——Mere genotypning, mindre tid og færre reagenser
PCR-baseret genotypning og andre eksperimenter kræver ofte oprensning af genomisk DNA fra prøver. Når der er mange prøver, der skal testes, er processen med at oprense genomisk DNA tidskrævende, gentagne og dyr. YEASEN Biology har udviklet en serie af Direct PCR Kit-produkter ved at modificere Taq DNA-polymerase og optimere PCR-reaktionssystemet, hvilket eliminerer behovet for genomisk oprensning.
Smart PCR: Direkte PCR
YEASEN's Direct PCR Kit starter direkte fra prøven ved at bruge minimale mængder af råprøver (Figur 1-A) eller deres lysatprodukter (Figur 1-B) uden genomisk oprensning som skabeloner til PCR-baseret Genotyping (Figur 1). Sammenlignet med konventionel PCR-baseret Genotyping bruger Direct PCR Kit mindre prøve, er let at betjene, har lave eksperimentelle omkostninger og giver mulighed for prøvedetektion med høj gennemstrømning.
Fig.1 Direkte PCR-forstærkningsarbejdsgang
A. Direkte metode: Tag en lille mængde af prøven og tilføj den direkte til PCR-masterblandingen til PCR-identifikation.Tekniske fordele
Direkte: Intet behov for tidskrævende og dyr DNA-oprensning.
Hurtigt: Skabelonforberedelse afsluttet på 10 minutter, og PCR-reaktion afsluttet på så lidt som 30 minutter.
Enkel: Prøver kan lyseres uden behov for skæring eller formaling, og PCR-blandingen er i en forblandet form, hvilket reducerer antallet af pipettering.
Besparelse: Lille mængde anvendte materialer.
High-throughput: Lysereaktioner kan fuldføres i en 96-brønds plade.
Hæmningsresistent: Tolerant over for forskellige dyre- og planteprøver.
Direkte PCR Kit eksperimentel proces
Denne serie af produkter bruger et unikt proteaselyseringssystem til at lysere prøver. Lysisopløsningen kan bruges direkte som skabelon og parres med PCR-mastermixet, der følger med kittet til genamplifikation.
Fig. 2 Direkte PCR-eksperimentproces af musevæv
Fig.3 Proces med direkte PCR-eksperiment på plantevæv
Direkte PCR produktvalgtabel
| Produktserie | Mouse Direct PCR anden generation | |||
| Produktnummer | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Specifikationer | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 T/200 T | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 T/200 T |
| Funktioner | ||||
| Amplikon længde | ≤5 kb | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb |
| Forlængelsestid (s/kb) | 3-20 sek | 30 sek | ≤2 kb: 3-5 s ≤8 kb: 10 s | 60 sek |
| Anvendelige organismer | Mus, rotter | Mus, rotter | Mennesker, mus, geder, høns, grise osv. | Ris, majs, tobak, raps, hvede, sojabønner osv. |
| Gældende vævs-/materialetyper | Musehale, museøre, tæer (med muskler) og andre organer | Musehale, museøre, tæer (med muskler) og andre organer | Frisk blod indeholdende almindelige antikoagulanter som EDTA, heparin, citrat, nedkølet (frosset) blod og kommercielle tørrede blodpletter som Whatman903® og FTA® | Møre blade, Gamle blade, Frøplanter, Møre stængler |
| Eksempel på brug | Væv: 5 mg Musehale: 1-5 mm | Væv: 5-10 mg Musehale: 1-5 mm | Fuldblod: 0.5%-20% Whatman® tørrede blodpletter: 1 mm2 | Blad: 1-10 mm Frø: 1-3 mm |
| Genomisk udgivelsestid | 5-10 min | 15 min | 0-3 min | 0-10 min |
| Produktets slutstruktur | Stumpe ender | Stumpe ender | Stumpe ender | Stumpe ender |
| Udglødningstemperatur | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| GC Clipping Range | 29-70 % | 30-70 % | 30-75 % | 40-65 % |
| 5'-3' exonukleaseaktivitet | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Ansøgninger | ||||
| Genotyping | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Multiplex PCR | Op til 5x |
| Op til 3-4x |
|
| Direkte prøveforstærkning | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Andre funktioner | ||||
| Elektroforeseindikator | Farveløs | Blå | Farveløs | Blå |
| Hot Start | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Forblandet/Kit | Kit (med blanding) | Kit (med blanding) | Kit (med Mix+buffer) | Kit (med blanding) |
Produktfordele
Den modificerede Taq DNA-polymerase er garantien for Direct PCR: Den har supertolerance over for inhibitorer.
Når ikke-oprensede prøver anvendes som skabeloner, introduceres mange komponenter, der hæmmer PCR-reaktioner. Det er vanskeligt at opnå ideelle resultater, eller endda umuligt at udføre PCR-amplifikation, med almindelige PCR-reaktionssystemer og Taq DNA-polymerase. PCR-blandingen i denne serie af kits er en formel-optimeret præmix, der anvender en modificeret Taq DNA-polymerase, som øger bindingsevnen til template-DNA og har højere tolerance over for almindelige PCR-hæmmere, og dermed har en bredere template-tilpasningsevne.
Fig.4 PCR-blandingen i Direct PCR-sættet har en højere tolerance over for urenheder. Den samme mængde skabelon bruges til PCR med forskellige PCR-blandinger, og forskellige koncentrationer af PCR-reaktionshæmmere tilsættes til systemet. Mængden af PCR-produkter under forskellige betingelser sammenlignes.
YLIDT har udviklet en række produkter til forskellige prøver:
- I. Gnaverspecifik type: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)
Gældende prøver: Musevæv (såsom musehale, museøre, musetå osv.)
- Høj forstærkningseffektivitet (længde, hastighed, GC-kompatibilitet)
Fig.5 Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus amplificerer lysater fra forskellige væv. 1: Plasmid; 2: Museøre; 3: Musehale; 4: Lever. Lyseringsbetingelser: 70°C lysering i 10 minutter, 95°C inaktivering i 5 minutter. Målfragmenterne er 1 kb, 2 kb, 3 kb og 6 kb, med forlængelsestider indstillet til henholdsvis 3, 5, 10 og 20 sek/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Bred skabelonkompatibilitet (10189ES)
Fig.6 Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus blev brugt til direkte at lysere (70°C i 10 min) og amplificere humane 293-celler (1), spyt (2) og hovedbundsvæv (3). Alle prøver viste klare målbånd, M: 10510ES60 (YEASEN).
- II. Multi-species Blood Universal Type: Blood Advanced Direct PCR Kit (10188ES)
- Forstærkningslængde op til 8 kb
Fig. 7 DNA-fragmenter af varierende længder blev amplificeret direkte fra humant fuldblod under anvendelse af Blood Advanced Direct PCR-kittet. Blodprøverne blev opbevaret ved -20 ℃ med EDTA som antikoagulant. Blodskabelonkoncentrationen var 10 %, og forlængelsestiden blev sat til 10 sek/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Høj tolerance
Fig.8 A: Blood Advanced Direct PCR-kittet bruges til at amplificere et 2 kb DNA-fragment med et GC-indhold på 71 % direkte fra humant EDTA-antikoaguleret fuldblod. Blodskabelonkoncentrationen er gradientindstillet fra 0,5-50 %, og forlængelsestiden er indstillet til 10 sek/kb. B: Blood Advanced Direct PCR-kittet bruges til at amplificere et 2,2 kb DNA-fragment med et GC-indhold på 67 % direkte fra muse-EDTA-antikoaguleret fuldblod. Blodskabelonkoncentrationen indstilles fra 0,5-50 %, og forlængelsestiden er 10 sek/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- III. Plantespecifik type: Plant Tissue Direct PCR Kit (10187ES)
- Verificeret med flere typer planteprøver
Fig. 9 Direkte amplifikation er resultatet af bladvæv fra forskellige typer planter. M: 100 bp DNA-stige. C: Oprenset genomisk DNA fra de tilsvarende planter som skabelon. 1-2: Bladvævslysat som skabelon. Antal cyklusser: 30 cyklusser.
Kundesag
- I. Musegenotypeidentifikation
Et biologisk firma i Guangzhou:
Fig. 10 Amplifikation af musehale ved hjælp af Mouse Direct PCR Kit (10189ES). Målgen: 500 bp; Lysetid: 10 min; PCR reaktionssystem: 25 μL, forlængelsestid: 5 sek/kb.
- II.Rice Gene Direct Amplifikation
XX Universitet
Fig.11 Plant Direct PCR Kit (10187ES) bruges til at amplificere gener relateret til ris.
Ropstemt Pprodukter
| Produktpositionering | Produktnavn | Produktnummer | Produktspecifikation |
| Høj kvalitet agarose | 10208ES60/76 | 100 g/500 g | |
| Nukleinsyrepletter (UV-lys) | 10202ES76 | 500 μL | |
| Hurtig PCR-opgradering, kan være koloni-PCR og egnet til kompleks skabelonamplifikation | 10167ES03/08 | 1 mL/5×1 mL |