Produkteinführung

Kollagenasen sind eine Klasse von Endonukleasen, die spezifisch die Sequenz Pro-X-Gly-Pro erkennen (die häufig in Kollagen vorkommt, in anderen Proteinen jedoch selten ist). Sie spalten die Peptidbindung zwischen der neutralen Aminosäure (X) und Glycin (Gly) in dieser Sequenz und können Kollagen im Bindegewebe hydrolysieren.

Viele Proteasen sind in der Lage, einzelsträngige und denaturierte Kollagenpeptide zu hydrolysieren, doch Kollagenase ist die einzige Protease, die natürliche Kollagenfasern mit einer dreisträngigen, superspiralisierten Struktur abbauen kann. Sie kommt häufig im Bindegewebe vor. Die wirksamste dieser Proteasen ist die „rohe“ Kollagenase, die vom anaeroben Bakterium Clostridium histolyticum abgesondert wird.

Yeasen-Kollagenase wird aus Clostridium histolyticum gewonnen, einem „groben“ Enzymextrakt, der nicht nur Kollagenase enthält, die natürliches Kollagen und retikuläre Fasern abbauen kann, sondern auch einige andere Proteasen wie Polysaccharidasen, Lipasen usw., die andere Proteine, Polysaccharide und Lipide in der extrazellulären Matrix von Bindegewebe und Epithelgewebe wirksam hydrolysieren können, sodass er sich besser für die Gewebeverdauung eignet.

Derzeit wird die auf dem Markt erhältliche bakterielle Kollagenase im Wesentlichen nach den unterschiedlichen Aktivitäten der Kollagenase in fünf Typen unterteilt: Kollagenase Typ I, Typ II, Typ III, Typ IV und Typ V.

Auswahl der Kollagenase

Produktname	Aussehen	Enzymaktivität	Geltungsbereich
Typ I Kollagenase）	Braunes oder hellbraunes kristallines Pulver	≥250 U/mg Feststoff	Enthält Aktivitäten (Kollagenase, Caseinase, Clostridien und Trypsin) zur Isolierung von Epithel-, Lungen-, Fett- und Nebennierengewebezellen.
Typ II Kollagenase）	Braunes oder hellbraunes kristallines Pulver	≥125 U/mg Feststoff	Enthält mehr Clostridasaktivität und eignet sich zur Isolierung von Leber-, Knochen-, Schilddrüsen-, Herz- und Speicheldrüsengewebezellen
Typ III Kollagenase）	Braunes oder hellbraunes kristallines Pulver	≥100 U/mg Feststoff	Es weist eine geringe proteolytische Aktivität auf, die für den Verbindungsteil des Verdauungsgewebes wirksam ist, und wird häufig für die Dissoziation von Säugetiergewebezellen verwendet
Typ IV Kollagenase）	Braunes oder hellbraunes kristallines Pulver	≥125 CDU/mg Feststoff*	Enthält eine geringe Trypsinaktivität und wird häufig bei der Zellpräparation zur Gewährleistung der Insel- und Rezeptorintegrität verwendet
Typ V Kollagenase）	Braunes oder hellbraunes kristallines Pulver	≥125 CDU/mg Feststoff*	Enthält mindestens 7 Proteasekomponenten, die zur Isolierung von Pankreasinselgewebe und zur Trennung von Bindegewebe in Einzelzellen verwendet werden können

*CDU = Kollagenverdauungseinheiten

Produkteigenschaften

Hohe Verdauungseffizienz: Der Rohenzymextrakt von Clostridium histolyticum hat eine hohe Verdauungseffizienz für Gewebe.
Abhängig von Aktivatoren: Kollagenase ist auf die Aktivität aktivierender Enzyme wie zweiwertiger Kationen wie Ca angewiesen.²⁺und Zn²⁺.
Beeinflusst durch Inhibitoren: Zu den Inhibitoren der Kollagenase gehören EDTA, EGTA usw.; der zweite sind Schwermetallionen (Hg²⁺, Pb²⁺, CD²⁺); Es gibt auch einige chemische Wirkstoffe wie Cystein, Histidin, DTT, 2-Mercaptoethanol, o-Phenanthrolin usw., die ebenfalls eine hemmende Wirkung auf die Kollagenase haben.
Hohe Störfestigkeit: Kollagen wird durch das zur Zellkultivierung verwendete Serum nicht beeinträchtigt.

Vorsichtsmaßnahmen für die Anwendung

Anwendung: In Hank's, Earle's oder anderen ausgewogenen Salzlösungen auflösen, die empfohlene Arbeitskonzentration beträgt 0,05 % bis 0,5 % (Gew./Vol.)
Lagertemperatur: 2-8°C
Anwendungsvorschläge:

(1) Für die Untersuchung der Struktur und Biosynthese von Kollagen werden häufig Kollagenasepräparate mit höherer Reinheit verwendet, wobei auf andere proteolytische Aktivitäten verzichtet wird.

(2) Zur Gewebedissoziation werden häufig Rohkollagenasepräparate wie Elastase, Trypsin oder Papain verwendet.

Häufig gestellte Fragen

Schlechte Verdauung während des Experiments

(1) Wenn die Ursache eine schwache Enzymaktivität oder ein Mangel an Calciumionen ist, sollte die Kollagenase bei niedriger Temperatur und unter trockenen Bedingungen gelagert werden. Die Kollagenaselösung sollte nach der Aliquotierung eingefroren werden.

(2) Wenn es durch unzureichende Calciumionen verursacht wird, sollte die Konzentration der Calciumionen in der Kollagenaselösung 5 mM betragen

Beim Gebrauch kommt es zum Zelltod

(1) Bei einem Überschuss an Protease sollte die Protease-Kontaktzeit verkürzt oder Albumin oder inaktiviertes Serum zugegeben werden

(2) Wenn sich der pH-Wert ändert, sollte ein Puffer (z. B. HBSS) verwendet werden. Überprüfen und korrigieren Sie Ihren pH-Wert regelmäßig.

(3) Bei Sauerstoffmangel sollte die Verdauungslösung mit steriler Luft belüftet werden

Während des Experiments wurden Zellen beschädigt

Wenn es durch zu viel Protease verursacht wird, sollte die Menge an Protease reduziert oder Albumin oder inaktiviertes Serum hinzugefügt werden

Bestellung

Katalognummer	Produktname	Größe
40507ES60	Kollagenase I	100 mg，1 g
40508ES60	Kollagenase II	100 mg，1 g
40509ES60	Kollagenase III	100 mg
40510ES60	Kollagenase IV	100 mg，1 g
40511ES60	Kollagenase V	100 mg

Katalognummer	Produktname	Größe
40123ES60	PerfCel™l Trypsin-EDTA (0,25 %), Phenolrot	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Trypsin-kein EDTA (0.25%), kein Phenolrot	100 ml
40126ES60	PerfCell™ Trypsin (0,25 %), Phenolrot	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0,25 %), Phenolrot	100 ml
40101ES25	Trypsin 1:250 (Pulver)	25 g
40512ES10/60	PerfCell™ rekombinantes Trypsin (Pulver)	10 mg/100 mg
20416ES60	Rekombinantes Trypsin (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40506ES60	AKKUTASCHE	100 ml
40104ES60/80	Dispase II	100 mg/1 g

Kollagenase ---- Ein Verdauungsinstrument für Tiergewebe