Revers transkription er processen med at omdanne RNA til komplementært DNA (cDNA), som medieres af revers transkriptase-enzymet. I nærvær af annealingsprimere binder revers transkriptase først til RNA-skabelonen. Den RNA-afhængige DNA-polymeraseaktivitet af revers transkriptase syntetiserer cDNA ved at inkorporere dNTP'er fra reaktionsblandingen. Denne proces resulterer i dannelsen af en cDNA:RNA-hybridstreng, som er kendt som den første-strengs cDNA-syntese.
Moloney murine leukæmivirus (M-MLV) revers transkriptase er en af de almindeligt anvendte reverse transkriptaser i molekylærbiologiske laboratorieprocedurer. For at opnå højere revers transkriptionseffektivitet, bedre termisk stabilitet og en øget hastighed af cDNA-syntese er den originale revers transkriptase ofte gensplejset. I øjeblikket kræver de revers transkriptionsreagenser, der er tilgængelige på markedet, typisk reaktionstider i området fra 15 til 30 minutter, hvilket er relativt langt. Når antallet af reaktionsprøver er stort, kan det samlede tidsforbrug stige dramatisk. YESSENs eksisterende 5-minutters reverse transcription-produkter kan fuldføre reverse transkriptionsprocessen på kun 5 minutter, hvilket sparer tid og er yderst effektivt.
| Pprodukt Ppositionering | Produktnavn | Kat# |
| Hurtig, effektiv og højtydende omvendt transkriptionspræmix | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix til qPCR | 11156ES |
| Hurtig, effektiv og højtydende omvendt transkriptionspræmix (med gDNA-fjernelse) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix til qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| Hurtig et-trins afslutning af gDNA-fjernelse og omvendt transkription-præmix | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix til qPCR | 11151ES |
| Fleksibel Primer Selection Rapid Reverse Transcription Kit (med gDNA-fjernelse) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (ingen farvestof) | 11150ES |
| Fleksibel Primer Selection Rapid Reverse Transcription Kit (med gDNA-fjernelse og sporingsfarve) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit | 11149ES |
Boutique-anbefaling 1
Hurtig, effektiv og højtydende omvendt transkriptionspræmix (med gDNA-fjernelse) (kat #11155ES)
Højt omvendt transkriptionsudbytte fra forskellige skabeloner
| Prøve | 293T Celle | Arabidopsis thaliana | Mus | Fiskelever |
| 11155ES | 23,4↓ | 19,6↓ | 24,9↓ | 21.1↓ |
| Mærke A | 24.9 | 21.3 | 27,5 | 21.3 |
| Mærke B | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| Mærke C | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| Mærke D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
Figur. Omvendt transkription blev udført under anvendelse af RNA-skabeloner fra humane 293T-celler, Arabidopsis thaliana, muselever og fiskelever. Mærke A, B, C og D er alle to-trins fordøjelsesrevers transkriptionsreagenser med varierende revers transkriptionstider fra 15 til 20 minutter. Testresultaterne viser, at Hifair 11155ES 5-minutters reverse transcription kit udmærker sig med højere udbytte sammenlignet med andre mærker, og Ct-værdierne er lavere.
Boutique-anbefaling to
5-minutters et-trins fordøjelse og omvendt transkription præmix (kat #11151ES)
Højt omvendt transkriptionsudbytte
Figur. Ved at bruge humant 293T-celle-RNA som skabelon blev tre gener testet hhv. Mærke A, B og C er alle et-trins gDNA-fjernelse og revers transkriptionsreagenser. Testresultaterne viser, at med et input på 1 μg og 10 ng Total RNA er udbyttet af revers transkription med 11151ES-kittet bedre end andre mærker med mindre Ct-værdier.
Figur. Ved at bruge Arabidopsis thaliana RNA som skabelon er mærkerne A, B og C alle et-trins gDNA-fjernelse & revers transkriptionsreagenser. Testresultaterne viser, at med et input på 1 μg og 10 ng Total RNA er udbyttet af revers transkription med 11151ES-kittet bedre end andre mærker med mindre Ct-værdier.
Fremragende følsomhed
Figur. Ved at bruge humant 293T-celle-RNA som skabelon blev gener med 30% GC-, 50% GC-, 60% GC- og 70% GC-indhold amplificeret. Samlet RNA-input på 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng og 1 μg blev brugt til omvendt transkription efterfulgt af fluorescerende kvantitativ detektion. Resultaterne viser, at 11151ES kan rumme revers transkription for RNA-input fra 100 pg til 1 μg.
Boutique-anbefaling Ttre
5-Minute Rapid Reverse Transcription Kit(Kat #11149/11150ES)
Høj følsomhed, med en minimum detektionsgrænse ned til 10 pg
Figur. Ved at bruge totalt RNA fra 293T-celler som skabelonen blev revers transkription udført med 11149ES, og det resulterende cDNA blev underkastet kvantitativ qPCR-analyse. Resultaterne viser, at 11149ES med succes kan reversere transkribere RNA-input fra 10 pg til 1 μg, hvilket sikrer nøjagtige kvantitative resultater.
God amplifikationsydelse med den længste amplifikation af et 14 kb fragment
Figur.Ved anvendelse af totalt RNA fra 293T-celler som skabelon blev revers transkription udført med 11149ES, og det resulterende cDNA blev underkastet PCR-detektion. Resultaterne indikerer, at 11149ES er i stand til at syntetisere cDNA-fragmenter i området fra 1 kb til 14 kb i længden, med efterfølgende PCR med visse anvendelige scenarier. Hvis direkte revers transkription af fragmenter over 10 kb er påkrævet, anbefales det at forlænge revers transkriptionstiden til 20-30 minutter for at sikre erhvervelsen af de endelige fragmenter.
Sammenligning af revers transkriptionseffektivitet
| RNA-inputmængde | Ct værdi | |
| 11149ES | Mærke A | |
| 1 μg | 15.2 | 15.5 |
| 100 ng | 18,0 | 18.5 |
| 10 ng | 21 | 21.7 |
| 1 ng | 24.5 | 25.1 |
| 100 sider | 29.1 | 29,7 |
| 10 pg | 32,7 | 34,3 |
Figur. Ved anvendelse af totalt RNA fra 293T-celler som skabelon blev revers transkription udført med 11149ES og Brand A, hvor 11149ES ikke undergik gDNA-fjernelsestrinnet. Det resulterende cDNA blev underkastet qPCR kvantitativ analyse. Resultaterne viser, at den omvendte transskriptionstid for mærke A var 13 minutter, mens den for 11149ES var 5 minutter. Den kvantitative analyse af forskellige produkter afslører, at Ct-værdierne for 11149ES er mindre eller ligner dem for det konkurrerende mærke, hvilket indikerer, at den 5-minutters reverse transkriptionseffektivitet for 11149ES er bedre end eller tilnærmelsesvis ækvivalent med den for Brand A.
| RNA-inputmængde | Ct værdi | |
| 11149ES | Mærke B | |
| 1 μg | 16.2 | 17.4 |
| 100 ng | 19,0 | 20.5 |
| 10 ng | 22 | 23.8 |
| 1 ng | 26 | 27,9 |
| 100 sider | 31.4 | 33,2 |
| 10 pg | 32,9 | 35,6 |
Figur.Ved at bruge totalt RNA fra 293T-celler som skabelonen blev revers transkription udført med 11149ES og Brand B, hvor 11149ES ikke undergik gDNA-fjernelsestrinnet. Det resulterende cDNA blev udsat for qPCR kvantitativ analyse. Resultaterne viser, at den omvendte transskriptionstid for Brand B var 20 minutter, mens den for 11149ES var 5 minutter. Den kvantitative analyse af forskellige substratmængder afslører, at Ct-værdierne for 11149ES er mindre eller ligner dem for mærke B, hvilket indikerer, at 5-minutters revers transkriptionseffektiviteten af 11149ES er overlegen eller omtrent ækvivalent med den for mærke B.
Anbefalede relaterede produkter
| Metode | Pprodukt Ppositionering | Produktnavn | Kat# |
| Farvestofbaseret qPCR | Universel kvantitativ forblanding med høj specificitet (farvestofbaseret) | Hieff UNICON™ avanceret qPCR SYBR Master Mix | 11185ES |
| Højfølsom universel kvantitativ forblanding (farvestofbaseret) | 11184ES | ||
| Omvendt transskription | 5-minutters et-trins fordøjelse og omvendt transkription præmix (til qPCR) | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix til qPCR | 11151ES |
| 5-minutters hurtig revers transkription, i stand til op til 14 kb cDNA-syntese, med gDNA-fjernelse (til PCR/qPCR) - Tracer-version | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit | 11149ES | |
| 5-minutters hurtig revers transkription, i stand til op til 14 kb cDNA-syntese, med gDNA-fjernelse (til PCR/qPCR) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit（Ingen farvestof） | 11150ES | |
| Førstestrengs cDNA-syntese-præmix af høj kvalitet med gDNA-fjernelse (til qPCR) | Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix til qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES |