Einführung
Luciferase-Reportergen-Assay-Kits sind unverzichtbare Kerninstrumente in der Arzneimittelentwicklung und spielen aufgrund ihrer Fähigkeit, Genexpression und Signalübertragung in Echtzeit zu überwachen, eine entscheidende Rolle in Schlüsselprozessen wie Hochdurchsatz-Screening, Wirksamkeitsbewertung und Zielvalidierung. Die Anwendung dieser Technologie hat die Effizienz des Arzneimittelscreenings und der Arzneimittelbewertung deutlich verbessert und die Entdeckung und Entwicklung neuer Arzneimittel beschleunigt.
Prinzip der Luciferase-Reportergen-Erkennung
Die Technologie zur Erkennung von Luciferase-Reportergenen ermöglicht die quantitative Analyse der Aktivität von Glühwürmchen-Luciferase, indem sie die Oxidation von Luciferin zu Oxyluciferin katalysiert und Biolumineszenz erzeugt. Diese Technologie hat einen erheblichen Anwendungswert in den Bereichen der Validierung von miRNA-Zielgenen und der Regulierung der transkriptionellen Aktivität von Promotoren. Durch Einfügen von regulatorischen Elementen des Zielgens vor und nach dem Luciferase-Gen zur Konstruktion eines Luciferase-Reporterplasmids können Zellen transfiziert und einer entsprechenden Stimulation oder Behandlung unterzogen werden. Anschließend können durch Lysieren der Zellen und Messen der Luciferase-Aktivität die Aktivitätsänderungen der regulatorischen Elemente unter verschiedenen Stimulationsbedingungen bewertet werden, wodurch ein tieferes Verständnis der Regulationsmechanismen des Gens gewonnen wird. Ausdruck.
Die Unterschiede zwischen Einzel- und Dual-Luciferase-Erkennungsanwendungen
Reportergenassays werden hauptsächlich in Einzel-Luciferase-Reportergenassays und Dual-Luciferase-Reportergenassays unterteilt. Wie können Sie in bestimmten Anwendungen feststellen, ob bei einem Experiment ein Einzel-Luciferase- oder Dual-Luciferase-Erkennungssystem verwendet wird? Werfen wir einen Blick auf die Unterschiede.
Einzelnes Luciferase-Reporter-Assay-System
Anzahl der Reportergene: Ein einzelnes Glühwürmchen-Luciferase-Reportergen;
Transfektionstyp: Ein einzelnes Reportergenplasmid wird nach der Transfektion und Arzneimittelselektion verwendet, um eine stabile Reportergenzelllinie zu konstruieren, die Luciferase exprimiert;
Erkennungsprozess: Es muss nur das Glühwürmchen-Luciferase-Signal erkannt werden. Einfache Handhabung, kurze Erkennungsdauer, geeignet für Hochdurchsatz-Arzneimittelscreening.
Analyse des Anwendungsszenarios: Dies geschieht normalerweise durch die Konstruktion einer stabilen überexprimierenden monoklonalen Zelllinie, da der Expressionsgrad dieser Zelllinien relativ stabil und einheitlich ist und nicht durch experimentelle Schwankungen aufgrund der Transfektionseffizienz und Zelllebensfähigkeit beeinflusst wird. Der Vorgang ist einfach und da nur das Glühwürmchen-Luciferase-Signal erkannt wird, ist die Datenanalyse bequemer. In Verbindung mit den Vorteilen einer kurzen Erkennungszeit ist es besonders für das Arzneimittelscreening mit hohem Durchsatz geeignet und erfüllt die Anforderungen der Probenerkennung im großen Maßstab.
Dual-Luciferase Reportergen-Erkennungssystem
Gemeldete Genmenge: Duale Reportergene der Glühwürmchen-Luciferase und der Renilla-Luciferase;
Transfektionstyp: Kotransfektion zweier Reportergenplasmide, hauptsächlich durch transiente Transfektion;
Erkennungsprozess: Es ist notwendig, zuerst das Glühwürmchensignal und dann das Renilla-Signal zu erkennen, und das Verhältnis der beiden (Glühwürmchen/Renilla) wird für die endgültige Datenberechnung verwendet;
Analyse des Anwendungsszenarios: Dies geschieht im Allgemeinen durch vorübergehende Transfektion mit der Kotransfektion eines Plasmids, das das Renilla-Luciferase-Gen als interne Referenz enthält, wodurch ein Maßstab für das Experiment bereitgestellt wird und die Interferenz externer Faktoren wie Zelllebensfähigkeit und Transfektionseffizienz reduziert wird. Durch Verhältnisberechnung ist es möglich, Abweichungen in Zellzahl, Transfektionseffizienz und Zellaktivität zu korrigieren und so die Genauigkeit der Versuchsergebnisse zu verbessern. Es ist ein wichtiges Instrument in den Bereichen der Regulierung der Genexpression, der Signalübertragungswege und des Arzneimittelscreenings.
Produktserie
| Produktname | Bio-Ein Schritt | Immer einen Schritt voraus | Bright-One-Schritt |
| Produktcode | |||
| Anwendungsszenarien und Eigenschaften | Dieses Kit stellt ein relatives Gleichgewicht zwischen Signalintensität und Stabilität her. Es behält eine relativ hohe Signalintensität bei und hält die Signalintensität über einen bestimmten Zeitraum hinweg relativ stabil. | Die Halbwertszeit kann mehr als 5 Stunden betragen. Insbesondere innerhalb der ersten 2 Stunden sind die Änderungen des Lumineszenzwerts minimal. Es ist für Ultrahochdurchsatz- oder 384-Well-Plattenassays geeignet. | Hohe Empfindlichkeit und hohe Signalintensität. Geeignet für Experimente, die eine hohe Empfindlichkeit erfordern. |
| Signalhalbwertszeit | 60 Min. | 5 h | 30 Minuten |
| Betriebsmerkmale | Ein Schritt | Ein Schritt | Ein Schritt |
Produktvorteile
Lange Signalhalbwertszeit: Die Signalhalbwertszeit kann bis zu 5 Stunden betragen, was den Anforderungen von Hochdurchsatzexperimenten gerecht wird und Signalunterschiede vermeidet, die durch den Zeitunterschied zwischen der ersten und der letzten Vertiefung aufgrund einer großen Anzahl von Proben verursacht werden, wodurch stabilere und zuverlässigere Ergebnisse gewährleistet werden.
Starkes Fluoreszenzsignal: Der Signalwert kann 8 Größenordnungen erreichen und bietet ein großes Erkennungsfenster und eine starke Datenunterstützung für ein frühes Arzneimittelscreening und eine Wirksamkeitsbewertung.
Einfache Bedienung: Durch die einstufige Bedienung werden komplizierte experimentelle Verfahren vermieden. Fügen Sie einfach das Nachweisreagenz hinzu und warten Sie 5 Minuten, bevor Sie die Maschine zur Erkennung starten.
Mehrfachauswahl: Entsprechend den unterschiedlichen Anwendungsszenarien stehen drei verschiedene Produkte zur Verfügung, die basierend auf den experimentellen Anforderungen an Signalwert und Signalstabilität ausgewählt werden können.
Produktdaten
01 Leistungsvergleich für
Die Verifizierung von drei Arten von Assay-Kits wurde an Zelllinien durchgeführt, die Glühwürmchen-Luciferase stabil exprimieren, und die Ergebnisse zeigten, dass das Produkt Bright-One Step höhere Signalwerte aufweist; das Produkt Steady-One Step hat eine längere Signalhalbwertszeit und stabilere Signale; das Produkt Bio-One Step hat nicht nur hohe Signalwerte, sondern behält auch eine längere Signalhalbwertszeit bei.
Abbildung 1. Leistungsvergleich verschiedener
02 Vergleich des
Bei Verwendung von
Abbildung 2. Vergleich des
03
Das
Abbildung 3.Wiederholter Gefrier-Auftau-Test des
Vorgehensweise
01 Zelltransfektion
Geben Sie das Reagenz direkt zur Zellsuspension hinzu, pipettieren Sie dann fünfmal auf und ab, um eine gründliche Durchmischung sicherzustellen, und warten Sie fünf Minuten, um eine vollständige Zelllyse zu ermöglichen.
02 Probenbeladung
Pipettieren Sie 100 μL der Mischung (Nachweisreagenz + Zellkulturmedium) in jede Vertiefung der Nachweisplatte.
03 Fluoreszenzdetektion
Stellen Sie die Parameter am Plattenlesegerät ein. Legen Sie die Detektionsplatte in das Plattenlesegerät, lassen Sie sie einige Sekunden lang vibrieren und fahren Sie dann mit der Detektion fort.
Produktliste
| Produktkategorie
| Produktname | Produktcode | Produktspezifikationen |
| Luciferase Reportergen-Assay-Kit | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Dual-Luciferase Reportergen-Assay-Kit
| 11402ES60/80 | 100 t/1000 t | |
| 11405ES60/80 | 100 t/1000 t |