolle i moderne biomedicinsk forskning. Efterhånden som videnskabelig forskning fortsætter med at dykke dybere, er efterspørgslen efter en række forskellige celletyper også blevet stadig mere forskelligartet, lige fra almindelige HEK293-celler til specielle typer tumorceller og primære celler, hver med sine unikke egenskaber og krav. Tilsvarende kræver forskellige typer nukleinsyrer også specifikke transfektionsstrategier for at sikre effektiv og sikker genlevering. Derfor er valg af det rigtige transfektionsreagens afgørende for eksperimentets succes.
Kemiske transfektionsreagenser er uundværlige værktøjer i cellebiologisk forskning, som introducerer nukleinsyrer som DNA, mRNA, siRNA, miRNA osv. i celler gennem forskellige mekanismer for at opnå genekspression, lyddæmpning eller funktionelle undersøgelser. I øjeblikket omfatter almindeligt anvendte kemiske transfektionsreagenser hovedsageligt liposomtransfektionsreagenser, PEI-transfektionsreagenser og calciumphosphattransfektionsreagenser, hver med sine unikke fordele og anvendelige scenarier.
Tabel 1: Hvad er forskellene mellem forskellige kemiske transfektionsreagenser
| Produktkategori | Princip | Fordele | Ulemper |
| Liposomtransfektionsreagens | 1. Liposomtransfektionsreagenser har positivt ladede lipider, der binder til negativt ladede nukleinsyrer for at danne lipid-nukleinsyrekomplekser. 2. Disse komplekser tiltrækkes af den negativt ladede cellemembran. 3. Cellen opsluger komplekserne til endosomer gennem endocytose. 4. Lipidernes "protonsvamp"-effekt i komplekserne forhindrer endosom-forsuring, hvilket fører til membrandestabilisering og brud, hvorved komplekserne frigives til cytoplasmaet. 5. Små nukleinsyrer som siRNA, miRNA eller mRNA kan arbejde i cytoplasmaet, mens DNA skal ind i kernen for at blive udtrykt. 6. Når det først er i kernen, transskriberes DNA til mRNA og oversættes til proteiner, der udtrykker det fremmede gen. | 1. Liposomtransfektionsreagenser tilbyder høj effektivitet med forskellige cellelinjer, herunder primære celler, der er svære at transficere. 2. De er alsidige, kompatible med både adhærente og suspensionsceller og forskellige nukleinsyrer som DNA, siRNA og miRNA. 3. Disse reagenser fungerer godt i serumholdige medier og undgår behovet for at fjerne serum og minimerer dermed celleskade. | 1. Liposomtransfektionsreagenser kan være toksiske for celler, især ved høje koncentrationer eller over lange perioder, hvilket potentielt påvirker cellernes overlevelse og funktion. 2. De er dyrere sammenlignet med traditionelle metoder som calciumphosphattransfektion. 3. Deres in vivo anvendelse er begrænset på grund af serumclearance, akkumulering i lungevæv og potentiale til at forårsage stærke inflammatoriske reaktioner og høj toksicitet. |
| PEI transfektionsreagens | 1. PEI, en positivt ladet polymer, binder til negativt ladet DNA for at danne PEI-DNA-komplekser gennem elektrostatiske interaktioner. 2. Disse komplekser binder sig til den negativt ladede cellemembran. 3. Celler opsluger PEI-DNA-komplekserne gennem endocytose og danner endosomer. 4. PEIs "protonsvamp"-effekt får endosomer til at svulme og briste i det sure miljø, hvorved komplekserne frigives til cytoplasmaet. 5.I cytoplasmaet brydes PEI-DNA-bindinger, hvilket tillader DNA at trænge ind i kernen, hvor det transskriberes og oversættes til proteiner. | 1. PEI-transfektionsreagenser danner stabile komplekser med DNA, hvilket øger transfektionseffektiviteten. 2. De har lavere cytotoksicitet sammenlignet med andre kationiske polymerer, hvilket bevarer cellernes levedygtighed og funktion. 3. PEI-reagenser tilbyder en omkostningseffektiv løsning, især til transfektioner i stor skala som viral vektorproduktion. 4. PEI-reagenser er tilgængelige i GMP-kvalitet til klinisk og kommerciel produktion, hvilket sikrer kvalitet og overensstemmelse. | 1. PEI-transfektionsreagenser har begrænset alsidighed, primært brugt til DNA og mindre effektive med andre nukleinsyrer som mRNA, siRNA og miRNA. 2. De viser høj effektivitet i specifikke celletyper, såsom HEK293-celler, til viruspakning og proteinekspression, men fungerer dårligt med celler, der er svære at transficere. |
| Calciumphosphat-transfektionsreagens | 1. DNA/calciumphosphat co-præcipitater dannes i HEPES buffer med fosfat, hvor DNA's negative ladning binder til positive calciumioner. 2. Celler opsluger disse co-præcipitater, som klæber til deres overflade, gennem endocytose, et kritisk trin for transfektionseffektivitet. 3. Inde i celler frigiver co-præcipitaterne DNA, hvilket kan føre til forbigående ekspression eller stabil integration i genomet. | 1. Calciumphosphattransfektion er omkostningseffektiv, velegnet til laboratorier med begrænsede budgetter. 2. Det er nemt at udføre, kræver enkle trin og minimale tekniske færdigheder. 3. Det kan bruges til både forbigående proteinekspression og til at skabe stabile cellelinjer. | 1. Calciumphosphat-transfektionseffektiviteten er variabel og følsom over for faktorer som pH og DNA-renhed, hvilket kan føre til mislykkede transfektioner, især med urent DNA. 2. Det er ikke egnet til alle celletyper, hovedsagelig brugt til HEK293-celler og mindre effektivt til primære celler og nogle andre celletyper. |
Yeasen Biotech, der udnytter sine stærke R&D-kapaciteter og produktionsteknologiteam, optimerer løbende formuleringerne af DNA- og RNA-transfektionsreagenser og forbedrer produktionsprocesserne. Virksomheden har lanceret en diversificeret produktlinje baseret på kationiske liposomer og kationiske polymerer for at imødekomme de brede behov hos forskningsinstitutioner og virksomheder inden for transfektionsreagenser. Disse produkter dækker forskellige anvendelser af transfektionsreagenser og har følgende fordele:
Bred anvendelighed: I stand til effektivt at transficere plasmid-DNA, siRNA, miRNA og mRNA.
Høj transfektionseffektivitet: Celletransfektionseffektiviteten overstiger 90%, hvilket opfylder behovene for co-transfektion af flere plasmider.
Verificeret på tværs af flere cellelinjer: Påvist god transfektionseffektivitet i over 40 forskellige cellelinjer.
Bredt udvalg af applikationer: Anvendes til stabil cellelinjekonstruktion, forbigående proteinekspression og AAV og LV viral pakning.
Høj citationsfrekvens i litteratur: Citeret i over 400 publikationer med stor effekt, med en samlet effektfaktor på over 3000+.
Sådan vælger du et transfektionsreagens, der passer til dine behov
I betragtning af de særlige krav til transfektionseffektivitet og betingelser i forskellige celletyper og nukleinsyrer (såsom DNA, mRNA, siRNA osv.), er udvælgelsen af det rigtige transfektionsreagens afgørende for forsøgets succes.Baseret på eksperimentets specifikke behov skal du vælge et transfektionsreagens, der kan optimere transfektionseffektiviteten og minimere cytotoksicitet for at sikre nøjagtigheden af eksperimentelle data og robustheden af eksperimentelle resultater. YEASEN Biotech tilbyder en række produkter, der er optimeret til forskellige anvendelsesscenarier, hvilket sikrer, at du kan finde det bedst egnede transfektionsreagens til dine forskningsformål og opfylde dine specifikke eksperimentelle behov.
Sagsfremstilling
I et 6-brønds pladesystem blev GFP-udtrykkende plasmider transficeret ind i HEK293-celler under anvendelse af YEASEN 40802ES transfektionsreagens og en konkurrents transfektionsreagens. GFP-ekspressionen i transficerede celler blev observeret under et mikroskop 48 timer efter transfektion. YEASEN's transfektionsreagenss ydeevne var overlegen.
I en 12-brønds plade blev HEK293-celler transficeret med i alt 1 μg plasmid-DNA; under anvendelse af 3 μL transfektionsreagens var det muligt at co-transficere to plasmider med succes.
Kundesag
Valideret på tværs af flere cellelinjer med en bredere vifte af applikationer.
| Celler | Celler | Celler | Celler | Celler |
| 293F | Caco2 | HEK 293T | LM3 | NIH-3T3 |
| 293T | CHO-K1 | HEK293 | MCF10A | PC12 |
| 3t3 | COS-7 | HeLa | MCF-7 | Raw264.7 |
| 5-8F | DF-1 | Hep 3B | MDA-MB-231 | RKO |
| A549 | H520 | Hepa1-6 | MEF | SGC-7901 |
| BV-2 | H9 | HepG2 | MKN-28 | SMCC7721 |
| C2C12 | H9c2 | HUVEC | N2A | Vero |
| C6 | HaCaT | Lenti X-293T | NCI-H1975 | HCT116 |
| WRL-68 | THP-1 | MDCK | Hep2C | Mere… |
Produktliste
| Kattenummer | Produktnavn | Nukleinsyre | Anvendelse |
| 40802ES | DNA | Højtydende liposomtransfektionsreagens | |
| 40804ES | LV | Forbedre lentiviral infektionsevne. | |
| 40806ES | siRNA, miRNA, ASO | siRNA- og miRNA-specifikke transfektionsreagenser med høj knockdown-effektivitet. | |
| 40808ES | DNA, siRNA, miRNA | Opgraderet liposomtransfektionsreagens, der kan udføre DNA- og RNA-transfektioner i forskellige celletyper, som stadig viser gode effekter på vanskelige at transficere celler. | |
| 40809ES | mRNA | mRNA-specifikt transfektionsreagens med høj transfektionseffektivitet i en række celletyper. | |
| 40815ES | DNA | Bredt anvendelig til proteinekspression og viral pakning (pulverform). | |
| 40816ES | Hieff Trans®Polyethylenimin Lineær (PEI) MW40000(hurtig lysis) | DNA | |
| 40820ES | DNA | Dedikerede transfektionsreagenser til viral pakning, i stand til at opnå højere udbytter for AAV og LV viral pakning | |
| 40821ES | DNA | ||
| 40823ES | DNA | Den højeste transfektionseffektivitet. Særligt velegnet til produktion af AAV i suspensionskultur, hvilket giver højere output. |
Citeret i flere publikationer med stor gennemslagskraft, hvilket sikrer kvalitet (delvis liste over citerede referencer)
- Liang X, Gong M, Wang Z, et al. LncRNA TubAR komplekserer med TUBB4A og TUBA1A for at fremme mikrotubulussamling og opretholde myelinisering. Cell Discov. 2024;10(1):54. Udgivet 2024 21. maj doi:10.1038/s41421-024-00667-y. IF=33,5(40808ES)
- Wang A, Chen C, Mei C, et al. Medfødt immunfornemmelse af lysosomal dysfunktion driver flere lysosomale lagringsforstyrrelser. Nat Cell Biol. 2024;26(2):219-234. doi:10.1038/s41556-023-01339-x.IF=21,3(40802ES)
- Liu H, Zhen C, Xie J, et al. TFAM er en autofagi-receptor, der begrænser inflammation ved at binde til cytoplasmatisk mitokondrie-DNA. Nat Cell Biol. 2024;26(6):878-891. doi:10.1038/s41556-024-01419-6.IF=21,3(40802ES)
- Wang WW, Ji SY, Zhang W, et al. Strukturbaseret design af ikke-hypertrofisk apelinreceptormodulator. Celle. 2024;187(6):1460-1475.e20. doi:10.1016/j.cell.2024.02.004.IF=64,5(40802ES)
- Ke J, Pan J, Lin H, et al. Målretning af Rab7-Rilp-medieret mikrolipofagi lindrer lipidtoksicitet ved diabetisk kardiomyopati. Adv Sci (Weinh). Udgivet online 5. juni 2024. doi:10.1002/advs.202401676.IF=15,1(40806ES)
- Jiang L, Xie X, Su N, et al. Store Stokes skifter fluorescerende RNA'er til dobbeltemissionsfluorescens og bioluminescensbilleddannelse i levende celler. Nat Metoder. 2023;20(10):1563-1572. doi:10.1038/s41592-023-01997-7.IF=48(40802)
- Lou M, Huang D, Zhou Z, et al. DNA-virus oncoprotein HPV18 E7 antagoniserer selektivt cGAS-STING-udløst medfødt immunaktivering. J Med Virol. 2023;95(1):e28310. doi:10.1002/jmv.28310.IF=20,69(40802ES)
- Su J, Shen S, Hu Y, et al. SARS-CoV-2 ORF3a hæmmer cGAS-STING-medieret autofagi-flux og antiviral funktion. J Med Virol. 2023;95(1):e28175. doi:10.1002/jmv.28175.IF=20,69(40802ES)
- Lu YY, Zhu CY, Ding YX, et al. Cepharanthine, en regulator af keap1-Nrf2, hæmmer vækst af mavekræft gennem oxidativ stress og energimetabolisme. Celledød Discover. 2023;9(1):450. Udgivet 2023 12. december doi:10.1038/s41420-023-01752-z.IF=7(40806ES)
- Li X, Zhang Y, Xu L, et al. Ultrafølsomme sensorer afslører det spatiotemporale landskab af laktatmetabolisme i fysiologi og sygdom. Celle Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002.IF=31.373(40802ES)
- Li X, Zhang Y, Xu L, et al. Ultrafølsomme sensorer afslører det spatiotemporale landskab af laktatmetabolisme i fysiologi og sygdom. Celle Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002.IF=31.373(40804ES)
- Huang Y, Motta E, Nanvuma C, et al. Microglia / makrofag-afledt human CCL18 fremmer gliomprogression via CCR8-ACP5-aksen analyseret i humaniseret skivemodel. Cell Rep. 2022;39(2):110670. doi:10.1016/j.celrep.2022.110670.IF=8,8(40804ES)
- Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. En bakteriel phospholipid phosphatase hæmmer værtens pyroptose ved at kapre ubiquitin. Videnskab. 2022;378(6616):eabq0132. doi:10.1126/science.abq0132.IF=63.714(40802ES)
- Liu R, Yang J, Yao J, et al. Optogenetisk kontrol af RNA-funktion og metabolisme ved hjælp af konstruerede lys-omskiftelige RNA-bindende proteiner. Nat Biotechnol. 2022;40(5):779-786. doi:10.1038/s41587-021-01112-1.IF=54.908(40802ES)
- Chen S, Chen G, Xu F, et al. Behandling af allergisk eosinofil astma gennem konstruerede IL-5-forankrede kimære antigenreceptor-T-celler. Cell Discov. 2022;8(1):80. Udgivet 2022 16. august doi:10.1038/s41421-022-00433-y.IF=38.079(40804ES)